摘要：采用独立设计的反复冻融方法,去除兔颈总动脉中的血管细胞,对所获得的细胞外基质进行组织、生化、力学等分析。在分离兔颈总动脉后,首先用低渗缓冲液处理,然后经低温反复冻融,最后用非离子型去污剂处理。所得的支架行组织染色和扫描电镜分析,显示基质的微观结构;荧光染色和基因组DNAPCR分析,检测细胞DNA残留;分别行羟脯氨酸定量分析和轴向拉伸强度分析,检测胶原蛋白和血管生物力学性能的变化;支架没有明显的细胞毒性,溶血率低于医用材料的标准;支架随时间缓慢降解。种植兔的骨髓干细胞,研究细胞在支架上的粘附生长能力。应用本方法能彻底去除血管细胞,没有细胞碎片和DNA的残留,并保留了较完整的细胞外基质和力学性能,具有开放的大孔径结构,细胞生物相容性好,是一种理想的组织工程血管支架材料。

摘要：1987年,美国科学基金会在华盛顿举行的生物医学小组会上正式提出了组织工程这一概念,并在1988年将其正式定义为：应用生命科学和工程学的原理及其技术,以生物材料为载体,研究开发、设计构建或重建具有生理功能的组织和器官。

摘要：背景:目前对几种脱细胞方法的效果各家观点不同。大都认为各种方法均可去除细胞,但实验结果却有较大差异。目的:对比胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法和去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及生物力学特征。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-10/2008-07在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和上海交通大学医学院附属新华医院进行。材料:40个新鲜猪主动脉瓣120片瓣叶分为3组,分别为胰蛋白酶组、十二烷基硫酸钠组和去氧胆酸钠组,每组40片。方法:胰蛋白酶消化法:置于0.5g/L胰蛋白酶和0.2g/L乙二胺四乙酸,在37℃,体积分数为0.05CO2培养箱中振荡24h。十二烷基硫酸钠法:置于0.3g/L十二烷基硫酸钠和DNase,RNase中持续振荡24h。去氧胆酸钠法:首先在5g/LTriton-X100,5g/L去氧胆酸钠,0.2g/L乙二胺四乙酸中振荡24h,然后在2.5g/LTriton-X100,2.5g/L去氧胆酸钠和0.2g/L乙二胺四乙酸中破膜去污振荡48h,两阶段均加入DNase,RNase。主要观察指标:3种方法去细胞前后心脏瓣膜的生物力学特性变化。3种方法去除细胞程度和对胶原纤维、弹力纤维的影响。结果:去氧胆酸钠组拉伸率、最大拉伸应力、最大载荷均高于十二烷基硫酸钠组和胰蛋白酶组(P<0.01)。胰蛋白酶法脱细胞效果差,对基质破坏明显;十二烷基硫酸钠法可完全脱细胞,对基质破坏较大;去氧胆酸钠法完全脱细胞同时对基质破坏较少。结论:与胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法比较,去氧胆酸钠法脱细胞效果好,能更好保护基质。

摘要：背景：研究表明同种瓣膜移植术后发生的退行性变性与其留存的细胞成分激发宿主免疫反应有显著的相关性。目的：采用超高压结合核酸酶洗涤方法处理猪带瓣膜血管。观察瓣膜脱细胞的效果及猪内源性反转录病毒的去除情况。设计、时间及地点：对比观察实验。于2004-04／2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成。材料：实验选用月龄1-3个月的健康雄性迷你猪幼猪，体质量3-5kg。方法：无菌条件下取出猪带瓣肺动脉血管。分为3组：对照组：无任何处理。表面活性剂组：将带瓣管道用Triton X-100溶液浸渍、搅拌24h后洗净。超高压处理组：用超高压设备以981MPa超高静水压（4℃）将供体来源细胞压碎。结合核酸酶的消化作用，磷酸盐缓冲液的搅拌洗涤，脱去细胞残片形成带瓣膜血管支架。主要观察指标：光镜下观察支架形态结构，透射电镜下观察支架细胞成分去除和支架纤维保留情况。扫描电镜观察支架表面的超微结构。观察两种方法处理瓣膜的弹性率差异。检测猪内源性反转录病毒前病毒DNA。定量检测超高压脱细胞前后带瓣管道中DNA含量的变化。结果：①超高压处理组瓣叶及瓣根组织表面及内部细胞完全消失。保留了细胞外基质，DNA含量显著降低。表面活性剂组瓣根组织深部的细胞无法渗透、除去。②超高压处理组瓣膜弹性率几乎不变。瓣膜功能保持较好。表面活性剂组瓣膜弹性率增加。③超高压处理组猪内源性反转录病毒被成功灭活，无法测出。表面活性剂组无法将猪内源性反转录病毒灭活。结论：采用超高压脱细胞方法可基本除去支架内细胞成分，可将内源性反转录病毒成功灭活。保持了细胞外基质结构和功能的完整性，脱细胞效果优于表面活性剂方法。

