摘要：目的观察黄芪、川芎中的有效成分黄芪甲苷、川芎嗪、阿魏酸、毛蕊异黄酮、藁本内酯的正交组合配伍对SD乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMVECs）缺氧损伤的保护作用,并找出较优组合。方法 rBMVECs原代传代培养,并建立缺氧模型,4h后观察细胞形态,MTT法测定各成分的最大耐药质量浓度,以L_（18）（3~5）正交表设计安排成分配伍给药,采用黄嘌呤氧化酶显色法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法测定caspase-3与caspase-8基因在细胞中的表达。采用极差分析法分析正交试验结果。结果药物正交配伍组合可显著改善缺氧rBMVECs的形态,有效增强SOD活性,有效抑制缺氧诱导的rBMVECs发生Gl/S期阻滞,明显减少了细胞的凋亡,减弱细胞中caspase-3和caspase-8基因表达。正交试验结果分析显示其较优组合为藁本内酯5μg/mL、川芎嗪10μg/mL、阿魏酸20μg/mL、毛蕊异黄酮10μg/mL、黄芪甲苷10μg/mL。结论黄芪、川芎有效成分组合配伍对内皮细胞缺氧损伤有明显的保护作用。

摘要：目的研究沉默NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing protein 3,NLRP3)基因对大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell,BMEC)经促炎剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)诱导产生炎症因子的影响,及NLRP3炎症小体信号通路是否在BMEC经促炎剂作用形成的脑小血管病细胞模型中发挥作用。方法体外提取雄性Wistar大鼠BMEC并鉴定内皮细胞的形态和纯度。将正常培养的BMEC分为空白对照组和LPS+ATP组,利用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应检测NLRP3炎症小体及下游炎症因子胱天蛋白酶(Caspase)-1的表达,采用独立样本t检验进行组间比较;采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)分子对BMEC内的特定基因NLRP3进行沉默,将siRNA NLRP3和siRNA质粒阴性对照分别转染BMEC后,再将转染后的细胞分为4组,即siNC组(未沉默目的基因,不加促炎剂)、siNLRP3组(沉默目的基因,不加促炎剂)、siNC+LPS+ATP组(未沉默目的基因,加促炎剂)、siNLRP3+LPS+ATP组(沉默目的基因,加促炎剂),利用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应检测各组NLRP3和Caspase-1的表达,采用析因设计的方差分析进行组间比较。结果大鼠BMEC分离培养24 h后脑微血管段呈“串珠状”,48 h后“岛屿状”细胞团形成,72 h后“铺路石”样单层细胞贴壁生长,后细胞逐渐密集达汇合度80%。免疫荧光染色检测BMEC阳性率达96%。在正常培养的细胞中,LPS+ATP组NLRP3和Caspase-1的蛋白及mRNA表达较空白对照组升高(P<0.05)。在RNA干扰培养的细胞中,siNLRP3组较siNC组、siNLRP3+LPS+ATP组较siNC+LPS+ATP组NLRP3、Caspase-1的蛋白及mRNA表达量均降低(P<0.05),siNC+LPS+ATP组较siNC组、siNLRP3+LPS+ATP组较siNLRP3组NLRP3、Caspase-1的蛋白及mRNA表达量均升高(P<0.05);对于NLRP3、Caspase-1的mRNA相对表达量,给予转染质粒和促炎剂干预的交互效应有统计学意义(P<0.05)。结论促炎剂LPS和ATP共同诱导能够促进大鼠BMEC中NLRP3和Caspase-1的释放。沉默NLRP3基因表达能够降低促炎剂的诱导作用。NLRP3炎症小体信号通路可能在大鼠BMEC经促炎剂作用形成的脑小血管病细胞模型中发挥作用。

