摘要：caspase-8能通过自身活化启动凋亡，并调节效应型caspase诱导凋亡发生。阻滞caspase-8表达可抑制caspase途径所致凋亡。TNF-α通过caspase-8途径可诱导肝细胞凋亡。故本研究设计合成了针对caspase-8 mRNA的shRNA真核表达载体，导入TNF-α所致的小鼠肝细胞损伤模型，研究shRNA对caspase-8基因转录后沉默的有效性。

摘要：目的:研究虫草菌丝治疗二甲基亚硝胺(DMN)模型大鼠肝纤维化有效组分及其作用机制。方法:大鼠ip 0.5%DMN 5 ***-1,每周连续3 d,共4周。造模结束后,模型大鼠随机分组,治疗组分别以虫草菌丝水煎液(CsB)及其组分(C12)以生药800 ***-1ig,每日1次,共2周;正常组及模型组以等量生理盐水ig。疗程结束后,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST),血清白蛋白(Alb)及血清总胆红素(TBiL)含量,检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、观察肝组织病理及胶原沉积变化,Western印迹法检测肝细胞生长因子α(HGF-α)的表达,TUNEL染色检测大鼠肝细胞凋亡并计算凋亡数量。结果:与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠血清ALT,AST活性、TBil含量和大鼠肝组织Hyp含量显著降低,Alb含量显著升高(P<0.05)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组的坏死出血、炎性细胞浸润、胶原增生、纤维间隔形成有所改善。与模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织的蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝细胞凋亡数量显著降低(P<0.01)。结论:CsB及C12能够显著改善肝功能,有显著抗肝纤维化作用。CsB和C12能促进HGF-α表达,抑肝细胞凋亡,使肝细胞凋亡和增殖达到平衡状态,阻断和逆转肝纤维化。

摘要：近年研究表明:肝细胞凋亡与网状支架破坏是肝纤维化形成的重要病理机制,抑制肝细胞凋亡及其支架结构破坏是防治肝纤维化的根本措施之一,TNF受体(TNF-R)半胱天冬酶(Caspases)通路是细胞凋亡的分子病理基础,ERK-MMP2途径是网状支架破坏的重要分子病理机制。在既往工作基础上,我们拟以抗纤维化有效中药-扶正化瘀方为对象,首先采用析因设计,动态观察扶正化瘀方影响肝细胞凋亡、网状支架破坏与纤维化之间的关系,继而探讨该方及其扶正与化瘀治法拆方对小鼠体内肝细胞凋亡与网状支架破坏的作用机制与治法特点。随后建立中药影响肝细胞凋亡的药物高内涵分析方法,探讨扶正化瘀方及其拆方对培养小鼠肝细胞TNF-R/Caspase通路信号分子的影响;并将经复方与拆方作用的凋亡肝细胞与原代肝星状细胞共培养,观察该方及其拆方通过抗肝细胞凋亡而影响肝星状细胞活化的作用。该项研究阐明了抗肝纤维化有效中药对肝细胞凋亡与支架破坏的作用机制与治法特点,拓展了抗肝纤维化的治疗新途径与药理研究新领域,为进一步开展中医药逆转肝硬化作用机制的研究奠定基础。

摘要：目的：研究针对大鼠凋亡基因Caspase-3设计的核酶（Rz107和Rz544）的体外转录，切割及活性鉴定。方法：大鼠Caspase-3基因的PCR片段克隆于T载体T7 启动子下游，32P标记的体外转录物作为靶RNA。设计合成并克隆针对大鼠Caspase-3 mRNA的核酶（Rz107和Rz544），32P标记转录,核酶与靶RNA按一定比例进行体外切割实验。 结果：Rz107 在37℃有活性。在一定温度范围内，其切割效率随温度升高而升高，最适温度为50℃。其米氏常数（Km）为14.13nmol/L, 酶催化反应速度常数（kcat）为2.31/min。而Rz544则无切割活力。 结论：体外制备的Rz107具有良好的特异催化切割活性，它有望通过切割Caspase-3而抑制凋亡发生，可发展为新一代抗肝内炎症的核酸药物。

摘要：探讨了祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎抑制CCl_4诱导的大鼠肝硬化形成的不同作用机制．采用方法为给大鼠先皮下注射CCl_4 3 mL/kg,然后注射50%CCl_4橄榄油溶液2 mL/kg,每周2次,第9周开始随机将大鼠分为模型对照组、下瘀血汤组及一贯煎组,药物干预的同时继续CCl_4诱导建立大鼠肝硬化模型,至12周末取材．检测指标为：肝组织病理学；肝组织羟脯氨酸含量；肝组织α-SMA,CD68,MMP-13,TIMP-1,TIMP-2蛋白表达；MMP-2,MMP-9的活性；肝细胞凋亡指数及Caspase-12,HGF_α蛋白表达．结果显示：(1)与正常大鼠比较,模型大鼠8周时α-SMA,CD68,TIMP-1蛋白表达显著增加,12周时显著高于8周模型对照组；MMP-13,HGF_α,TIMP-2蛋白表达逐渐降低,各时间点相互比较具有显著性差异；MMP-2,MMP-9活性4周时显著升高,8周时较4周略有升高,12周时显著高于8周模型对照组；肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量逐渐增加,且各时间点比较均具有显著性差异．(2)与同期模型对照组比较,干预组MMP-9活性及MMP-13,TIMP-2,HGF_α蛋白表达量均显著增加,其中下瘀血汤组MMP-9,MMP-13显著高于一贯煎组,一贯煎组TIMP-2,HGF_α显著高于下瘀血汤组；干预组MMP-2活性,TIMP-1蛋白表达显著降低,且一贯煎组显著低于下瘀血汤组；一贯煎组肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量显著减少．由此得出结论：祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎均可有效地抑制CCl_4诱导的大鼠向肝硬化发展,下瘀血汤的主要作用在于提高MMP-9的活性及MMP-13的蛋白表达,其祛瘀作用的主要机制是促进胶原纤维的降解；而抑制肝细胞凋亡和肝星状细胞的活化是一贯煎养阴的主要作用途径．