摘要：研制无毒、高转染效率的聚乙烯亚胺(PEI)阳离子纳米粒,Zeta粒度仪、紫外可见光谱表征纳米粒,琼脂凝胶电泳阻滞实验分析报告基因质粒pEGFP-N1与PEI及聚乙二醇(PEG)修饰后PEI的复合能力及抗DNAseI酶降解能力,MTT检测纳米粒的细胞毒性,体外转染试验及流式细胞仪评价纳米粒的体外转染活性。以pEGFP-N1质粒与PEI阳离子纳米粒的电荷比(N/P)、PEG与PEI的接枝比例和质粒转染剂量为条件,转染效率为指标,正交设计法优化pEGFP-N1/PEI-PEG阳离子纳米粒介导的肝癌细胞基因转染效率。结果显示,PEG修饰后的PEI纳米粒对肝癌细胞毒性较小,粒径及电位较稳定,对质粒有较好的复合能力和抵制DNAseI酶降解能力;pEGFP-N1/PEI的N/P比为40∶1、基因质粒剂量为每孔6μg时,纳米粒复合物的转染效率最高为91%。PEG修饰后的PEI是一种高效、无毒的非病毒载体,能有效将基因转染入肝癌细胞,优化实验条件可提高转染效率。

摘要：以罗丹明荧光团作为骨架,通过点击化学的方法引入半乳糖基,设计合成了一种具备肝癌细胞靶向功能的荧光探针Glycosyl Rhodamine(GR)。糖基的引入,使得探针具有较好的水溶性和生物靶向性。在分子溶液水平测试了探针GR的紫外和荧光光谱,发现探针GR对Hg^(2+)选择性良好,其它金属阳离子无干扰,并具备较好的浓度依赖关系。利用核磁滴定实验研究了探针与Hg^(2+)的响应机理。细胞毒性实验表明,探针GR具有良好的生物相容性,当探针浓度高达100μmol/L时,细胞存活率大于100%。基于探针分子内半乳糖对肝癌细胞表面糖蛋白受体的特异性识别,利用Hg^(2+)的配位作用,实现了HepG2肝癌细胞的靶向标记。

摘要：光动力疗法(PDT)作为一种迅速发展的传统替代疗法,在抗癌治疗中显示出巨大的潜力。为增强靶向性和提高光催化杀伤效率,本研究设计了一种新型光敏剂Fe_3O_4-Ti O_2磁性纳米粒。在不同外磁场下,考察其在可见光和紫外光激发下对肝癌细胞的杀伤效应。同时利用流式细胞术检测纳米Fe_3O_4-Ti O_2对肝癌细胞凋亡率、细胞周期和线粒体膜电位的影响。根据纳米Fe_3O_4-Ti O_2和肝癌细胞的作用方式探讨其抗癌机制。结果表明,可见光激发纳米Fe_3O_4-Ti O_2可以杀伤癌细胞,且其杀伤效率与紫外光激发下无明显差别。此外,Fe_3O_4-Ti O_2比Ti O_2具有更高的细胞摄取率,从而使其具有更高的选择性和光催化杀伤效率。其作用机制是光催化纳米Fe_3O_4-Ti O_2产生活性氧ROS抑制癌细胞,然后通过阻滞细胞周期G_0/G_1期,降低线粒体膜电位,线粒体去极化,最终诱导细胞凋亡。

摘要：氟喹诺酮类药物是广泛使用的临床一线抗感染药物,经过结构修饰有可能将此类药物改造成为抗肿瘤药物[1-2]。本研究用酰胺基作为氟喹诺酮C-3羧基的电子等排体,绕丹宁环为其修饰基,对氟苄叉基为修饰基的功能修饰侧链构建绕丹宁不饱和酮骨架,运用药效团拼合药物设计原理,设计合成了一系列N-(5-芳苄叉基绕丹宁)氟喹诺酮类衍生物,并进行了抗肿瘤活性筛选。结果显示,该类衍生物均具有较好的抗肿瘤活性,其中1-环丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-N-(5-对氟苄叉基-绕丹宁-3-基)-喹啉-4-(1H)-酮-3-甲酰胺(HGQ-15)活性最强,IC50值达3.89~4.53μmol·L^-1,具有进一步研究和开发的价值。在对新合成化合物的研究过程中,发现抗肿瘤药能够诱导肿瘤细胞自噬,并对肿瘤细胞的增殖和凋亡产生影响[3]。自噬现象可能是影响药物疗效和产生耐药机制的重要因素,是药物研究开发中需要重视的问题[4]。本文通过检测HGQ-15对人肝癌SMMC-7721细胞株的作用,初步研究了HGQ-15抑制细胞增殖,促进细胞凋亡以及与自噬作用的关系,为该类化合物抗癌作用的应用和开发提供一定的体外实验依据。

摘要：目的 :设计DNA微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制。方法 :制备了包含有与细胞周期和DNA损伤调控检测相关的 2 4个基因的cDNA微阵列 ,选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 ,通过流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 ,提取药物作用后的RNA ,反转录后标记探针与微阵列杂交 ,检测中药作用细胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响。结果 :4种中药作用SMMC 772 1后 ,细胞周期基因和损伤检测点基因均有不同程度改变 ,表现为部分上调 ,部分下调 ,这些和流式细胞术检测的结果是相符合的。结论