摘要：背景：突触素P38广泛存在于机体所有神经终末，与神经生长、修复、再生和突触重塑密切相关。目的：实验假设细胞移植及电刺激治疗对突触素P38具有调节作用，拟验证这种作用对局灶性脑缺血大鼠突触素P38表达的影响，设计、时间及地点：随机对照动物实验及细胞观察，于2005—0812007—02在佳木斯大学神经科学研究所完成。材料：清洁级8周龄Wistar大鼠96只，随机分为神经干细胞组、电刺激＋神经干细胞组、共移植体组、电刺激＋共移植体组，24只，组。另取新生24h内Wistar鼠和1～7d龄Wistar鼠各2只，分别用于神经干细胞、脑微血管内皮细胞的分离培养。方法：将传代的脑微血管内皮细胞按3×10^7L^-1密度接种在培养瓶中，贴壁后吸出脑微血管内皮细胞培养液，涂一层层粘连蛋白后接种于神经干细胞上，密度为6×10^7L^-1，待神经干细胞贴壁后吸出培养液，再涂以一层层粘连蛋白，接种3×10^8L^-1密度的脑微血管内皮细胞，共培养12～24h，将细胞从瓶壁上依次刮起，适力吹打成1~3个脑微血管内皮细胞与5～18个神经干细胞相互包绕的细胞团，过滤后筛网上的细胞团即为神经干细胞-脑微血管内皮细胞的共移植体。各组大鼠均采用线栓法建立大脑中动脉缺血模型，其中电刺激＋神经干细胞组、电刺激＋共移植体组大鼠于造模前1d行小脑顶核刺激，电流强度50μA，频率100Hz，时程0．5ms，连续刺激1h。造模后3d将培养的神经干细胞、共移植体溶解于磷酸盐缓冲液中，调整浓度为2×10^10L^-1，各组均于右侧纹状体缺血半暗带区移植对应悬液10μL。主要观察指标：移植后3，7，14．60d免疫组织化学法检测缺血区突触素P38的表达。结果：光学显微镜下突触素P38阳性细胞染色呈棕黄色点状或颗粒状沉积，分布较密集，主要分布在神经毡内，部分围绕在神经元胞体周围。移植后各时间点电刺激＋神经干细胞组、共移植体组、电刺激＋共移植体组脑缺血区突触素P38的表达均明显高于神经干细胞组（P〈0.05）：且电刺激＋共移植体组升高幅度显著大于前2组（P〈0．05）。并随移植时间的延长突触素P38表达逐渐增加（P〈0．05）。结论：电刺激小脑顶核与共移植体整体干预有助于脑缺血区突触素P38的表达，作用优于单纯神经干细胞、单纯共移植体或电刺激＋神经干细胞等移植方式。

摘要：目的探讨选择性脑降温对老年脊柱外科内固定患者术后血脑屏障功能及谵妄发生的影响。方法选取2022年5月—2023年7月在武汉市第四医院静吸复合全身麻醉下行脊柱外科内固定术的患者126例。采用简单随机分组法将患者分为选择性脑降温组(SBC组)和对照组(C组)。两组患者均采用液体加温联合体表加温毯,保持加温直至手术结束,SBC组患者使用设定温度为4℃的电子冰帽进行选择性脑降温。分别于麻醉诱导前(T_(0))、麻醉诱导后30 min(T_(1))、60 min(T2)、90 min(T_(3))、120 min(T_(4))、150 min(T_(5))、术毕(T_(6))和出麻醉恢复室(PACU)(T_(7))时记录患者鼻咽温、肛温,于T_(6)时从患者肘正中静脉抽取患者外周静脉血样,采用免疫磁珠法分离鉴定脑微血管内皮细胞(BMECs),荧光显微镜下计数细胞;术前1天、术后第1天及术后第3天分别采用散射比浊法及酶联免疫吸附试验测定外周血C反应蛋白(CRP)、S100β蛋白浓度;手术后第1~3天同时采用3分钟谵妄诊断量表和谵妄评估量表-98修订版量表(DRS-R-98)评估患者术后谵妄(POD)的发生情况。结果两组患者性别构成、年龄、体重、文化程度比例、高血压病史率、心脏病史率、糖尿病史率、美国麻醉师协会分级Ⅲ级率、术中低血压、手术持续时间、输液量、失血量、自体血回输量、常规抗菌药物使用率比较,经χ^(2)/t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。SBC组T_(6)时静脉血BMECs计数、POD率均低于对照组(P0.05)。两组患者T_(1)~T_(7)时肛温比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的肛温比较,差异有统计学意义(P<0.05);②两组患者肛温比较,差异有统计学意义(P<0.05);③两组患者肛温变化趋势比较,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者术前、术后1 d、术后3 d血清CRP、S100β浓度比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间血清CRP、S100β浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05);②两组患者血清CRP、S100β浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05);③两组患者血清CRP、S100β浓度变化趋势比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后第1天、术后第2天及术后第3天DRS-R-98评分比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的DRS-R-98评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);②两组患者DRS-R-98评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);③两组患者DRS-R-98评分变化趋势比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SBC组POD总发生率低于对照组(P<0.05)。结论选择性脑降温能安全降低行脊柱外科内固定老年患者术中脑局部温度,维持患者血脑屏障结构和功能的稳定,降低患者POD的发生风险。