摘要：目的:基于肥大细胞/瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)调控功能性消化不良(FD)内脏高敏感,探讨电针“足三里”对FD的干预机制。方法:新生10d的SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、酮替芬组、足三里组,每组15只。采用碘乙酰胺联合夹鼠尾法制备FD大鼠模型。酮替芬组予腹腔注射酮替芬,1mg·kg^(-1)·d^(-1),注射14d;足三里组予电针双侧“足三里”穴,1次/d,连续14d。采用胃内球囊容积/压力(mL/mm Hg)的变化、腹部撤退反射(AWR)评分作为大鼠内脏高敏感评价指标;甲苯胺蓝染色法观察胃黏膜肥大细胞数量及脱颗粒情况;免疫荧光染色法观察胃组织TRPV1的阳性表达;Western blot法检测胃组织TRPV1和蛋白酶激活受体2(PAR2)蛋白表达;ELISA法检测胃组织P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量。结果:与正常对照组比较,模型组胃内球囊压力在50、60、70mm Hg时胃内球囊容积/压力降低(P<0.01),胃内球囊压力为40、50、60、70mm Hg时AWR评分升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,足三里组胃内球囊压力在50、60、70mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.01,P<0.05)、AWR评分降低(P<0.05,P<0.01),酮替芬组胃内球囊压力在60、70mm Hg时AWR评分降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃内球囊压力在70mm Hg时胃内球囊容积/压力升高(P<0.05)。正常对照组胃黏膜肥大细胞形态规则;模型组胃黏膜肥大细胞明显增多且脱颗粒状态明显;足三里组和酮替芬组胃黏膜肥大细胞明显减少且脱颗粒情况不明显。与正常对照组比较,模型组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均升高(P<0.01);与模型组比较,足三里组和酮替芬组胃组织PAR2、TRPV1蛋白表达水平和SP、CGRP含量均降低(P<0.01,P<0.05);与酮替芬组比较,足三里组胃组织SP、CGRP含量降低(P<0.05)。结论:电针“足三里”可能是通过降低胃黏膜肥大细胞活化和脱颗粒程度,调控胃组织PAR2、TRPV1蛋白的表达,降低传递伤害性痛觉信息的神经肽SP、CGRP的释放,起到对FD大鼠内脏高敏感的干预作用。

摘要：目的采用自身配对设计与完全随机设计相结合的方法,借助肥大细胞甲苯胺蓝染色手段,观察眼周穴区、非穴区皮下肥大细胞分布规律;通过检测血清及眼周皮肤组织中IgE、组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量,探讨针刺对大鼠眼周穴区、非穴区皮下肥大细胞活化的调控作用。方法SPF级SD大鼠30只,采用完全随机方法将大鼠随机分为3组:空白对照组,针刺穴区组,针刺非穴区组,每组10只。3组大鼠穴区与非穴区位置进行自身配对。空白对照组大鼠不做处理;针刺穴区组和针刺非穴区组大鼠每8 h进行1次眼针干预,共计干预3次。末次针刺后2 h,各组大鼠麻醉状态下,经腹主动脉采集全血,并采用过量麻醉法处死大鼠,以大鼠眼球为中心,环切眶内距离睑缘1~3 mm范围的皮肤组织,同时环切眶外区域距离睑缘4~6 mm范围的皮肤组织,两区域皮肤组织均等分两份,一份固定于4%多聚甲醛溶液中,另一份制备组织匀浆备用。采用甲苯胺蓝染色法,观察各组大鼠两区域皮肤组织中肥大细胞数量及形态;采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清和皮肤组织中的IgE、组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量。结果各组大鼠皮肤组织甲苯胺蓝染色结果显示:3组大鼠眶内区域皮肤组织中肥大细胞密集,眶外区域稀疏,眶内皮肤组织中肥大细胞数量明显多于眶外区;空白对照组大鼠眶内和眶外区域皮肤组织中肥大细胞成正圆或椭圆形,边界清晰;针刺穴区组大鼠眶内皮肤组织中肥大细胞密集,且形态不规则,肥大细胞周围可见颗粒散落的脱颗粒状,而眶外区皮下肥大细胞大多数形态规则,偶见脱颗粒现象发生;针刺非穴区组大鼠眶内皮肤组织中肥大细胞密集,大多数形态规则,偶见脱颗粒现象发生,眶外区皮肤组织中肥大细胞分布稀疏,呈明显的脱颗粒改变,形态不规则。各组大鼠血清及皮肤组织中IgE、组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量检测结果显示:各组大鼠血清及皮肤组织中IgE,血清中组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量无明显改变,组间比较无统计学差异;空白对照组和针刺非穴区组大鼠眶内、眶外皮肤组织中组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量差异无统计学意义;针刺穴区组大鼠眶内皮肤组织中组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量均明显高于眶外皮肤组织(P<0.01),差异有统计学意义;组间比较,针刺穴区组大鼠眶内皮肤组织中组胺、白三烯、花生四烯酸、前列腺素D2、血小板活化因子含量均明显高于空白对照组和针刺非穴区组大鼠眶内、眶外皮肤组织(P<0.01),差异有统计学意义。结论(1)大鼠眼周穴区有肥大细胞聚集现象,聚集程度明显高于眶外非穴区区域;(2)针刺可以诱导肥大细胞脱颗粒,释放组胺等生物活性物质;(3)穴区肥大细胞富集及针刺对肥大细胞的活化作用可能是针灸发挥治疗作用的机制之一。