摘要：背景：构建组织工程血管支架的研究多集中于生物可降解支架和脱细胞同种或异种血管支架方面,但存在急需解决的若干问题：如生物可降解支架生物降解速度的控制以及植入脱细胞天然血管支架可能带来供体来源病毒细菌感染受体问题等。目的：采用超高压结合核酸酶洗涤方法（超高压脱细胞技术）处理同种异体血管,观察该方法的脱细胞效果以及猪内源性反转录病毒的去除情况。设计：对比观察实验。单位：日本国立心血管病中心研究所。材料：实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成。选用健康雄性迷你猪幼猪,由日本九州鹿儿岛JapanFarm食用猪养殖场提供,体质量3～5kg,猪龄1～3个月。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验涉及的主要试剂和仪器：Hoechst33258为日本同仁化学研究所产品;超高压设备KOBELCO为神户制钢所产品;PCR为GENEAMPPCRSYSTEM9700产品。方法：实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成。无菌条件下取出猪降主动脉血管,用超高压设备以981MPa超高静水压（4℃）将供体来源细胞压碎,结合核酸酶的消化作用,PBS的搅拌洗涤,脱去细胞残片形成血管生物支架。主要观察指标：①利用Hoechst33258荧光探针,定量检测超高压脱细胞血管中DNA含量;用JEMl00cx型透射电镜观察血管组织细胞成分去除和支架纤维保留情况;用JBM5200型扫描电镜观察支架的超微结构;100倍光镜下观察血管壁形态结构。即从组织学、分子生物学、免疫组组织化学水平评估超高压脱细胞方法的抗原去除效果。②用PCR方法检测幼猪脱细胞血管中的猪内源性反转录病毒（PERV）前病毒DNA,评估超高压脱细胞方法对以猪内源性反转录病毒为代表的病原微生物的杀灭效果。结果：①血管壁形态结构：血管壁纤维波浪状结构保存完好,组织内的细胞均被除去。②细胞去除效果：透射电镜见细胞成分均已消失。但保留有胶原纤维和弹性纤维。扫描电镜可见细胞已被完全脱去,只剩脱细胞支架。③病原微生物的杀灭效果：经过超高压处理,猪内源性反转录病毒被成功灭活,无法测出。而采用表面活性剂脱细胞组无法将猪内源性反转录病毒灭活。④DNA含量：超高压脱细胞处理前,血管中DNA含量为（31.7±3.5）mg/L;超高压脱细胞处理后,DNA含量为（1.16±0.23）mg/L,DNA含量显著降低（P〈0.01）,提示超高压脱细胞方法已将细胞核及内容物大部分除去。结论：实验证明采用超高压脱细胞方法可基本除去支架内细胞成分,可以将病源微生物杀灭（将猪内源性反转录病毒成功灭活）。

摘要：在使用脱细胞方法去除组织器官中的细胞成分后,通常仅保留细胞外基质,以此来获得脱细胞生物支架。脱细胞生物支架在组织工程领域有广泛研究,应用于多种组织与器官并取得了良好的效果。脱细胞方法多种多样,在单独使用其中一种方法难以得到好的脱细胞效果时,可将多种方法结合使用以得到较好的脱细胞效果,但也要注意根据不同组织的特点选择合适的脱细胞方法。获得脱细胞支架后可通过组织学染色等方法检测脱细胞效果及生物相容性等情况。

摘要：目的:制备低免疫原性异种脱细胞神经基质并评估其理化性能。方法:以α-1,3-半乳糖苷转移酶基因敲除(GTKO)猪坐骨神经为实验原料对基因敲除猪坐骨神经进行脱细胞处理制备低免疫原性异种脱细胞神经基质,通过HE、DAPI染色及DNA残留量检测评价神经组织的脱细胞效果;I型胶原、层黏连蛋白、纤连蛋白免疫组织化学及天狼猩红染色评价脱细胞神经细胞外基质组分保留情况;α-1,3-半乳糖基(a-gal)免疫荧光检测异种抗原a-gal的残留;扫描电镜(SEM)分析脱细胞神经三维组织结构及孔隙率。结果:组织染色显示脱细胞神经基质内膜、外膜、束膜中的细胞均去除干净,DNA定量结果显示DNA含量下降了95%。天狼猩红染色及免疫组织化学结果显示脱细胞神经组织较好地保留了胶原纤维与细胞外基质主要蛋白。SEM结果显示脱细胞神经较好地保留了其三维组织结构,细胞毒性检测表明脱细胞神经基质无细胞毒性。结论:本研究自主设计的四联脱细胞方案能彻底去除神经组织中的细胞成分与异种抗原,并且较完整地保留了神经组织结构,与天然神经具有高度相似性。

摘要：肿瘤微环境的组分构成复杂,在肿瘤演进中发挥重要调节作用。细胞外基质(extracellular matrix,EMC)是肿瘤微环境中调控癌症进展的重要介质,将ECM加入肿瘤模型构建中,可以更完整地在体外模拟肿瘤微环境。作为类器官生长的介质,基质胶起到ECM的功能。常见的此类ECM来自小鼠肉瘤重组基底膜自然衍生的基质胶;因为基质胶存在批次间差异,影响实验的可重复性。为了克服此类问题,研究者们设计了合成基质胶。本文将根据目前肿瘤类器官培养过程中基质胶的研究和应用进展进行概述,为类器官培养、培养细节的不断优化提供参考,让肿瘤类器官的培养实现更高效和低成本,有助于更好地推动肿瘤研究的基础和临床转化,为癌症治疗和预防提供更有效的策略。