摘要：目的：建立实验动物冷冻资源（胚胎、精子等）常见病原菌的微量、快速监测方法。方法以实验动物三个常见病原菌（金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和乙型溶血性链球菌）为研究对象，分别提取三个阳性菌株的DNA，通过引物设计和相应PCR条件的优化，建立三种阳性菌株的PCR检测方法。然后提取冷冻资源（胚胎、精子等）中的DNA，按照三个阳性菌的PCR条件进行检测，并将一部分样品DNA用荧光定量PCR方法进行检测。结果①成功建立三个阳性菌株的PCR检测方法。三种病原菌的最低检测浓度，金黄色葡萄球菌为4?19×10－5 ng／μL，肺炎克雷伯氏菌为1?98×10－5 ng／μL，乙型溶血性链球菌为1?07×10－3 ng／μL．②通过普通PCR和荧光定量PCR方法均未检测出样品中三种阳性菌的存在。结论建立了小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌微量、快速检测方法。

摘要：目的建立三重qPCR法(实时荧光定量)快速检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,期以快速精准诊断呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染,为早期精准治疗提供依据。方法根据GenBank公布的肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因序列选择保守区设计测序引物,高保真扩增东莞樟木头医院分离到的95株肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,经测序比对后,避开变异区和突变点分别设计检测引物和探针,建立三重qPCR方法直接检测临床呼吸道样本,并与培养及测序法比较,验证其诊断灵敏度和特异性等性能指标。结果三重qPCR法检测肺炎克雷伯氏菌rcsA和23sRNA基因,其检测下限低至2cfu/PCR,检测灵敏度98.9%(94/95),检测特异性97.9%(93/95);诊断灵敏度98.6%(424/430),诊断特异性98.8%(2295/2324);从样品处理到报告结果≤1.2h。结论该方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可实现呼吸道肺炎克雷伯氏菌感染的快速与精准诊断,为早期精准治疗赢得时间。

摘要：【目的】建立天然植物化妆品中3种动植物源致病菌的快速、敏感、特异的多重PCR诊断检验方法。【方法】设计肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformisin)3种菌的特异性PCR引物,通过单一、双重及三重PCR反应检测。【结果】种动植物源致病菌的单一、双重和三重PCR均成功扩增出目的片断,没有非特异性扩增。通过对人工感染膏状染发剂的PCR检测进行灵敏度验证,得出三种菌检出限:Klebsiella pneumoniae为4.5×10 CFU/m L;Pseudomonas aeruginosa为6×102CFU/m L;Bacillus licheniformisin为1×10 CFU/m L。【结论】建立的多重PCR反应系统具有较好的特异性和灵敏性,为天然植物型化妆品中常见致病菌的检测提供了快速、简便、可靠的方法。

摘要：为建立检测家兔铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica)的多重PCR检测方法,参考GenBank数据库中登录的铜绿假单胞菌gyrA基因、肺炎克雷伯氏菌rcsA基因、多杀性巴氏杆菌KMT1基因和支气管败血波氏杆菌flaA基因,设计4对特异性引物,建立能同时扩增4种家兔呼吸道致病菌核酸的多重PCR检测方法,并进一步对其特异性和敏感性进行检测。特异性检测结果显示,该方法能同时扩增出4种家兔呼吸道致病菌的核酸,而对兔出血症病毒、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌与肠炎沙门菌无特异性扩增条带,说明该方法特异性良好。敏感性检测结果显示,该方法对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌、多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌检测的灵敏度分别为2.5×10^(-1),2.5×10^(0),2.5×10^(-2),2.5×10^(-2)μg/L。用建立的多重PCR方法对临床样本进行检测,结果表明,该方法可以快速并且特异地鉴别4种细菌病原的单独或混合感染,与单一PCR检测方法相比无显著性差异(P>0.05)。该方法的建立为家兔呼吸道疾病临床鉴别诊断和4种细菌病原的分离鉴定提供重要的技术手段。

摘要：利用一株肺炎克雷伯氏菌发酵木糖生产2,3-丁二醇,运用单因素试验和四因素三水平L9(34)正交试验设计的方法,探讨发酵pH、温度、装液量和转速对2,3-丁二醇产量的影响。结果表明:在木糖浓度80 g/L、接种量6%(体积分数)、初始pH值6.0、转速120 r/min、装液量80 mL/250 mL、35℃的条件下发酵84 h,木糖利用率为90%,2,3-丁二醇的质量浓度为33.0 g/L,得率为0.46 g/g,达到理论值的92%。