摘要：目的观察丹参酮ⅡA灌胃对高脂饲养Apo E-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块形成及血管外膜肥大细胞活化的影响。方法采用16只8周龄雄性Apo E-/-小鼠和8只相匹配的C57BL/6小鼠,按随机区组设计法分为3组:对照组(C57BL/6小鼠予羧甲基纤维素灌胃)、模型组(Apo E-/-小鼠予羧甲基纤维素灌胃)、模型+丹参酮ⅡA组(Apo E-/-小鼠予30 mg/kg丹参酮ⅡA灌胃)。各组均给予高脂饲料喂养26周。取材前6周开始灌胃给予丹参酮ⅡA/羧甲基纤维素。取材收集血清及颈动脉组织,ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;取同一侧颈总动脉进行石蜡包埋切片,HE染色评估颈动脉狭窄程度,Movat染色评估斑块进展,甲苯胺蓝染色显示血管外膜肥大细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测5-羟色胺(5-HT)、TNF-α、IL-6表达情况;取另一侧颈动脉剥取血管外膜组织后,实时定量PCR检测肥大细胞标志分子Fcer1a表达情况。结果高脂喂养26周后,模型组小鼠颈动脉出现严重的动脉粥样硬化斑块,模型+丹参酮ⅡA组动脉粥样硬化斑块形成所导致的颈动脉狭窄百分比低于模型组[(58.48±8.07)%比(80.31±4.08)%,P<0.05]。与模型组比较,模型+丹参酮ⅡA组血清TNF-α[(12.39±1.62)pg/ml比(17.44±1.42)pg/ml]和IL-6[(116.24±12.16)pg/ml比(166.05±19.09)pg/ml]水平较低,血管外膜TNF-α蛋白表达[(20 145±1 556)比(25 288±1 671)]和IL-6[(25 688±1 604)比(35 286±4 198)]较低(P均<0.05);模型+丹参酮ⅡA组血管外膜肥大细胞数量、活化百分比、5-HT表达和Fcer1a mRNA水平均较低(P均<0.05)。结论丹参酮ⅡA可减轻高脂饲养Apo E-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块的形成。血管外膜肥大细胞数量及活化比例降低,炎症细胞因子释放减少,血管局部炎症反应减轻可能是丹参酮ⅡA抗颈动脉粥样硬化的作用机制之一。

摘要：目的测定变态反应性疾病患儿血浆中肥大细胞羧肽酶和类糜蛋白酶的含量,评价其在变态反应性疾病诊断中的意义。方法采用ELISA法检测59例变态反应性疾病儿童和53例健康儿童血浆中肥大细胞羧肽酶和类糜蛋白酶水平。结果变态反应性疾病患儿血浆羧肽酶和类糜蛋白酶含量分别为1.089±0.752 ng/mL、0.905(0.375～2.318)ng/mL,显著高于健康儿童[0.593±0.380 ng/mL、0.454(0.097～1.077)ng/mL],差异有统计学意义(P<0.05)。变态反应性疾病患儿血浆羧肽酶水平与类糜蛋白酶水平呈显著正相关(r=0.684,P<0.01)。结论变态反应性疾病儿童血浆中肥大细胞羧肽酶和类糜蛋白酶水平增高,提示二者可作为变态反应性疾病的诊断的有意义的指标。

摘要：肥大细胞(MC)是一种包含嗜碱性颗粒的多功能细胞,广泛存在于人和动物体内.MC能分泌多种介质,参与多种生理反应,与动物某些变态反应性疾病、寄生虫感染、某些非特异性炎症和肿瘤性疾病有密切关系.要揭示MC在奶牛生殖中的各种作用,就必须首先揭示其在子宫内不同部位的分布规律,这是研究子宫内MC的基础性工作.为此,特设计并实施了本试验.

