摘要：目的探讨动脉粥样硬化过程中影响平滑肌细胞凋亡的各种影响因素及其传导通路。资料来源应用计算机检索M edline1995-01/2003-12有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,检索词为“atherosclerosis,apoptosis,SM C”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中文期刊全文数据库及万方数据库1994-01/2003-12有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,限定文章语言种类为中文,检索词为“动脉粥样硬化、凋亡、平滑肌细胞”。资料选择选取所有检索到的相关文献,包括动物实验、细胞培养和临床研究,进行初审,排除不符合要求的文献。评价指标主要是内容是否所需,资料是否真实,设计是否严密,实施过程是否严格,统计学处理是否合理。资料提炼共检索48篇有关平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化关系的文献,其中16篇符合要求。排除的32篇中,26篇与平滑肌细胞凋亡的调控无关,6篇内容重复。资料综合选取16篇文献,对动脉粥样硬化中平滑肌细胞凋亡的调控因素进行深入分析。①动脉粥样硬化中影响细胞凋亡的外部信号氧化低密度脂蛋白、机械扩张、炎性细胞因子、活性氧、血管紧张素Ⅱ和内皮素1等。②动脉粥样硬化中影响细胞凋亡的内部基因及传导信号c-m yc、Bcl-2、P53、Id3基因及白细胞介素1β转换酶家族。结论动脉粥样硬化中平滑肌细胞凋亡的调控需要外部影响因素和内部相关基因通过不同的传导通路共同完成。

摘要：目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Sur- vivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响。方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框；将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24～48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA；再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达；DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡。结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86．9%；蛋白表达水平亦显著降低；TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60．13±5．71)个和(5．47±0．63)个,两组差异有统计学意义(P＜0．01)；FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2．1%、4．9%、11．7%和32．6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1．5%,两组差异有统计学意义(P＜0．01)。结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡。

摘要：背景:脑海马区作为脑损伤后的选择性易损区,在伤后某些早期基因超表达、兴奋性氨基酸过度释放以及神经细胞延迟性死亡等方面对外源性刺激较为敏感。目的:探讨脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素改变与脑海马区神经细胞凋亡之间的相关性。设计:观察对比动物实验,采用配对t检验及多元线性相关分析。单位:华北煤炭医学院附属开滦医院神经外科。材料:实验于2003-02/06在华北煤炭医学院分子生物学实验室完成。取二级健康雄性W istar大鼠126只,体质量250～350g,随机分成3组,即实验组60只、对照组60只和正常组6只,其中前两组又各自分成0.5,1,3,6,12,24,72,120,168,240h 10个时相组,每组6只大鼠。方法:实验组按照改良Feeney 自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型;对照组动物只颅骨开窗,不致伤;正常组动物不做任何处理。各组大鼠脑挫裂伤后各时相点的血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区凋亡神经细胞数量检测采用硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法及原位末端标记法。主要观察指标:脑挫裂伤大鼠血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡情况。结果:126只大鼠全部进入结果分析。①实验组大鼠血清一氧化氮、内皮素与脑海马区c-fos m RNA 表达水平:均在脑挫裂伤后6h 达高峰犤(81.45±2.41)m m ol/L,(20.29±1.63)ng/L犦,伤后12h 开始逐渐回落犤(66.11±1.97)m m ol/L,(20.14±1.63)ng/L犦。大鼠脑挫裂伤后0.5h 至120h一氧化氮水平、0.5h 至168h 内皮素水平与正常组和对照组各相应时间点比较,均明显升高(t=3.33～27.91,P <0.01)。②实验组大鼠脑海马区神经细胞凋亡情况:于伤后168h 达到高峰(27.33±1.86)×102个/m m 2,伤后240h 开始下降(21.67±2.07)×102个/m m 2。正常组脑海马区神经细胞未见凋亡细胞,对照组脑海马区凋亡神经细胞数量极少。③实验组大鼠血清一氧化氮水平、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡之间的关系:存在显著正相关性(r=0.838,P <0.01;r=0.281,P <0.05)。结论:大鼠脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素水平之间以及与脑海马区神经细胞凋亡之间存在着特定关系。一氧化氮与内皮素相互影响、相互作用,参与调控了脑挫裂伤后的病生理过程,从而诱导了脑海马区神经细胞的凋亡。

