摘要：背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能。目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案。设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放军总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成。材料:胰岛细胞供体为SD大鼠。将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5g/L,1.0g/L,1.5g/L及2.0g/L组,每组8只。方法:每组前4只动物,采用0.5,1.0,1.5,2.0g/L4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定最适合获取胰岛量最多的时间点。随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的最佳浓度。主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶最佳质量浓度及消化时间。结果:分析后确定各组胰岛细胞最佳获取时间,胶原酶0.5g/L组50min,胶原酶1.0g/L组40min,胶原酶1.5g/L及2.0g/L组均为30min。胶原酶0.5g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P0.05)。胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P0.05)。结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果。

摘要：背景:理想的硬脑膜替代材料要求其自身具有一定的韧性与弹性。目的:通过对经冻干辐照处理后猪硬脑膜胶原酶Ⅰ型酶解时间、最大负荷及抗张强度进行测定,验证经冻干、辐照处理过的猪硬脑膜是否符合硬脑膜移植对生物力学的要求。设计、时间及地点:对比分析实验,于2007-07/2008-06在南昌大学烧伤研究所、南昌大学-新三思公司联合力学实验室、江西中医学院中药固体制剂国家工程研究中心与江西天兆科技发展公司完成。材料:选用健康活体猪6只,无菌条件下取新鲜猪硬脑膜。方法:猪硬脑膜经过冲洗、预冻、冻干、60Coγ射线照射等处理,按照处理方式分成新鲜猪硬脑膜组、冻干猪硬脑膜组、辐照猪硬脑膜组及冻干+辐照猪硬脑膜组。主要观察指标:取5mm各组猪硬脑膜圆片用胶原酶Ⅰ型酶解计算其完全酶解时间;用EMT彩屏电子拉力试验机分别测出各组替代材料的最大负荷、抗张强度。结果:新鲜猪硬脑膜组、冻干猪硬脑膜组、辐照猪硬脑膜组及冻干+辐照猪硬脑膜组硬脑膜胶原酶酶解时间分别为(8.3±2.5),(7.6±1.8),(23.6±5.7)与(21.1±5.3)min,最大负荷和抗张强度分别为(79.93±4.36),(70.50±5.97),(96.97±4.84)N和(93.59±4.61),(7.98±0.44),(7.05±0.60),(9.70±0.48)和(9.40±0.46)N/mm,与新鲜猪硬脑膜组和冻干猪硬脑膜组比较,辐照猪硬脑膜组和冻干+辐照猪硬脑膜组时间明显延长,差异有显著性意义(P0.05)。结论:经Coγ射线照射后的硬脑膜抗酶解能力、生物力学特性增强;辐照与冻干+辐照猪硬脑膜均能满足硬脑膜移植对其生60物力学方面的要求。

摘要：背景:胶原酶溶核是通过对胶原的溶解和消除周围水肿而达到治疗目的,临床应用往往采用单一的方案。目的:评估等离子射频消融髓核后盘内外小剂量注射胶原酶对重度腰椎间盘突出的溶核治疗效果。设计:回顾性病例分析。对象:2005-12/2006-12湖北省郧阳医学院附属十堰市太和医院收治的46例椎间盘突出症患者,平均病程9.5个月。纳入标准:腰腿痛明显,严重影响生活和工作;经过2～4周常规保守治疗效果欠佳;CT或MRI扫描证实椎间盘病变存在,突出程度超过椎管前后径50%或压迫椎间孔;病变椎间盘周围无明显椎管骨性狭窄;胶原酶由辽宁味邦生物制药有限公司生产,System2000型等离子发生装置为美国ArthroCare公司产品。方法:椎间盘穿刺后,先经穿刺针管向髓核内置入射频电极作髓核消融,然后将胶原酶600u溶解于2mL生理盐水中,经穿刺针管向髓核内注入0.5mL,将穿刺针退至纤维环外,经造影或利多卡因试注证实针尖位于硬膜外腔后,再注入1.5mL胶原酶溶液,拔针包扎后严格卧床休息6h。疗效判定优为症状完全消失,无运动功能受限,恢复正常工作和活动;良为症状基本消失,能作轻工作或坚持工作。主要观察指标:注射后效果及并发症。结果:46例患者均完成3个月随访。胶原酶注射后1周疗效较差,优良率仅为80.4%(37/46);注射后1个月和3个月的疗效基本接近,优良率分别达91.3%(42/46)和93.5%(43/46),均未发生出血、腰肌血肿、感染和神经损伤等并发症。结论:等离子射频消融结合盘内外小剂量胶原酶溶核治疗可明显提高重度腰椎间盘突出的疗效。

