摘要：背景:高转移肿瘤细胞对重组基底膜成分侵袭是恶性肿瘤侵袭和转移体外实验常见的模型,合成肽对某些肿瘤细胞的影响也有报道,但合成肽对高转移人肺巨细胞癌细胞(highlymetastatichumanlunggiant-cellcarcinomacell,PG)的目前影响报道很少。目的:研究合成肽RGD,YIGSR及其衍生物对PG细胞体外侵袭能力的影响。设计:完全随机对照实验研究。地点和材料:PG和NIH3T3细胞株由北京医科大学病理教研室提供;合成肽由中国医学科学院药物所合成室和承德医学院化学教研室合成提供。整个实验在承德医学院生物化学教研室完成。干预:利用NIH3T3细胞株制备肿瘤细胞趋化因子。在肿瘤细胞趋化因子作用下,测定合成肽对接种在Tanswell细胞培养小室中PG细胞侵袭能力的影响。主要观察指标:PG细胞穿过Tanswell细胞培养小室重组基底膜的数量作为评价肿瘤细胞侵袭能力的指标。结果:适量PG细胞经趋化剂作用10h,侵袭细胞已达便于统计学分析的数量范围(50～100个侵袭细胞);100mg/L合成肽RGD,YIGSR与PG细胞共育48h,对侵袭能力的抑制率分别为53.63%和36.86%,共育10h,抑制率分别为0%和6.48%。结论:PG细胞是肿瘤细胞体外侵袭实验筛选抗肿瘤药物的适用细胞;RGD,YIGSR杂叉肽和均叉肽有较强的抗肿瘤侵袭活性。

摘要：目的 利用RNA干扰（RNAi）技术沉默宫颈癌细胞系HeLa细胞中乙酰肝素酶（HPA）基因的表达,并探讨其对宫颈癌细胞侵袭力的影响.方法 根据GenBank数据库提供的HPA基因核苷酸序列,设计4对针对HPA基因的短发夹状RNA（shRNA）特异性寡核苷酸序列（即shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658）,并设计1条随机无关序列作阴性对照,分 别克隆到pYr-1.1质粒中.用脂质体法将上述质粒转染入HeLa细胞,以未转染质粒者为空白对照,采用逆转录（RT）-PCR技术、免疫荧光法分别检测转染后HeLa细胞中HPA mRNA和蛋白的表达,筛选出其中对HPA基因沉默效果最佳的质粒.将该质粒转染入HeLa细胞,采用穿膜（transwell）小室体外侵袭实验检测转染后HeLa细胞侵袭力的变化.结果 RT-PCR技术检测显示,转染shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658质粒后,HeLa细胞中HPA mRNA的表达水平分别为0.54±0.05、0.89 ±0.18、0.82±0.22、0.91 ±0.47,阴性对照和空白对照细胞中HPAmRNA的表达水平分别为1.31 ±0.72和1.09±0.16；免疫荧光法检测显示,转染上述不同质粒后HeLa细胞的胞质中均可见绿色荧光,HPA蛋白均呈阳性表达,其中转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的胞质中绿色荧光强度最弱.故筛选出的对HPA基因沉默效果最佳的质粒即为shRNA-HPA-592质粒.体外侵袭实验检测显示,转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的穿膜细胞数为（44±4）个,明显低于空白对照、阴性对照[分别为（182±6）、（258±17）个],差异有统计学意义（P＜0.01）；而阴性对照与空白对照比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 本研究成功筛选出了靶向HPA基因的shRNA表达质粒,转染宫颈癌HeLa细胞后可高效抑制其HPA基因的表达,明显降低宫颈癌细胞的侵袭力,为进一步研究HPA基因的表达与宫颈癌侵袭的机制奠定了基础.

摘要：目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响。方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体。采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好。pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22)(P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96h内pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05)。结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力。HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点。