摘要：目的:利用Y染色体体细胞的特异性来寻找卵圆细胞分化为肝癌细胞的直接证据,从而为卵圆细胞源性的研究及临床肝癌治疗方法提供理论依据．方法:选择健康♂ Wistar大鼠30只饲喂每千克含0．6 g 3-甲基-4-二甲基偶氮苯(DAB)的饲料 4 wk,建立卵圆细胞增生的♂ Wistar大鼠动物模型．卵圆细胞的分离、提取和鉴定(光镜、电镜、免疫组化)．将实验用♀Wistar大鼠60只随机平分成对照组和实验组．对照组不接种细胞悬液,连续喂含DAB饲料14 wk．实验组按 25 mg／kg体重戊巴比妥腹腔麻醉,消毒开腹, 用吸取♂ Wistar大鼠卵圆细胞悬液,接种至肝脏包膜下,每点106个,之后连续喂含DAB饲料 14 wk,促进肝肿瘤的生成．从GenBank调出雄性大鼠的SRY基因,利用引物设计软件设计引物片断．14 wk后提取两组大鼠肝肿瘤组织的基因组DNA,利用所设计的引物进行PCR扩增,对PCR产物进行电泳分析．结果:光镜下可找到卵圆细胞,核仁小而清晰,胞质少,细胞体积较小,约为正常肝细胞的 1／3,直径约9-12 μm不等．电镜下观察可见细胞表面少量短而小的微绒毛突起,呈现未分化细胞的形态．免疫组化观察肝卵圆细胞胞质 c-kit染色呈棕黄色阳性信号．14 wk后对照组和实验组共计60只大鼠均见肝脏肿瘤生成,肿瘤组织在外观上和性状上无显著性差异．实验组电泳后见与设计片断长度相符的电泳阳性条带．结论:大鼠的卵圆细胞可以分化为肝癌细胞．为卵圆细胞源性肝癌细胞的假说提供实验依据．

摘要：目的筛选有效抑制肝癌细胞hTERT表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测其对hTERT蛋白表达、细胞凋亡的影响。方法设计并合成针对hTERT的6条siRNA双链及一条阴性对照siRNA,以LipofectaminTM2000转染至肝癌SMMC-7721细胞。用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B法,SRB法)测定干扰后细胞增殖的变化,RT-PCR测定hTERTmRNA的表达,筛选出有效序列。有效序列转染后,进一步采用Western blot法检测hTERT蛋白水平的变化,AnnexinV-FITC/PI双染、流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果以SRB和RT-PCR法筛选出的两条有效siRNA:siRNA-2和siRNA-6,能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,对细胞的抑制率分别为45.3%、38.2%,能高度沉默hTERT mRNA的基因,沉默率分别为80%、75%。二者还能明显下调hTERT蛋白表达(P<0.05),明显增加凋亡,凋亡率分别为20.23%、17.94%。结论 siRNA-2和siRNA-6能特异性沉默肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达,抑制增殖,降低hTERT蛋白水平,诱导凋亡,为肝癌基因治疗提供了有力的实验依据。

摘要：目的构建靶向叉头框蛋白J2(FOXJ2)的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因敲除质粒,探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白(TGF-β/Smads)表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA(sgRNA)序列,与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌,挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6,对照组只转染空载体,48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用,同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况;MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs,其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达,同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组,差异显著;并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达,抑制细胞的增殖,推测在体情况下,肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性,FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。

摘要：目的初步探索醛缩酶A基因敲除与过表达对肿瘤细胞生长的影响,确定无氧代谢过程中醛缩酶与肿瘤生长代谢之间的关系。方法通过表达载体质粒构建与慢病毒感染构建稳定表达的醛缩酶A过表达与基因敲除细胞,在基因和蛋白水平验证重组细胞,观察细胞增殖速度改变。结果实时定量PCR结果显示,过表达细胞系中目的基因的表达约为正常细胞的2倍;根据醛缩酶A RNA序列设计5个干扰靶点,其中醛缩酶A4对于目的基因的干扰效果最为显著,重组后的细胞醛缩酶A mRNA表达水平为正常细胞的1/50。与正常对照组相比,醛缩酶A过表达细胞在48 h增殖率增加40%,增殖率与对照组相比有显著性差异(P<0.05);醛缩酶A RNA干扰表达细胞在24 h增殖率降低86%,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论醛缩酶A的表达差异对肝癌肿瘤细胞生长有明显影响。

摘要：研究两种从盘花垂头菊中分离出的高含氧甜没药烯型倍半萜(HOBS)化合物对肿瘤细胞的影响.结果显示HOBS能够诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡.单细胞电泳实验证明HOBS能够以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞损伤,流式细胞技术显示HOBS能够以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞凋亡,凋亡率达到38.9%,c_i(Ca^(2+))的测定显示HOBS能够诱导c_i(Ca^(2+))升高,所有的结果证明HOBS能够诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡.提示这两种化合物有抗人肝癌细胞的SMMC-7721活性,为抗肿瘤药物的设计提供了新的思路.