摘要：先后采用各种胶原酶和疏水性制剂，消化、水解病鱼囊肿细胞中带状包涵体外围的胶原蛋白和糖蛋白。经过设计蔗糖密度梯度离心条件，成功分离出了大量的LCDV-cn粒子，并最终建立起一套较完备的、分离纯化LCDV-cn的方法。

摘要：嫩度是肉最为重要的食用品质,与肌原纤维蛋白、结缔组织、肌间脂肪以及肌肉持水性紧密相关。研究从鲜活鲫鱼中提取到一种胶原酶粗酶,首先研究了pH值、盐浓度、胶原酶添加量对胶原酶活性的影响;接着以pH值、盐浓度、胶原酶添加量为三个因子,分别设定三个水平,以剪切力为测定指标进行L_9(3~3)正交设计,研究其对牛肉嫩度的影响。研究结果表明:胶原酶最适pH值为6.5、最适盐浓度为0.2mol/L、胶原酶添加量与酶促反应速度呈正相关关系;胶原酶添加量、盐浓度对牛肉嫩度有显著影响,因子影响排序为胶原酶添加量>盐浓度>p H值;正交设计最适条件为pH值6.5、盐浓度4.1%、酶添加量0.3%。

摘要：目的为提高盘外注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症的准确性、安全性和成功率，设计出 靶位注射法。方法用特制靶针自定位点穿刺，将靶针准确地送到靶位即椎间盘突出部位，判 断无误后缓慢注射胶原酶。结果应用靶位穿刺250例次，仅1次失败。应用靶位注射胶原酶溶 盘术治疗腰椎间盘突出症154例，优良率达85.1％，有效率达94.2％，无效9例，占5.8％。 结论靶位注射胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症，定位准确、应用安全、方法简便、疗效显 著。

摘要：采用三种设计方案考察了白色念珠菌URM3622胞外分泌生产胶原酶的培养条件。首先进行26—2部分因子试验，结果表明转速和底物浓度对胶原酶的产量影响显著。根据以上结果，又设计了两次连续的23全因子分析，结果表明，在pH7．0、转速160r／min、底物浓度2％条件下培养白色念珠菌，发酵所得胶原酶活性最高。在pH8．2、45℃的环境中，胶原酶活性最大。所获胶原酶在pH7．2～8．2及28～45℃范围内稳定。

摘要：背景：有实验表明60Coγ射线灭菌处理的胶原膜会促使胶原分子产生交联,影响其稳定性。目的：通过测定冻干辐照处理后猪腹膜胶原酶酶解时间,了解冻干辐照猪腹膜在体外的稳定性。设计、时间及单位：动物实验观察,于2007-07/2008-06在南昌大学烧伤研究所、南昌大学-新三思公司联合力学实验室、江西中医学院中药固体制剂国家工程研究中心与江西天兆科技发展公司完成。材料：选用健康活体猪6只,无菌条件下取新鲜猪腹膜。60Coγ射线辐照装置为江西天兆科技发展公司生产。方法：新鲜猪腹膜按照处理方式分成4组,新鲜组：将新鲜猪腹膜放入含有庆大霉素1×105U/L的生理盐水中清洗修剪平整后,再放入保护液中浸泡约15min,最后放入0-4℃冰箱中保存、备用。冻干组：将新鲜猪腹膜放入EMDE＋10%甘油中的猪腹膜浸泡15min后,取出放入-78℃的冰箱中,使其形成冰晶,再放入真空冷冻干燥机内冻干6h,取出室温保存、备用。辐照组：在冻干组基础上将猪腹膜放入剂量为25kGy的60Coγ辐照装置内,动态辐照72h后取出,放入0-4℃冰箱中保存、备用。冻干＋辐照组：在辐照组基础上将猪腹膜放入剂量为25kGy的60Coγ辐照装置内,动态辐照72h后取出室温保存、备用。主要观察指标：同时取直径为5mm各组猪腹膜圆片用胶原酶Ⅰ型酶解,计算各片材料完全酶解时间。结果：4组猪腹膜胶原酶酶解时间：（9.6±1.2）,（6.1±1.6）,（29.2±3.0）,（23.5±2.6）mins。辐照组和冻干＋辐照组猪腹膜酶解时间比新鲜组和冻干组明显延长（P〈0.05）,但新鲜组和冻干组之间比较及辐照组和冻干＋辐照组之间比较,猪硬脑膜酶解时间无明显差别（P〉0.05）。结论：经60Coγ射线照射后的猪腹膜抗酶解能力增强;辐照均能增加猪腹膜的稳定性,冻干对猪腹膜的稳定性无明显影响。