摘要：目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）抑制高迁移族蛋白B1（HMGBl）基因表达对胃癌细胞株MGC-803侵袭转移能力的影响及其作用机制。方法设计、合成靶向HMGBl基因的siRNA，以脂质体为载体转染胃癌细胞株MGC-803。Transwell小室模型和划痕实验测定细胞侵袭及迁移能力，四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞对Matrigel基质胶的黏附能力，电泳迁移实验检测化学合成核因子KB（NF—KB）的活性，逆转录聚合酶链反应和Westernblot方法检测HMGBl、基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA和蛋白的表达。结果HMGBlsiRNA可明显抑制MGC-803胃癌细胞株HMGBImRNA和蛋白的表达。HMGBlsiRNA转染组细胞侵袭穿膜细胞的数量为（142．7±3．4）个／视野，与未转染组[（303．5±4．3）个／视野]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。HMGBlsiRNA转染组细胞迁移穿膜细胞的数量为（293．7±4．4）个／视野，与未转染组[（445．5±5．6）个／视野]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。HMGBlsiRNA转染组的细胞黏附率为（33．4±0．03）％，与未转染组[（57．4±4．2）％]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。HMGBlsiRNA转染组MGC-803细胞MMP-9mRNA的相对表达水平（0．2±0．1）低于未转染组（1．4±0．4，P〈0．05）。HMGBlsiRNA转染组细胞MMP-9蛋白的相对表达水平（0．4±0．1）低于未转染组（2．34±0．7，P〈0．05）。HMGBlsiRNA转染组***活性明显低于未转染组。结论HMGBl基因沉默可有效抑制MGC-803细胞的侵袭转移，其机制可能与调控NF-KB的活性和MMP-9表达有关。

摘要：目的 利用小干扰RNA（siRNA）技术沉默与胶质瘤细胞凋亡和侵袭密切相关的p75神经营养因子受体（p75NTR）基因,观察其逆转胶质瘤恶性表型的治疗效果.方法 设计靶向p75NTR基因的siRNA片段,脂质体转染人U251胶质瘤细胞系,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法 检测p75NTR的mRNA和蛋白表达;Transwell细胞侵袭实验检测U251细胞的侵袭力;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;建立裸鼠颅内U251胶质瘤荷瘤模型,原位重复注射siRNA-p75NTR/脂质体复合物3次,MRI检测颅内瘤体积,免疫细胞化学SP法检测p75NTR、神经生长因子（NGF）和细胞周期蛋白（cyclin）D2表达,用TUNEL法做移植瘤细胞原位细胞凋亡检测.结果 转染siRNA基因片段的U251细胞p75NTR mRNA和蛋白质表达水平显著下降（P〈0.05）,细胞侵袭能力及软琼脂集落形成能力均显著降低（P〈0.05）;体内实验显示p75NTR的表达程度与NGF的表达呈正相关,与cyclin D2表达及原位细胞凋亡数量呈负相关,MRI示瘤体积增长缓慢,边界轮廓清晰,动物生存期明显延长（P〈0.05）.结论 靶向p75NTR的siRNA技术可有效降低胶质瘤细胞的侵袭及增殖能力,诱导肿瘤细胞凋亡.

摘要：目的研究用叉头转录因子M1（FoxM1）基因小干扰RNA下调非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株FoxM1基因表达后细胞增殖与侵袭能力的改变，为开发新的NSCLC靶向治疗方法提供依据。方法设计靶向FoxM1小干扰RNA（siFoxM1），分别以siFoxM1和无关对照siRNA转染人NSCLC细胞株SPC—A－1、A549和LTEP-a-2，采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测FoxM1 mRNA和蛋白表达，采用集落形成试验、划痕试验和细胞侵袭试验研究下调FoxM1基因表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果转染siFoxM1可高效特异地下调SPC—A－1、A549和LTEP－a－2细胞的FoxM1 mRNA表达（分别下降83．9％、83．6％、88．6％）和蛋白表达。转染siFoxM1的SPC—A－1、A549和LTEP－a-2细胞集落形成数[分别为（136．0±15．5）、（87．0±2．6）和（121．7±9．4）个]和穿膜细胞数[分别为（19．2±2．5）、（4．2±0．8）和（6．2±1．8）个]均明显低于转染无关对照siRNA细胞[集落形成数分别为（222．3±20．5）、（164．7±14．1）和（260．7±13．5）个，穿膜细胞数分别为（81．4±6．2）、（39．2±4．6）和（35．6±3．0）个，均P〈0．01]；转染siFoxM1的SPC—A－1细胞划痕愈合率（52．6％±7．8％）明显低于转染无关对照siRNA细胞（85．3％±18．6％，P〈0．01）。结论FoxM1基因表达下调可显著降低多种NSCLC细胞的增殖与侵袭能力，提示FoxM1是潜在的肺癌治疗靶点。

