摘要：目的观察静态压力对视网膜Müller胶质细胞(RMGC)数量和表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和热休克蛋白(HSP)70的影响。设计实验性研究。研究对象大鼠RMGC。方法体外培养并鉴定大鼠RMGC,对该细胞施以不同程度的静态压力,分为A(1．33kPa)、B(2．67kPa)、C(5．33kPa)、D(10．67 kPa)四组,设立未加压者为正常对照组(NC)。用倒置相差显微镜观察细胞形态结构变化,常规细胞记数方法计算细胞数量,台盼蓝染色计算各组活细胞比例。采用蛋白电泳的方法比较各组细胞中GFAP和HSP70的表达情况。主要指标细胞形态,细胞数量,细胞活性。结果随着压力增加细胞数量降低,C和D组细胞数量低于NC组、A和B组(P＜0．01)。压力导致各组细胞拒染率降低(P＜0．01),C和D组细胞拒染率低于NC组、A和B组(P＜0．01)。C和D组细胞形态结构有明显损伤,随着压力的进一步增加,细胞的损伤程度也进一步加重。NC组RMGC表达GFAP和HSP70蛋白的水平低于压力组,C和D组GFAP表达略高于A和B组,但各压力组HSP70表达无明显差异。结论过高的静态压力会直接损伤RMGC,RMGC表达GFAP和HSP70水平升高,可能是高眼压条件下视网膜损伤反应的标志之一。(眼科,2007, 16:44-47)

摘要：目的通过脑发育早期脂多糖(LPS)重复刺激,建立SD大鼠认知障碍模型,探讨炎症反应介导下的"多重打击"对其组织学、行为学的影响及相关的分子机制。方法本研究的实验设计类型为成组设计。通过腹腔注射LPS构建SD大鼠"多重打击"认知障碍模型,将24只孕鼠按照随机数字表法分为对照组、LPS1组、LPS2组、LPS3组,每组6只。对照组孕18 d孕鼠和20日龄仔鼠均腹腔注射9 g/L盐水;LPS1组孕18 d孕鼠腹腔注射9 g/L盐水;LPS2组孕18 d孕鼠腹腔注射0.05 mg/kg LPS;LPS3组孕18 d孕鼠注射0.1 mg/kg LPS。LPS1~3组仔鼠均在20日龄时腹腔注射1 mg/kg LPS。通过前肢悬吊、网格和水迷宫等行为学实验,对仔鼠运动和认知功能进行整体评估。组织学和蛋白免疫印迹(WB)实验检测仔鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Notch1和Jagged1的相对表达量。采用单因素方差分析进行多组数据之间比较,采用独立样本t检验进行2组数据之间比较。结果1.行为学实验:与对照组比较,LPS1~3组仔鼠的前肢悬吊时间递减[(34.81±5.66)s、(22.47±4.35)s、(13.20±4.25)s比(43.88±4.85)s],网格实验中足踏空次数递增(16.13±2.90、20.75±3.10、25.13±4.45比9.00±2.72),差异均有统计学意义(F=69.77、35.59,均P<0.001);Morris水迷宫实验中的潜伏期时间和总路程呈递增趋势(P<0.05)。***实验:与对照组比较,LPS1~3组GFAP、Notch1、Jagged1蛋白的相对表达量显著增加(P<0.05)。3.苏木精-伊红(HE)染色和电镜病理:与对照组比较,LPS1~3组仔鼠额叶皮质组织结构排列松散,细胞固缩明显。电镜下细胞质不同程度水肿、线粒体嵴断裂、部分核膜破损。结论在"多重打击"认知障碍模型中,仔鼠脑组织的损伤和行为学的改变,可能与LPS重复暴露介导的Notch1/Jagged1通路上调有关。

