摘要：目的克隆肺炎衣原体基因CPn0308,表达融合蛋白,并制备抗体对其表达的内源性蛋白进行初步定位。方法根据STD基因库提供的信息设计引物,聚合酶链反应(PCR)克隆目的基因,用BamHI/NotI对克隆的目的基因和pGEX-6P2载体进行酶切,T4连接酶连接后,重组质粒经42℃转化XL1-blue细菌;用PCR进行初步筛选,交叉PCR对提取质粒进一步确定,最后对插入片断进行序列分析;用IPTG诱导阳性克隆的细菌使其表达GST融合蛋白,纯化后免疫小鼠制备抗体,使用IFA对内源性蛋白进行定位分析。结果克隆出肺炎衣原体基因CPn0308,全长为366bp,编码121个氨基酸;并表达了融合蛋白GST-CPn0308,分子量约为39kD;制备了抗体,IFA实验发现该蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜蛋白上。结论成功克隆肺炎衣原体基因CPn0308,其内源性蛋白初步定位于肺炎衣原体包涵体膜上。

摘要：目的探讨肺炎衣原体（Cpn）的套式聚合酶链式反应（nPCR）检测技术。方法根据Campbell克隆的CpnDNA序列设计套式引物，并建立nPCR反应体系。结果Cpn经nPCR扩增出现378bp的阳性条带，而沙眼衣原体和鹦鹉热衣原体以及其他用作特异性试验的微生物均不能扩增。3例阳性标本经DNA测序与Cpn（CWL—29）序对完全一致。CpnnPCR之灵敏度比传统PCR高100倍。各种呼吸系统病患儿咽拭子CpnnPCR阳性率明显高于健康儿童（P均＜0．01）。结论nPCR检测可能是Cpn感染的灵敏、特异、快速的诊断方法。

摘要：目的本试验的目的是建立可以快速鉴别诊断呼吸道感染肺炎衣原体(Cpn)、鹦鹉热衣原体(Cps)和沙眼衣原体(Ct)的三重TaqMan qPCR方法,有助于衣原体病的科学防控和指导临床用药,为公共卫生安全提供保障。方法选择Cpn、Cps和Ct特异基因ARGR、ompA和ORF8设计引物,建立标准曲线,优化反应条件和体系,验证方法的灵敏度、重复性;通过单独检测3种衣原体的荧光定量PCR方法验证本研究建立方法的准确性。结果结果显示,所建立的三重TaqMan qPCR方法特异度和重复性好,检测灵敏度分别为45 copy/μL(Cpn)、40 copy/μL(Cps)和43 copy/μL(Ct);利用该方法对600个临床样本进行检测,其检出率与参考方法比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明该方法检测结果可靠。结论本研究建立的检测呼吸道感染衣原体的三重TaqMan qPCR方法特异性和重复性好,灵敏度高,结果可靠,为呼吸道感染衣原体临床诊治和流行病学监控提供有力工具。

摘要：目的对肺炎衣原体AR39的RNase HIIa（CpRNase HIIa）进行克隆、表达和性质鉴定。方法按已知的CpRNase HIIa基因设计引物、扩增。用pET表达系统（表达载体、大肠杆菌BL21和Ni-NTA树脂）构建重组质粒，表达和纯化CpRNase HIIa。5’-^32P标记底物RNA／DNA，鉴定酶学性质。结摹CpRNase HIIa能切割RNA／DNA杂合体的寡聚核糖核苷酸链，产生3’羟基和5’磷酸基团的末端。CpRNase HIIa对Mg^2＋和Mn^2＋表现出明显的离子偏好性，且反应最适pH值为9～10。CpRNase HIIa切割12个碱基对的RNA／DNA杂合体底物的多个位点，但主要切割位点位于c10-g11之间与u7-g8之间。结论CpRNase HIIa可以有效的降解RNA／DNA杂合体的RNA链，于肺炎衣原体内担负着一定的生物学功能。

