摘要：背景:作为一种新发现的内分泌激素,研究表明肾上腺髓质素能在多种重要器官的缺血再灌注损伤中起到保护作用,是否能对骨骼肌缺血再灌注有保护作用有待研究。目的:观察肾上腺髓质素对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/07在湖南师范大学医学院机能实验室、分子生物学实验室完成。材料:健康雄性SD大鼠30只,随机分为对照组,缺血再灌注组,0.1,0.5,1.0nmol/kg肾上腺髓质素处理组,每组6只。方法:无创动脉夹夹闭右侧股动脉4h,再灌注3h,建立后肢骨骼肌缺血再灌注损伤模型。对照组仅暴露出股动静脉,不做血管夹闭和环扎。肢体再灌注前肾上腺髓质素处理组分别自尾静脉注射0.1,0.5,1.0nmol/kg肾上腺髓质素生理盐水溶液,对照组及缺血再灌注组注射等量生理盐水。主要观察指标:测定各组血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性;取术侧腓肠肌,测定组织中超氧化物歧化酶、髓过氧化物酶的活性、丙二醛水平并观察骨骼肌组织形态学变化。结果:30只大鼠均进入结果分析。①与对照组比较,缺血再灌注组肌酸激酶、乳酸脱氢酶、丙二醛、髓过氧化物酶值增高(P0.05),其他均有统计学意义(P<0.05～0.01)。③0.5nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶、髓过氧化物酶、丙二醛值低于0.1nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05),1.0nmol/kg肾上腺髓质素处理组肌酸激酶值低于0.1nmol/kg肾上腺髓质素处理组(P<0.05)。0.1nmol/kg肾上腺髓质素处理组腓肠肌超微结构损伤相对加重。结论:肾上腺髓质素可减轻缺血再灌注对骨骼肌造成的损伤,对缺血再灌注骨骼肌具有保护作用。

摘要：背景:创伤性休克后,有大量炎性因子、一氧化氮合成、释放,在休克向不可逆的转化过程中起着重要作用。目的:探讨创伤性休克时大鼠血浆肾上腺髓质素(AM)和一氧化氮的变化特点及相关性。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验在第一军医大学珠江医院完成。健康SD大鼠40只,雌雄不拘,质量280～300g。由第一军医大学实验动物中心提供。干预:将40只SD大鼠分为对照组(10只)、休克未复苏组(10只)、休克复苏组(10只)和氨基胍(Aminoguanidine,AG)组(10只)。对照组10只麻醉后插管;30只SD大鼠制作创伤性休克动物模型,双侧股骨干砸伤后并经股动脉放血至MAP35～45mmHg。休克复苏组血压维持30min,然后回输失血和等量的林格氏液。氨基胍组在复苏时静脉注射AG60mg/kg。观察休克前后血浆AM和一氧化氮浓度的动态变化。主要观察指标:4组大鼠在创伤性休克时AM和一氧化氮的变化及相关性。结果:大鼠创伤性休克后,未复苏组和复苏0.5h时AM分别为(86.89±2.23)和(43.88±2.74)ng/L达到高峰;一氧化氮浓度分别为(47.88±2.29)和(86.56±2.15)μmol/L,均高于对照组。氨基胍组两指标变化不明显,AM的变化与一氧化氮的变化呈正相关。结论:提示AM与一氧化氮在创伤性休克发生发展中起重要的调节作用。

摘要：目的以人骨肉瘤细胞的肾上腺髓质素(ADM)为作用靶点,建立以慢病毒为载体的RNA干扰体系,以高效抑制ADM基因的表达。方法构建慢病毒载体,设计3条针对ADM基因序列的shRNA序列(shRNA-1、2、3),靶向ADM shRNA与慢病毒载体连接后,挑选LV-ADM-shRNA阳性克隆进行PCR鉴定并测序。经测序确认寡核苷酸插入部位正确后,提取目的质粒LV-ADM-shRNA 1、2、3,在293T细胞中包装携带目的质粒的慢病毒,然后采用多孔稀释法测定慢病毒滴度。结果构建3条靶向ADM的LV-shRNA慢病毒载体,并获得较高滴度的慢病毒颗粒。结论成功建立以慢病毒为载体的人骨肉瘤细胞ADM RNA干扰体系。

摘要：目的探讨丹皮酚干预联合靶向沉默肾上腺髓质素(AM)对胃癌细胞生物学行为的影响。方法设计3条靶向沉默AM的小干扰RNA(siRNA),分别为siRNA-839、siRNA-1008、siRNA-1135。经筛选,160μmol/L的siRNA-839靶向沉默AM的效率最高。选择胃癌细胞BGC-823,分别加入0、7.81、15.63、31.25、62.50、125.00 mg/m L丹皮酚和160μmol/L siRNA-839;经验证,62.50 mg/m L丹皮酚与160μmol/L siRNA-839作用48 h抑制细胞增殖效果最明显。取传3代、对数生长期胃癌细胞BGC-823,随机分为空白对照组、丹皮酚组、siRNA-839组、联合组,空白对照组加入含10%FBS的DMED培养基1 800μL和生理盐水200μL,丹皮酚组加入含10%FBS的DMED培养基1 875μL和丹皮酚注射液125μL,siRNA-839组加入含10%FBS的DMED培养基1 840μL和160μmol/L siRNA-839 160μL,联合组加入含10%FBS的DMED培养基1 715μL、丹皮酚注射液125μL和160μmol/L siRNA-839 160μL。分别采用平板克隆增殖实验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭、迁移能力和细胞凋亡率。结果联合组、丹皮酚组、siRNA-839组克隆形成率、穿膜细胞数均明显低于空白对照组,划痕间距、细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P均0.05)。结论丹皮酚与siRNA-839联用可协同抑制胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力并促进胃癌细胞凋亡;丹皮酚的最佳浓度为62.50 mg/m L,siRNA-839的最佳浓度为160μmol/L。

摘要：肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)是新发现的一种内源性多肽,具有多种生物学作用.我们曾报告哮喘急性发作期和慢性阻塞性肺病(COPD)患者血浆AM升高[1～2],但机制不清楚.由于这两种疾病常伴有细菌感染、低氧血症及酸中毒,因此本实验在大鼠动脉孵育液中设计了类似的环境,旨在通过测定不同条件下孵育液和孵育组织中AM含量,以探讨AM合成与释放的影响因素.