摘要：背景:既往研究证明益气活血方补阳还五汤具有抑制脑缺血及再灌注模型细胞凋亡、抗自由基等作用,但关于本方剂对干细胞分化影响的报道较少。目的:观察益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。设计、时间及地点:以细胞为对象,对比观察实验,于2006-03/2008-02在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行。材料:清洁级一二月龄SD大鼠20只,雌雄各半,体质量100～150g。益气活血方由本院制剂室生产,选用当归60g,桃仁30g,川芎30g加水720mL,提取挥发油,备用。药渣及提取液加入黄芪1200g,赤芍60g,地龙30g,红花30g,再加入920mL水,煎煮1h,滤过,药渣再加入8640mL水,煎煮1h,滤过,合并2次煎液,浓缩至600mL,加入挥发油及吐温-803mL,混匀,装瓶进行高压高温消毒。每毫升相当于生药2.4g。方法:采用密度梯度离心法分离获取SD大鼠骨髓单个核细胞层,将细胞经过传代培养使骨髓间充质干细胞得到扩增和纯化。将第10代的细胞悬液接种于直径40mm塑料培养皿中,细胞生长达80%～90%融合时,加入含体积分数为0.10的FBS、碱性成纤维细胞生长因子的DMEM培养基培养24h,益气活血方组而后换为含诱导液二甲亚砜、丁羟茴醚、β-巯基乙醇、益气活血方诱导5h,对照组换为含诱导液二甲亚砜、丁羟茴醚、β-巯基乙醇诱导5h。主要观察指标:采用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞;用免疫细胞化学方法检测诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:经流式细胞仪检测显示,细胞表面标志CD90、CD106阳性,CD45、CD34呈阴性。免疫细胞化学方法检测显示,益气活血方组在诱导1,3h分化巢蛋白细胞与诱导5h分化的神经元特异性烯醇化酶细胞和胶质纤维酸性蛋白细胞,与对照组相比,差异显著(P<0.01)。结论:益气活血方具有体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。

摘要：背景:星形胶质细胞是中枢神经系统的主要成分之一,具有对各种损伤产生强烈反应的特性,脑出血后星形胶质细胞大量表达、活性增强,这种由常态转变为反应性状态的星形胶质细胞的病理生理学意义是目前研究热点。目的:探讨重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血后星形胶质细胞表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/11在泸州医学院中心实验室完成。材料:清洁级健康雄性SD大鼠50只,随机分为3组:假手术组10只、模型组20只、实验组20只。重组人粒细胞集落刺激因子为深圳新鹏生物工程有限公司产品。方法:模型组、实验组利用鼠脑立体定向仪、采用断尾取自体血法制备脑出血动物模型,假手术组用等量生理盐水代替自体血,余干预措施与模型组一致。造模1h后,实验组大鼠腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子60μg/kg,余2组未注射任何物质。主要观察指标:分别于干预后6h,24h,48h,72h,7d采用免疫组织化学ABC法检测胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达。结果:假手术组未见胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达。模型组干预6h即有少量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,48h后开始增多,至72h胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数量达高峰(P<0.05),7d后仍有大量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,但较72h时有所减少。实验组干预6h时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达与模型组相似,干预24h,48h,72h,7d时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较模型组明显减少(P<0.05),细胞变形程度减轻。结论:重组人粒细胞集落刺激因子能够抑制脑出血后星形胶质细胞的过度活化,可能对损伤脑组织重建和功能恢复起重要作用。