摘要：目的探讨肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae,CP)感染和脑梗死的关系。方法计算机检索MEDLINE、BIOSIS、重庆维普期刊数据库和中国期刊全文数据库,按纳入和排除标准收集研究CP和脑梗死关系的病例对照研究。检索时间范围为1990年1月至2007年12月。评价纳入研究质量后,采用RevMan4.2软件进行Meta分析。结果共纳入22个研究。Meta分析结果显示:①以微量免疫荧光(MIF)法检测CP抗体,当以IgA≥116为截断值时,脑梗死组CP血清学阳性率明显高于对照组[n=8,OR=2.18,95%CI(1.49,3.49)];以IgA≥132为截断值时,两组CP血清学阳性率差异无统计学意义[n=3,OR=1.47,95%CI(0.97,2.24)];以IgG≥132[n=6,OR=1.24,95%CI(0.82,1.86)]和IgG≥164[n=5,OR=1.23,95%CI(0.98,1.55)]为截断值时,两组CP血清学阳性率差异均无统计学意义;②以ELISA法检测CP-IgG抗体,脑梗死组CP血清学阳性率明显高于对照组[n=8,OR=2.40,95%CI(1.42,4.06)];③CP急性感染[n=4,OR=7.22,95%CI(2.68,19.49)]和慢性感染[n=4,OR=4.30,95%CI(3.40,7.40)]均与脑梗死的发病相关。结论①CP感染和脑梗死发病的相关性因血清阳性标准而异,采用血清IgA抗体为检测指标比IgG抗体更敏感,以血清IgA抗体滴度≥116为阳性判断标准时,显示CP感染和脑梗死相关;②以ELISA法检测CP-IgG抗体提示,CP感染和脑梗死相关,且结果稳定性较好;③CP急性和慢性感染均与脑梗死相关,但尚需大样本、科学设计的流行病学研究来进一步证实。

摘要：我们自行设计了针对沙眼衣原体、肺炎衣原体的特异性引物、Taq Man荧光探针，对这2种病原体核酸进行双重扩增荧光探针杂交检测，取得满意结果。

摘要：目的 探讨外周血单个核细胞（PBMC）中肺炎衣原体（Cpn）DNA的检测方法。方法 用淋巴细胞分层法和低渗溶血法提取PBMC。设计2对引物用套式PCR（nPCR）法测定150例冠心病患者（冠心病组）外周血PBMC中Cpn—DNA。同期临床55例非冠心病患者作对照组。结果 冠心病患者肺炎衣原体DNA阳性率32．7％，对照组阳性率为1．8％，两组差异显著（P〈0．001），OR26．2，95％CI 3．52～194．98。冠心病组中无症状组阳性率为29．1％，不稳定型心绞痛组阳性率为39．6％。急性心肌梗死组阳性率为29．9％，各亚组间差异不显著（P〉0．05）。结论 用nPCR法检测PBMC中Cpn-DNA，可为临床Cpn感染的诊断提供依据。

摘要：为建立一种更敏感的肺炎衣原体PCR检测方法 ,根据肺炎衣原体种特异性 5 3kDa蛋白基因序列设计一对引物5 3A、5 3B ,用PCR进行肺炎衣原体的检测研究。结果该引物仅能扩增肺炎衣原体DNA ,而与沙眼衣原体 ,鹦鹉热衣原体不反应 ,且对呼吸道常见病原菌之DNA的扩增亦为阴性 ,它能扩增出少至 10fg的肺炎衣原体DNA ,比我们以前合成的一对肺炎衣原体 16srRNA基因检测引物Cpnl、Cpn2更敏感 ,分别用这两对引物检测 30例有呼吸道疾患病人的鼻咽拭子标本 ,PCR的阳性符合率为 86 7%。表明 5 3A、5 3B是一对有效、实用。

摘要：目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点。

摘要：目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法。方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-timePCR,RT-PCR)的检测方法。同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析。对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性。结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法。结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段。