摘要：目的:客观评价化学髓核溶解术的效果,跟踪化学髓核溶解术的研究进展。资料来源:应用计算机检索http://***/PubMed系统有关化学髓核溶解术方面的文献,检索词“chemonucleolysis”,限定文章语言种类为English。资料选择:对资料进行初审,选取包括化学髓核溶解术的相关文献,开始查找全文。纳入标准:经典文献、经严格科学设计的基础实验研究、前瞻性随机性临床研究及病例对照研究。排除标准:临床回顾性研究、个案报道、重复研究。资料提炼:共检索到关于化学髓核溶解术的相关文献202篇,44篇文献符合纳入标准。资料综合:化学髓核溶解术是最早用于腰椎间盘突出症治疗的微创方法,目前广泛应用于临床的髓核溶解酶有木瓜凝乳蛋白酶和胶原酶。髓核溶解酶注射入椎间盘内,加速椎间盘的退化,使之纤维化缩小来减轻对神经根的压迫。化学髓核溶解术的最佳适应证为单节段椎间盘突出、腿痛重于腰痛,临床症状、体征及影像学检查相吻合的患者;对椎间盘髓核脱出及脱落髓核碎块周围包以纤维化组织或后纵韧带缺损处被纤维化组织隔开,酶无法达到突出物者禁忌行化学髓核溶解术。化学髓核溶解术效果优于椎板切除术。化学溶核治疗效果优于经皮髓核切除。反复多次行化学髓核溶解术也是安全有效的。主要临床并发症是腰背部痉挛疼痛,在退针前注射布比卡因或注射木瓜凝乳蛋白酶前静脉注射皮质激素可以减轻该并发症。木瓜凝乳蛋白酶和胶原酶都可以导致微血管破裂和出血、微栓塞、溶血,鞘内注射可导致严重神经并发症。结论:严格掌握化学髓核溶解术适应证,正确运用穿刺技术行化学髓核溶解术是治疗椎间盘突出症安全有效的方法,能减少并发症的发生,减少致残性持续坐骨神经痛的治疗费用。

摘要：背景:毛乳头细胞的分离培养技术是研究毛囊细胞生物学的基础,目前采用的显微解剖法分离毛乳头进行毛乳头细胞传代培养是一种原始的方法,存在着分离效率低、劳动强度大、毛乳头贴壁率低、细胞生长缓慢等缺点。目的:探索一种高效省时的分离毛乳头方法。设计:采用酶消化法与解剖法对照的实验研究。地点和对象:实验在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。为正常人头皮毛囊。干预:采用胶原酶D直接将毛囊下部的真皮鞘组织消化成真皮鞘细胞和毛乳头,观察毛乳头的贴壁率和细胞生长曲线。主要观察指标:胶原酶消化法、立体解剖分离法及组织化学染色结果。结果:消化法可大量获得毛乳头,省去了在解剖显微镜下分离毛乳头的步骤,第1天贴壁率为96.5%,第3天贴壁率为99.7%。显微解剖分离法分离较困难,每小时仅能分离15个左右,悬浮培养前5d无一贴壁。消化法极大地促进了毛乳头的贴壁和细胞的生长,并保证了毛乳头的完整性,组织化学染色表明毛乳头细胞是一种高度特异的成纤维细胞。结论:胶原酶D消化法分离毛乳头是一种高效的培养毛乳头细胞的方法。