摘要：目的:利用犬脊髓挫伤模型,结合磁共振成像、体感诱发电位、运动诱发电位分析犬脊髓损伤后胶质瘢痕的形成。方法:实验于2002-05/2003-04在解放军第三军医大学新桥医院实验动物中心完成。选取成年健康杂种犬12只,随机分为正常对照组3只,脊髓损伤组9只。脊髓损伤组动物,俯卧固定,定位棘突后以T8为中心作行椎板切除,骨窗10mm×15mm,暴露脊髓背侧硬膜,参考Allen’s法自行设计打击装置。用冲击棒至脊髓损伤,致伤能量为450g·cm,形成重度脊髓损伤模型。正常对照组除不致伤外,其余操作同脊髓损伤组。脊髓损伤组分别于伤后1d,2周,8周各取材3只。术后进行犬后肢功能观察评价,测定犬双后肢体感诱发电位和运动诱发电位的变化,观察脊髓结构的影像学及组织学变化。结果:①犬脊髓损伤后运动功能的变化:脊髓损伤组动物在损伤后1d,2周,8周观察的时间范围内,后肢和尾巴均未见活动。②犬脊髓损伤前后的电生理变化:脊髓损伤组动物在损伤前体感诱发电位和运动诱发电位均正常,但伤后增加刺激强度均不能记录到体感诱发电位和运动诱发电位。③各组脊髓结构的影像学比较:脊髓损伤组动物伤后损伤部位表现为T1加权成像呈局部低信号,T2加权成像呈高信号,信号纵向为(10.0±0.13)mm,大约是砸伤长度的2倍,为椭圆形空洞形成,局部脊髓萎缩变细,蛛网膜下腔粘连、连续性中断。④犬脊髓损伤后脊髓组织学变化:伤后1d脊髓弥漫出血、渗出,脊髓中央管变形,神经元内氏体减少。伤后2周仍有出血、水肿,脊髓白质空泡样改变,脊髓中央灰质坏死、空洞形成。伤后8周空洞壁为大量胶质细胞形成的胶质瘢痕,并见炎细胞浸润。结论:450g·cm致伤能量可导致犬脊髓严重损伤,从而形成典型的空洞及胶质瘢痕,提示该模型有利于慢性时期损伤修复的分析。

摘要：目的观察糖尿病大鼠视网膜Müller细胞谷氨酸转运体(GLAST)、谷氨酰胺合成酶(GS)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化、视网膜神经细胞凋亡的检测以及神经营养因子NT-3的表达,探讨糖尿病(DM)对视网膜神经细胞损伤的机制。设计实验研究。研究对象Sprague-Dawley(SD)大鼠82只。方法大鼠随机分为正常对照组12只,糖尿病模型组70只。链脲佐菌素诱导实验性DM大鼠模型。RT-PCR法检测视网膜GFAP mRNA表达水平;TUNEL法检测视网膜神经节细胞(RGC)及内核层细胞的凋亡并计数凋亡细胞数量;免疫组织化学技术LSAB法检测GFAP、GLAST、GS、NT-3在视网膜的表达,观察DM大鼠视网膜RGC及内核层细胞功能的改变,用图像分析仪测量免疫组化的显色强度。主要指标GFAP、GLAST、GS和NT-3的表达量,视网膜内核层和RGC细胞凋亡数。结果 (1)与正常组(1.00±0.02)相比,模型组GFAP阳性表达量(5.22±1.34)明显增加(P=0.000),GLAST、GS、NT-3阳性表达明显降低。(2)大鼠视网膜凋亡阳性细胞仅见于RGC层和内核层,模型组视网膜内核层细胞及RGC凋亡数量(36.00±6.02,11.48±2.08)比正常组(16.33±2.34,5.34±0.52)显著增加(P均=0.000)。(3)DM大鼠视网膜GFAP mRNA表达(7.00±0.37)比正常组(0.29±0.08)明显增加(P=0.000)。(4)GFAP阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈正相关(r=0.88、0.85,P=0.021、0.028);GLAST阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.91、-0.89,P=0.014、0.020),GS阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.93、-0.90,P=0.007、0.009);NT-3阳性表达与内核层细胞及RGC凋亡数呈负相关(r=-0.74、-0.71,P=0.036、0.041)。结论糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡增加与Müller细胞的过度反应性增生及神经营养因子的缺失有关,高浓度谷氨酸的兴奋性毒性作用以及神经营养因子NT-3的缺失是其视网膜神经细胞损伤的重要机制。