摘要：采用合适的裂解液和沉淀方法,提取胆管癌胆汁中的蛋白质,获得分辨率高、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。通过不同裂解液和蛋白质沉淀方法提取胆汁蛋白的效果比较,设计了不同的样品制备方法,并且对双向电泳(2-DE)的条件进行优化。结果显示,试验确定了适合胆管癌胆汁的裂解液配方(LSⅣ),丙酮沉淀的蛋白分布完整,沉淀效率相对较高。高伏时、长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。因此,本方法可以应用到胆管癌胆汁蛋白的提取,也可以对其他体液蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。

摘要：胆管癌分为肝内、肝门、远端及弥漫型四种。弥漫型胆管癌是指肿瘤浸润较广泛或浸润全部肝外胆管,有两种类型,即浅表扩散性和弥漫浸润性。浅表扩散是指胆管癌从主瘤灶沿黏膜扩散>20 mm者,常见于胆管乳头状癌及其他分化好的腺癌中,恶性程度较低,预后较好。弥漫浸润是指胆管癌累及从肝门至远端的全部肝外胆管,病理学分期晚,预后差。应用MRI、多层螺旋CT以及胆管镜等检查,大多数病人可准确诊断胆管癌的大体类型及胆管累及的程度,特别是在浅表扩散性胆管癌中明确胆管黏膜累及的范围至关重要,这有助于设计精准的手术方案。弥漫型胆管癌需行包括大范围肝切除的肝胰十二指肠切除术者,术前大多需行胆道引流和门静脉栓塞,以增加手术的安全性及防止术后发生肝功能衰竭。

摘要：目的　建立胆管癌差异显示cDNA片段L2与人类基因组序列间联系 ,克隆人类胆管癌相关基因CCR L2 /FXYD6,测序、鉴定以供进一步研究。方法　通过同源性比较获取覆盖L2cDNA的基因组序列 ,经序列分析设计可能目的基因的扩增引物 1对。提取手术切除新鲜胆管癌组织总RNA ,利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增人cDNA ,克隆于载体pGEM T ,酶切、测序鉴定。结果　从胆管癌组织中得到人CCR L2 /FXYD6基因大片段克隆 ( 5 40bp) ,经测序与人基因组序列吻合 ,证实该基因在胆管癌组织表达明显 ,在正常胆管组织中低表达。结论　克隆出人CCR L2 /FXYD6基因的大片段 ,该基因在胆管肿瘤与正常组织表达存在明显差异 ,为进一步研究该基因的功能奠定基础。

摘要：目的 观察转染Livin反义寡核苷酸（ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞Livin mRNA和蛋白表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 设计合成全硫代磷酸化修饰的Livin ASODN,脂质体介导Livin ASODN转染QBC939细胞,于转染后60h,噻唑蓝（MTT）法检测Livin反义寡核苷酸对QBC939细胞增殖的抑制作用,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染前后Livin mRNA表达的变化；细胞免疫荧光化学检测转染前后Livin蛋白的表达变化；膜联蛋白V（Annexin V）-藻红蛋白（PE）流式细胞仪（FCM）法检测转染后细胞凋亡变化.结果 实验分反义（Livin ASODN）组、错义（Livin NSODN）组、脂质体组、空白对照组.转染后60 h,MTT法显示Livin ASODN组能明显促进胆管癌细胞的凋亡（46.41±1.13、3.10 ±0.44、2.66±0.26、0）；RT-PCR显示Livin ASODN组LivinmRNA表达水平明显低于各对照组（54.96 ±3.00、88.31 ±2.50、85.90±0.62、90.36±2.43）（P＜0.05）；细胞免疫荧光化学法显示Livin ASODN组Livin蛋白表达明显低于各对照组（39.05±2.52、8.60 ±3.60、6.37 ±2.71、0）（P＜0.05）；流式细胞仪分析结果显示Livin ASODN组的细胞凋亡明显高于各对照组[（36.98±4.09）％、（3.77±0.25）％、（7.51±0.30）％、（6.83±0.23）％].结论 脂质体介导转染Livin ASODN能特异性抑制QBC939细胞中的Livin基因表达,下调Livin蛋白的表达,抑制胆管癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.

