摘要：Sonic hedgehog（Shh）信号通路是在动物胚胎发育过程中调节细胞间相互作用的重要信号分子之一,在胰腺癌的发生发展过程中发挥重要作用.Rab23是该信号通路副调控基因,其功能受到抑制后会导致hedgehog信号通路活性受阻.该研究设计针对Rab23基因的siRNA将其沉默,观察对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的临床诊断、治疗及预后提供依据.

摘要：目的探讨siRNA沉默轴突诱导因子4D(Sema4D)对人胰腺癌细胞增殖、迁移及血管生成的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染至人胰腺癌细胞系中,瞬时转染48 h后利用反转录-聚合酶链反应检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化;瞬时转染72 h后利用Western blot法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell迁移实验、划痕修复实验检测转染后人胰腺癌细胞迁移性的改变;小管形成实验观察转染后人胰腺癌细胞培养上清液对血管形成能力的影响。结果转染siRNA后,人胰腺癌细胞中Sema4D mRNA和Sema4D蛋白表达、胰腺癌细胞的生长速度均较阴性对照组和空白对照组下降(P<0.05);Transwell迁移实验和划痕修复实验显示,胰腺癌细胞穿膜细胞数和划痕修复率显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);小管形成实验显示,转染siRNA组、阴性对照组和空白对照组血管形成数目分别为0.50±0.02、1.45±0.60、1.37±0.52,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Sema4D-siRNA能够在胰腺癌细胞中引发RNA干扰效应,下调Sema4D基因表达,抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞迁移能力明显下降,抑制血管生成。

摘要：国内外研究结果显示，以K-ras基因突变位点在内的mRNA片段作为靶序列设计的shRNA（短发卡RNA），能有效的抑制相应突变型K—ras基因的表达和细胞的增值，且不影响野生型K—ras基因的表达。我们针对突变类型为GAT和GTT的K—ras基因序列，分别设计shRNA，并构建pGenesile-1 GAT和pGenesil-1 GTY质粒，将其分别交叉转染到具有该两种突变类型的PANC-1和CFPAC-1细胞株中，观察shRNA质粒对突变型K—ras基因的特异性抑制和交叉抑制效应。

摘要：目的:构建特异性shRNA腺病毒载体,使之干扰神经轴突过度生长因子(PTN)在胰腺癌细胞中的表达,探讨其对SD大鼠背根神经节神经元(DRGn)神经轴突的影响。方法:设计并合成4对靶向PTN单链寡核苷酸(ss oligo),经变性退火为双链寡核苷酸(ds oligo)插入穿梭质粒pENTR/U6载体,测序正确后经脂质体介导转染胰腺癌细胞,通过RT-PCR方法筛选对PTN沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,然后与腺病毒骨架质粒进行同源重组,筛选出正确重组子,用HEK293A细胞包装出表达shRNA-PTN的重组腺病毒并测定其病毒滴度,通过Western blot方法对腺病毒沉默PTN效果予以检测。shRNA-PTN腺病毒构建成功后感染胰腺癌PC-2细胞,然后和DRGn共培养,观察DRGn生长分化和形态特征。结果:测序结果提示所构建的pENTR/U6-shRNA质粒正确,并从4对ds oligos筛选出对PTN沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR/U6-shRNA,经同源重组后成功构建了介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒。转染胰腺癌细胞后,Western blot检测显示shRNA-PTN腺病毒感染胰腺癌细胞后对PTN蛋白的沉默效果7 d后达最佳效果。感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和DRGn共培养,DRGn神经轴突的生长和延长受抑制,以第7天最为明显。结论:成功地构建介导shRNA-PTN复制缺陷型重组腺病毒;感染shRNA-PTN腺病毒的胰腺癌PC-2细胞和SD鼠DRGn共培养可以抑制DRGn神经轴突的生长。

摘要：虽然胰腺癌的死亡率居西方国家恶性肿瘤死亡率的第五位(Gordis L,Gold LB 《WorldJ Surg》1984),但是自本世纪初以来,治疗方面进展很慢。不幸的是研究资料表明近50年癌症增加5倍,而5年生存率仍低于百分之一。只有很少数肿瘤直径小于2cm的病人根治术后5年生存率可提高至37％。这说明必须对胰腺癌生物学有较彻底的了解,才能寻找和设计新的治疗方法。癌症是细胞不正常分化,组织不正常生长。

摘要：近年来,组织芯片(tissue microarray,TMA)技术随基因芯片技术和功能基因组的发展应运而生,与细胞芯片、蛋白芯片和抗体芯片一样,属于一种特殊的生物芯片技术。TMA技术可将数十个甚至上千个不同个体的临床组织标本按预先设计的顺序,排列在一张玻片上进行分析研究,是一种高通量、多样本的基因功能分析工具。它使科研人员第一次有可能同时对几百甚至上千种正常或疾病,以及疾病发展不同阶段的自然病理生理状态下的组织样本进行某一个或多个特定基因的研究,或与其相关表达产物的研究。TMA技术可与DNA、RNA、蛋白质和抗体等技术相结合,与传统的病理学技术、组织化学和免疫组化技术相结合,在基因、基因转录和相关表达产物的生物学功能水平上进行研究。这对人类基因组学的研究与发展,尤其对基因和蛋白质与疾病关系的研究,疾病相关基因的验证、新药物的开发和筛选、疾病的分子诊断,治疗过程的追踪和预后等方面具有实际意义和广阔的市场前景[1]。1998年Kononen等[2]首次应用TMA技术对6种基因在1000例乳腺癌患者中的表达进行了研究,并揭开了TMA的研究序幕。本文就近年来TMA技术在消化道肿瘤中的研究,以及全面深入认识其发生、发展...