摘要：目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因表达含量的实时荧光定量逆转录（FQ-RT）-PCR法，探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达状况。方法设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针，以B-actin基因为内参，RT-PCR扩增目的片段，胶回收纯化目的片段，构建克隆载体作为定量模板，在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增，建立标准曲线；同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值，计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数。结果FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为10^3～10^9拷贝／μg RNA（r=-0．997）；高浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为5．6％和6．3％，低浓度样本批内及批间CV分别为12．5％和14．6％。PBC患者TRAIL mRNA表达量为[（3．3±2．5）×10^5拷贝／μg RNA]，高于健康对照组[（0．5±0．2）×10^5拷贝／μg RNA]，两组差异有统计学意义（t=5．994，P〈0．01）；乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[（2．1±0．9）×10^5拷贝／μg RNA]亦高于健康对照组，且差异有统计学意义（t=8．536，P〈0．01），而两疾病组间差异无统计学意义（t=1．988，P〉0．05）。结论成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法，并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高，这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路。

摘要：目的 评价重组改构人肿瘤坏死因子(rmhTNF)对晚期胃癌的临床疗效,并观察其不良反应.方法 试验设计为前瞻性随机对照研究.64例晚期胃癌患者随机分为2组,化疗+rmhTNF组(rmhTNF组)40例,单纯化疗组24例.两组化疗方案相同:氟尿嘧啶500mg/m2,第1～5天给药;多柔比星40 mg/m2,第1天给药;丝裂霉素6 mg/m2,第1天给药;21 d为1个周期,连用2个周期.rmhTNF组第1～7、11～17天另行肌内注射rmhTNF 400万U/m2.疗效评价分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、好转(MR)、稳定(SD)和进展(PD),有效率=(CR+PR)/总例数×100%;临床受益率=(CR+PR+MR+SD)/总例数×100%;并进行治疗前后生存质量评分(Karnofsky评分)比较.毒性反应根据WHO抗癌药急性及亚急性毒性分级标准评估.结果 单纯化疗组2例未完成2个周期治疗中途退出,其余62例按计划完成试验,可评价疗效;64例患者均可评价不良反应.有效率rmhTNF组为17.5%(7/40),单纯化疗组为4.5%(1/22),但组间差异无统计学意义(P=0.144);临床受益率rmhTNF组为80.0%(32/40),单纯化疗组为54.5%(12/22),组间差异有统计学意义(P=0.036).rmhTNF组治疗后Karnofsky评分为87.2±7.5,高于治疗前的83.0±7.9(P=0.001);单纯化疗组Karnofsky评分治疗后无明显变化(治疗前为84.1±8.0,治疗后为83.2±7.8);两组治疗后Karnofsky评分比较,差异有统计学意义(P=0.049).rmhTNF肌内注射给药的不良反应主要为注射局部疼痛、注射局部红肿硬结、畏冷寒战、骨肌肉疼痛、发热、感冒样症状等,但程度较轻,患者均可耐受.结论 rmhTNF与化疗联合应用治疗晚期胃癌,有助于提高患者的近期有效率,改善患者的一般状况和生活质量;rmhTNF局部肌内注射给药毒副作用较轻,患者可以耐受.

摘要：目的:利用生物信息学软件分析分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体融合蛋白的二级结构及其理化性质.方法:构建融合蛋白时,先进行连接肽的设计,选用通用酶切位点序列,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(AN-THEPROTV5)分析预测融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.结果:在编码ScFv与TNF的碱基之间引入连接肽,通过酶切位点获得的DNA序列,运用DNAssist核酸序列软件获得了融合蛋白的二级结构,并运用蛋白质分析软件(ANTHEPROTV5)预测了融合蛋白的理化性质.结论:应该充分利用生物信息学软件分析生物学信息,并不断对软件本身进行改进,生物信息学软件可提高药物开发进程,可利用生物信息学和遗传学信息来寻找和开发以基因为基础的药物.