摘要：目的本研究探讨肥大细胞PAS-甲苯胺蓝染色法的临床表现及玻片制作的实验微课设计。方法采用传统的染色方法为基础,合理融入新方法引导并激发学生的学习兴趣。结果能帮助学生的更好掌握重点和操作过程,培养学生实践操作能力,又能锻炼学生的创新思维,引导学生探究式、讨论式学习。结论通过实验微课的学习,医学生能提升自己的创新思维能力和实验动手能力。

摘要：药物过敏及其导致的过敏性休克对医患双方都是很严重问题,过敏的发生不可预测,且可危及生命。随着全世界新药新化合物的不断出现,药物过敏问题变得越来越常见和突出。目前药物过敏的诊断方法主要是皮试、皮内点刺、皮肤斑贴、激发试验和血液特异性IgE水平,但这些方法都有一定的限制,而皮试等体内试验本身就具有极大的风险,所以研究诊断生物标志物以及建立体外诊断方法和过敏预测系统则尤其必要。肥大细胞和嗜碱细胞是过敏反应的核心细胞,其激活释放化学介质是这些细胞的主要特征。近10年来,对于药物过敏及过敏性休克发生的细胞激活机制、细胞特异性介质的特征以及作为诊断标志物的研究有了很大的进展,其中包括肥大细胞特异性蛋白酶:类胰蛋白酶、类糜蛋白酶、羧肽酶;嗜碱细胞活化的细胞表面标志物CD63、CD203C和特异性的basogranulin;还有其他和过敏症状相关的体内化学介质,如组胺、二肽肽酶Ⅰ、血管紧张素转化酶和缓激肽等。由于过敏反应是一个复杂的快速的病理反应,其诊断需要多重复合标志物的协同使用,所以荧光染料、电化学和生物信息科学的交叉融合和技术设计是快速即时体外诊断方法的发展趋势,对过敏体质及症状的及时发现和病情的早期控制和对人类生活质量的提高都有着重要的意义。

摘要：目的为哮喘等Ⅰ型变态反应性疾病的靶向信号转导分子治疗寻找药物设计新靶点提供基础。方法应用钙离子荧光指示剂Fluo-3，通过流式细胞仪和激光共聚焦荧光显微镜分析肥大细胞RBL-2H3活化时细胞内钙离子浓度（［Ca2＋］i）的变化和细胞外钙离子浓度对释放组胺的影响，观察钙离子信号与肥大细胞活化的关系。结果抗原可使致敏RBL-2H3细胞迅速释放组胺和升高［Ca2＋］i，90~110s时最强达（525±42）nmol／L（n＝12），激光共聚焦荧光显微镜观察到胞浆内充满绿荧光；胞外加入钙离子螫合剂EDTA后［ca2＋］i为（80±4）nmol／L，与基础［Ca2＋］i（79±3）nmol／L差异无显著性（P＞0．05，n＝12）；但显著增高磷酸酪氨酸浓度；加入佛波酯后再加入DNP－BSA，前后［Ca2＋］i差异无显著性（P＞0．05，n＝8）。结论　钙离子参与致敏肥大细胞的抗原活化过程。

摘要：目的:观察力学刺激对肥大细胞组胺释放的影响以探讨推拿手法的作用机制。方法:应用自行设计的变频气体驱动控制仪模拟推拿手法刺激,对离体培养的肥大细胞给以不同时间的机械力刺激,观察肥大细胞组胺释放量的变化。结果:离体肥大细胞不受任何刺激时也稳定地释放组胺;随着对肥大细胞模拟推拿刺激时间的延长,组胺的释放量逐渐增加,至10 min时组胺释放量大于空白对照组(P<0.01)。结论:推拿可促进肥大细胞释放组胺,产生相应的生物学效应。

摘要：根据肥大细胞Chymase的氨基酸序列，借助ProScale服务器，采用Hopp＆Woods的亲水性方案、Janin可及性参数、Welling抗原性参数及吴氏综合预测方法对肥大细胞类糜蛋白酶的二级结构及B细胞表位进行预测．结果推测最有可能的B细胞表位位于类糜蛋白酶的N端第5～12区段、第94～101区段、第172～179区段和第199～206区段内或它们的附近．本研究结果有助于确定肥大细胞类糜蛋白酶的B细胞表位，可为深入研究类糜蛋白酶的结构与功能及新型抑制剂的设计提供线索．