摘要：目的观察应用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制肺癌A549细胞中Survivin表达对细胞凋亡和顺铂耐药性的影响。方法设计、合成特异性抑制Survivin表达的siRNA，转染肺癌A549细胞48h后，检测Survivin基因mRNA表达量以及肺癌细胞凋亡率和对顺铂耐药性变化。结果A549细胞转染Survivin特异siRNA后，Survivin／β-actin基因mRNA表达比例1．17±0．25下降至0．41±0．18，抑制率65．10％；细胞凋亡率由2．67％上升至32．33％；顺铂半数抑制浓度（IC50）由6．37mg／L降低至2．42mg／L。结论通过siRNA特异性抑制肺癌A549细胞中Survivin基因表达可增加凋亡，逆转顺铂耐药。

摘要：背景:骨质疏松涉及破骨细胞分化成熟和成骨类细胞凋亡两方面,肿瘤坏死因子α能诱导多种细胞凋亡且效率差异很大,骨保护素能抑制破骨细胞成熟,但对成骨类细胞凋亡的作用未见报道。目的:探讨肿瘤坏死因子α能否诱导成骨类细胞凋亡及骨保护素能否抑制其凋亡。设计:以成骨细胞和MG63细胞作为实验对象、以鼠WEHI164细胞系用于阳性对照的观察对比分析。单位:解放军总医院全军口腔医学研究所、美国匹茨堡医学院退伍军人医疗中心。材料:本实验于2001-01/2003-12在***实验室和口腔研究所实验室完成。选择商品化细胞系,RPMI1640培养液和各种相关蛋白用于实验。方法:用人间充质干细胞在分化培养液中培养21d使之成为成骨细胞,与MG63一起用于凋亡实验。AnnexinV和原位末端标记法检测肿瘤坏死因子α诱导成骨类细胞凋亡。主要观察指标:全部细胞数及凋亡细胞数。结果:和FasL诱导细胞凋亡一样,肿瘤坏死因子α能引起MG63骨肉瘤细胞,间充质干细胞和成骨细胞的凋亡,并表现为明显的浓度依赖和时间依赖。低浓度肿瘤坏死因子α(170～500pmol/L)作用于细胞2～4h就显示了较明显的凋亡,而骨保护素在0.45～1.5nmol/L浓度时,几乎完全抑制了500pmol/L肿瘤坏死因子α诱导的凋亡。成骨细胞分泌骨保护素,而破骨细胞及破骨前体细胞产生肿瘤坏死因子α,它们相互作用降低成骨细胞的凋亡。结论:肿瘤坏死因子α能诱导成骨类细胞凋亡,骨保护素能够抑制肿瘤坏死因子α的凋亡诱导作用,从抑制破骨细胞成熟和成骨细胞凋亡两方面表现骨保护素防治骨质疏松的作用机制。

摘要：目的探讨RNA干扰下调Survivin基因表达后膀胱癌细胞生物学行为变化及Sur- vivin基因抗凋亡机制。方法设计、合成一对Survivin编码基因序列特异的小分子干扰RNA(siR- NA),用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞,分不同的浓度组(50～200 nmol/L)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测Survivin基因和Caspasc-3基因mRNA表达。结果Survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,并呈剂量和时间依赖性,最大效应浓度为100 nmol/L,此时与对照比较Survivin表达水平下调75．91%,并显著的抑制了细胞生长,抑制率达55．29%,差异有统计学意义(P＜0．05)。同时,Caspase-3 mRNA表达水平明显上升达239．80%,细胞凋亡率亦增加至45．70%,与对照相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论RNA干扰显著下调Survivin基因表达后,能明显促进T24膀胱癌细胞凋亡并抑制其增殖；Survivin基因可能是通过下调Caspase-3表达来抑制凋亡。