摘要：目的观察下调Astrocyte elevatedgene-1（AEG-1）基因对神经母细胞瘤细胞中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达以及细胞侵袭能力的影响。方法根据RNA干扰原理，设计合成AEG-1siRNA。通过荧光定量RT-PCR和Westernblotting观察神经母细胞瘤细胞中AE（2-1基因mRNA和蛋白下调情况；采用Western blotting观察下调AEGl表达对神经母细胞瘤细胞中MMP-9蛋白表达的影响；通过侵袭实验（Transwell法）观察下调AEG-I表达对神经母细胞瘤细胞侵袭能力的影响。结果采用AEG-1siRNA转染神经母细胞瘤细胞，下调细胞内AEG-1的mRNA和蛋白表达（P〈0．05）后MMP-9蛋白表达抑制率分别为63．1％和58．9％。此外下调AEG-1表达使细胞侵袭能力明显减弱（P〈0．05）。结论AEG-1基因下调使神经母细胞瘤细胞中MMP-9的蛋白表达明显减少、活性明显减弱，同时使细胞的侵袭能力降低。由此可见AEG-1在肿瘤细胞的侵袭转移中可能扮演重要角色，将会成为神经母细胞瘤基因治疗的新靶点。

摘要：目的利用RNA干扰技术沉默人胃腺癌细胞株BGC-823中血管生成因子1(Ang-1)的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法设计靶向Ang-1的siRNA片段并转染人胃腺癌细胞株BGC-823;RT-PCR方法检测Ang-1的mRNA水平;Western Blot和细胞免疫荧光方法检测整合素β1、CD44V6和Ang-1的蛋白表达量和细胞定位;细胞黏附试验检测转染前后细胞黏附能力;Matrigel胶及Transwell双室培养体系检测癌细胞侵袭能力。结果 RT-PCR结果显示所设计的siRNA片段可有效沉默Ang-1的mRNA表达;整合素β1、CD44V6和Ang-1蛋白主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞膜,其表达水平较转染siRNA片段前均有不同程度降低;细胞黏附能力和侵袭能力均明显降低(P<0.01)。结论靶向Ang-1的siRNA技术可有效降低人胃腺癌细胞株BGC-823的侵袭能力,为胃癌基因治疗提供了新的思路。

摘要：目的：探讨慢病毒介导短发夹RNA（shRNA）沉默神经导向分子5A（Semaphorin 5A）基因对恶性黑素瘤A375细胞系生物活性的影响。方法针对Semaphorin 5A设计2对shRNA引物及1对阴性对照引物，构建慢病毒载体，转染至人胚肾上皮HEK293T细胞系收获慢病毒，利用慢病毒感染A-375细胞系并通过嘌呤霉素筛选，成功获得稳定转染细胞系，实验分为实验组细胞（A375-shRNA1和A375-shRNA2）、阴性对照组细胞（A375-con）及空白对照组细胞（A375）。通过反转录PCR（RT-PCR）、Western印迹比较实验组细胞、阴性对照组细胞及空白对照组细胞Semaphorin 5A mRNA、蛋白表达水平的差异。噻唑蓝（MTT）检测细胞生长情况；侵袭试验及划痕试验比较转染前后细胞的侵袭运动能力。结果 Semaphorin 5A成功转染A375细胞后，经嘌呤霉素筛选，成功获得稳定转染实验组A375-shRNA2细胞系及对照组A375-con。反转录PCR及Western印迹检测，干扰后实验组A375-shRNA2较对照组A375-con、A375 Semaphorin 5A的转录水平及蛋白表达水平表达下调。MTT实验结果显示，A375-con与A375细胞生长差异无统计学意义（P〉0.05），A375-shRNA2细胞生长明显减慢，与A375和A375-con比较，差异均有统计学意义（P〈0.05）。划痕实验结果显示，A375-shRNA2划痕处细胞无明显迁移，划痕未得到修复，而A375及A375-con划痕处细胞最终几乎将划痕覆盖。侵袭实验结果显示，A375组与A375-con组穿过的细胞数差异无统计学意义（P〉0.05）；而A375-shRNA2通过小室的细胞明显少于A375及A375-con组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论慢病毒介导shRNA沉默Semaphorin 5A基因能使A375中的Semaphorin 5A有效下调，并抑制细胞的生长，降低细胞的侵袭以及运动能力。

摘要：目的:研究肿瘤相关基因p27、p21在结肠癌组织及其转移灶中的表达及其与患者预后的关系。方法:收集随访资料完整并同时具有淋巴结转移的结肠癌标本100例,按预先设计的需要制作成组织芯片,进行p27、p21免疫组化染色。根据染色指数(stainingindex,阳性细胞百分数×染色强度)观察分析结肠癌原发灶与转移灶的关系,并行相关分析。结果:100例结肠癌标本中,转移灶组织中p27、p21的表达均高于原发灶肿瘤组织的表达,差别均具有统计学意义(P<0.01)。p27、p21的表达与患者的预后呈负相关。结论:肿瘤相关基因p27、p21在已转移的结肠癌组织中的高表达和表达转移可能预示患者预后更差。