摘要：目的研究转染Livin反义寡核苷酸（antisense 01igodeoxynucleotide，ASODN）对人胆管癌细胞株QBC939细胞LivinmRNA及Livin蛋白表达以及细胞增殖的影响。方法设计合成全硫代磷酸化修饰并5’端FITC荧光标记的LivinASODN。用脂质体介导Livin ASODN转染QBC939细胞，荧光显微镜观察24 h Livin ASODN转染入细胞的情况，并计算转染率。MTT法检测I Lvin反义寡核苷酸对QBC939细胞增殖的抑制作用。RT-PCR和细胞免疫荧光化学分别检测转染后48 h Livin mRNA表达及Livin蛋白的变化。结果500mol／LASODN转染后24h可达到最佳的转染效果；转染后60h，能明显抑制胆管癌细胞的增殖。转染60h后，RT—PCR及细胞免疫荧光化学检测分别显示Livin mRNA及Livin蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论脂质体介导转染Livin ASODN能特异性地抑制QBC939细胞中的Livin基因及Livin蛋白表达，抑制胆管癌QBC939细胞的增殖，降低癌细胞活力。

摘要：目的:探讨沉默EZH2基因表达对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 :设计并合成靶向EZH2的siRNA体外转染QBC939细胞,以实时荧光定量PCR和Western Blot法检测m RNA及蛋白表达水平,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,以Western Blot法检测H3K27me3、P14^(ARF)、P16^(INK4a)、P53、P21、E2F1蛋白表达变化。结果:靶向si RNA可有效沉默EZH2表达,显著抑制细胞体外增殖能力。与对照组相比,实验组细胞G1/S期比值显著升高,出现G1期阻滞,而凋亡率未见明显差异;β-半乳糖苷酶染色阳性,呈衰老特征;衰老通路的P14^(ARF)、P16^(INK4a)、P53、P21蛋白表达上调,而H3K27me3、E2F1蛋白表达下调。结论:沉默EZH2表达可显著抑制QBC939细胞的体外增殖能力,其机制可能与调控衰老通路有关。

摘要：晚期胆管癌及胆管周围癌，主要由梗阻性黄疸危及病人生命，手术治疗方法虽多，但其效果不甚满意，尤其有关黄疸引流分岐更大，为有效的解除黄疸，延长病人的生命，我科自行设计胆管癌切除后内置假体支架加肝总管空肠吻合引流胆汁，获得满意效果。

摘要：目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为+1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

摘要：目的对胆管癌相关基因FXYD6基因的功能区进行克隆和表达,以便进一步展开该基因功能研究。方法借助生物信息学方法分析FXYD6基因,设计FXYD6基因信号肽剪切后功能区蛋白体外表达序列,并将其克隆到pBV220表达载体上,继而以大肠埃希菌为表达系统,使功能区蛋白(不含信号肽)获得体外表达。结果该基因主要功能位点位于18～95 aa。PCR扩增出剪切掉信号肽序列的功能区序列(即包含18～95 aa的肽链段),并成功构建pBV220/FXYD6-ex基因功能区重组表达质粒克隆,其在大肠埃希菌DH5α中表达量最高,表达产物主要以包涵体形式存在。结论获得胆管癌相关FXYD6基因融合蛋白表达产物,为后续研究打下基础。

摘要：【目的】研究快速旋转调强(RapidArc)在晚期肝门区胆管癌放疗中的适用性。【方法】利用瓦里安Eclipse 10.0计划系统设计晚期肝门区胆管癌患者RapidArc计划10例;利用剂量体积直方图(dose-volume histogram,DVH)分析靶区的相关剂量学参数以及危及器官(organs at risks,OARs)的评价指标;利用PTW电离室矩阵和EPID-Portal Dosimetry系统进行计划验证;利用OBI系统保证治疗中的位置精度。【结果】计划靶区体积(planning target volume,PTV)的D2、D98、Dmean分别为:(48.94±0.88)Gy,(52.74±0.95)Gy,(51.45±0.92)Gy,适形指数(conformity Index,CI)为(0.95±0.09),有较好的适形度。OARs指标均在较低的水平;2种验证方法的γ通过率均在95%以上;治疗时的位置精度均在±3 mm以内。【结论】RapidArc能够满足晚期肝门区胆管癌放疗的临床剂量学要求。