摘要：背景:作者先前已成功建立小动物移植模型,并验证了受者经供体凋亡细胞预处理后能够诱导免疫耐受。目的:验证60Coγ射线体外处理后的供者淋巴细胞预输注诱导猪肝移植特异性免疫耐受的可能性,为不作常规免疫抑制处理成年大动物的移植免疫耐受诱导提供可行的途径。设计、时间及地点:于2004-06/2007-02在南方医科大学南方医院动物研究所完成随机对照动物实验。材料:版纳小型猪16只为供体组,西藏小型猪16只为受体组,五六月龄,体质量15～17kg,雌雄不拘,共行原位肝移植手术16只次。方法:将受体猪按随机数字表法分为2组(n=8),空白对照组受体猪无特殊处理;供体淋巴细胞预处理组受体猪在术前7d经耳静脉注射60Coγ射线处理过的供体淋巴细胞。主要观察指标:应用AnnexinV/PI双标法检测60Coγ射线处理后的淋巴细胞凋亡率,并与正常淋巴细胞进行对照。观察两组受体猪移植术后的存活时间,术后检测肝功能指标及肝脏病理变化。结果:成功建立非转流小型猪原位肝移植模型16例。①60Coγ射线体外处理后的淋巴细胞凋亡率明显高于正常淋巴细胞(P0.05)。结论:60Coγ射线体外照射可以诱导淋巴细胞凋亡,60Coγ射线体外处理过的淋巴细胞预输注未能够诱导小型猪同种异体肝移植特异性免疫耐受。

摘要：目的观察基质交联分子1（STIM1）对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞凋产的影响。方法自行设计合成STIM1小干扰RNA（siRNA）片段，构建可抑制STIM1表达的质粒载体pGCSIL—GFP—STIM1，外源验证其抑制STIM1的有效性后，将其进行慢病毒包装，取名为STIM1-RNAi—LV，转染人PC-3细胞后，检测PC-3细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果构建的pGCSIL—GFP—STIM1质粒载体经测序及聚合酶链反应（PCR）检测，序列准确；经外源性验证，可有效抑制STIM1的表达。将STIMI—RNAi—LV转染入前列腺癌PC-3细胞株后，随时间的延长，实验组PC-3细胞增殖数目明显下降，同对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。转染5d后，实验组PC-3细胞凋亡率为（29．85±0．86）％，阴性对照组（2．92±0．14）％，两组差异有统计学意义（P〈0．05）；同样转染5d后，实验组PC-3细胞中G1期、S期细胞数下降，G2／M期细胞数增加，同对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外抑制前列腺癌PC-3细胞中STIMI表达后，PC-3细胞增殖减慢，细胞凋亡增加，细胞周期发生明显改变。它提示STIM1在前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡过程中起重要作用．

