摘要：背景和目的双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,导致转录后水平的基因沉默。肺耐药相关蛋白的过度表达与白血病细胞多药耐药密切相关。本研究旨在探讨白行设计的LRP特异性siRNA能否发挥特异性降解LRPmR- NA、抑制蛋白质表达的作用。方法构建LRP真核表达载体pcDNA3．0／LRP。以pcDNA3．0／LRP、pEGFP-C1、二者的特异性siRNA分别组和,转染K562细胞。以RT-PCR方法和流式细胞术检测LRP mRNA和蛋白质水平的变化,以荧光显微镜检测GFP的表达的变化。结果K562细胞转染pcDNA3．0／LRP后,LRP mRNA水平明显升高,蛋白质表达由阴性转为阳性,阳性率30％;LRP特异性siRNA与pcDNA3．0／LRP共同转染K562细胞,LRP mRNA和蛋白质表达均明显降低,由阳性转为阴性;LRP特异性siRNA与pEGFP-C1共同转染K562细胞,GFP的表达与pEGFP-C1单独转染无差异;GFP特异性siRNA与pcDNA3．0共同转染K562细胞,LRP mRNA水平和蛋白质表达与pcDNA3．0／LRP单独转染无差异。结论 LRP特异性siRNA在K562细胞中能够特异性地降解LRPmRNA、抑制其蛋白质表达。该研究将为利用 siRNA逆转LRP引起的白血病细胞MDR奠定理论基础。

摘要：肺耐药相关蛋白（LRP）是与多药耐药（MDR）相关的糖蛋白。在儿童白血病及成人急性髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良.近年来，小分子干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）既可以特异地降解同源mRNA序列，从而有效阻止相应蛋白质的表达，并且与相应的单链反义核酸相比，siRNA造成的基因抑制效率更高、特异性更好，所需有效浓度却大大减低。国内外学者将siRNA技术应用于消减慢性粒细胞白血病bcr／abl基因以及逆转p蛋白引起的MDR等的研究，取得了良好的效果。我们设计合成了LRP特异性siRNA-LRP，并转染丁酸钠（NaB）诱导的高表达LRP的K562细胞模型（K562／N），观察siRNA-LRP抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果，以期为逆转LRP介导的肿瘤细胞MDR、提高难治性和复发性白血病患者疗效探索新的方法，并探讨以siRNA介导的RNAi用于肿瘤细胞MDR治疗的可行性。

摘要：目的:探讨肺耐药相关蛋白(lung resistance protein,LRP)在造血系统恶性肿瘤中的表达与临床耐药的关系。方法:应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测43例造血系统恶性肿瘤患者及38例普通血液病患者LRP的表达,同时应用MTT法测定20例患者对9种化疗药物的敏感性。结果:初治组LRP的阳性率为65.52 %;复发组为83.33 %;缓解组为37.50 %;对照组为31.58 %。初治组与对照组比较差异有显著性(P<0.01);复发组与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。初治组+复发组总阳性率68.57 %与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。LRP阳性与LRP阴性患者的首次完全缓解率(CR1)分别为38.46 %和85.71 %,两者的差异有显著性(P<0.05);体外药敏检测与治疗疗效有相关性,临床总符合率为75 %,阳性符合率为100 %,阴性符合率为66.67 %。结论:LRP是一个有效的化疗耐药指标;LRP高表达可导致临床耐药;同时将LRP的表达和体外化疗药物敏感性的检测作为耐药指标观察,对提高临床耐药判断的准确性,指导临床化疗方案的设计有积极的意义。

摘要：目的:探讨雷公藤甲素(TPL)体外给药对人骨肉瘤细胞阿霉素(ADR)耐药株(U2OS/ADR)多药耐药(MDR)的逆转作用及可能机制。方法:使用人骨肉瘤细胞株U2OS,利用浓度递增法建立耐药骨肉瘤细胞U2OS/ADR模型。设置空白组、对照组、TPL组和维拉帕米阳性对照组(VER组)。CCK-8法测定TPL处理对U2OS/ADR细胞增殖和ADR敏感性的影响。以罗丹明123(Rh123)作为内标,采用流式细胞术评估细胞P-糖蛋白(P-gp)外排作用。实时定量PCR(qRT-PCR)检测TPL对MDR1基因转录的影响。Western blot检测TPL对磷酸化磷酸肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、MDR1和肺耐药相关蛋白(LRP)表达的影响。结果:与对照组相比,TPL组使ADR对U2OS/ADR细胞生长的抑制作用提高(P<0.05)。TPL组Rh123阳性信号计数高于对照组(P<0.001)。与对照组相比,TPL组MDR1、LRP、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平及MDR1基因mRNA水平下降(均P<0.05)。结论:TPL具有抑制U2OS/ADR细胞生长、提高U2OS对ADR敏感性的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化、下调U2OS/ADR细胞MDR1和LRP基因表达、抑制P-gp对细胞毒物质的外排有关。