摘要：背景:针灸对脊髓损伤后期神经功能的恢复具有明显的促进作用已得到客观证实,本课题组以往的实验已证实电针可抑制脊髓损伤早期细胞凋亡,但电针抑制细胞凋亡的机制尚不清楚。目的:通过原位杂交及免疫组织化学方法观察电针对凋亡抑制基因Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响,探讨电针干预脊髓损伤早期细胞调亡可能的机制。设计:开放性动物实验。单位:解放军第二军医大学解剖学教研室,上海市针灸经络研究中心。材料:成年雄性SD大鼠,清洁级,鼠龄两三个月。Bcl-2原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物科技有限公司);Bcl-2抗体(1∶200,SantaCruzBiotechnology公司)。方法:实验于2004-07/2005-12在解放军第二军医大学解剖学教研室完成。实验大鼠随机分为模型组、电针治疗组、甲基强的松龙组及假手术组。采用改良的Allen’s垂击法致大鼠T10脊髓损伤,损伤后即刻进行督脉电针治疗,应用原位杂交和免疫组织化学方法结合图象定量分析法进行评估。主要观察指标:①脊髓损伤早期Bcl-2mRNA和蛋白的表达。②电针对Bcl-2mRNA和蛋白表达的影响结果:实验过程中如遇动物死亡,及时补充,最终42只大鼠进入结果分析。①假手术组有中等量的Bcl-2mRNA及蛋白表达。模型组在脊髓损伤后6hBcl-2mRNA表达有增高趋势,Bcl-2蛋白表达未见明显变化;伤后24hBcl-2mRNA表达增高,Bcl-2蛋白表达也相应增高。电针组Bcl-2mRNA及蛋白表达均高于模型组(P<0.05),与甲基强的松龙组相比无显著性差异。②电针及甲基强的松龙治疗6h组,Bcl-2mRNA阳性细胞数增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比差异有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。电针24h治疗组,Bcl-2mRNA阳性细胞数显著增高,灰度值降低,与假手术组及模型组相比差异均具有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。③电针24h治疗组,Bcl-2免疫阳性细胞明显增加,灰度值降低,与假手术组和模型组相比,差异具有显著性和非常显著性意义(P<0.05～0.01)。结论:电针可上调Bcl-2mRNA及蛋白的表达,进而对脊髓损伤早期细胞调亡具有部分抑制作用。

摘要：背景:胶质瘤的发生、发展不仅涉及细胞周期调控基因,也涉及到细胞侵袭、转移和细胞凋亡的调节基因。目的:用基因芯片技术分析不同分化程度的胶质瘤细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因,为进一步研究胶质瘤细胞的增殖和凋亡机制奠定基础。设计:开放性实验。单位:解放军第三军医大学,西南医院病理学研究所,基础医学部神经生物学教研室,新桥医院药剂科。材料:人脑恶性胶质瘤细胞系CHG-5(WHO分级为Ⅱ级)由本实验室建立并保存培养;SHG-44(WHO分级为Ⅳ级),由苏州医学院附属二院脑肿瘤研究室提供,小牛血清由杭州四季青生物材料研究所生产并提供。实验中还采用了RPMI-1640培养基(Gibco)、Trizol试剂盒(Gibco-BRL)、RNAsecureTM溶液(Ambion,Austin,Texas)、光度适应计(Eppendorf,Hamburg,Germany)。基因芯片含9,984个人类cDNA片段,由香港城市大学准备和提供(UniGEMV2cloneset已知的基因和ESTs购自Incyte公司),SuperscriptⅡ反转录酶由Gibco-BRL公司提供,荧光染料Cy3&Cy5为AmershamPharmacia公司产品。方法:实验于2001/2003在重庆第三军医大学和香港城市大学完成。用Trizol试剂盒抽提总RNA,用SuperscriptⅡ反转录酶进行反转录聚合酶链反应,并用荧光染料Cy3&Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测人胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44瘤细胞基因表达的差异,特别是与细胞增殖和凋亡相关基因表达的差异,并用Northernblot杂交来验证芯片结果。主要观察指标:不同分化程度的人胶质瘤细胞基因表达的差异;Northern杂交结果与相应基因芯片结果的比较。结果:①与CHG-5相比,SHG-44细胞中检测到了有120个基因表达明显上调和22个基因表达明显下调,这些差异表达基因的种类很多,其中凋亡类相关基因共6个,上调基因有3个,下调基因3个;细胞周期与增殖类相关基因共12个,上调基因有5个,下调基因7个。②芯片结果进一步得到Northernblot杂交结果的支持。结论:初步揭示了胶质瘤进展的差异表达基因,特别是与细胞增殖和凋亡相关的差异表达基因。