摘要：目的用基因工程的方法克隆表达丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)融合蛋白,以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断。方法针对PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-PDC-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PDC-E2重组质粒。IPTG诱导表达后,获得PDC-E2融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的免疫原性。结论获得PBC特异性靶抗原的多肽片段,为PBC的早期发现和临床诊断提供有力工具。

摘要：当前,自身免疫性疾病的防治形势依然严峻,可选的临床药物有限,且治疗效果不尽如人意。已知自身抗原的暴露被免疫系统识别是自身免疫性疾病的关键起始环节,而产生的自身抗体又是致病的主要因素。当前,精准医学已经成为疾病防治的共识,采用特异性的封闭分子(如"诱饵抗体"或"诱饵抗原")精准靶向自身抗原和自身抗体防治自身免疫性疾病势在必行。同时,它能够避免影响机体正常的免疫应答,有望为自身免疫性疾病的防治提供新的策略,也将引领该领域新药研发的潮流。本文对设计或制备的"诱饵抗体"和"诱饵抗原"靶向自身抗原和自身抗体防治2种最常见的自身免疫性疾病系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)和类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的研究进展作一综述。

摘要：目的重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床诊断和病情监测。方法针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a(+),构建重组表达载体PET28a(+)-gp210,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋白,进一步经Ni2+亲合层析柱纯化。应用重组gp210融合蛋白建立间接ELISA,检测PBC患者血清中的抗gp210抗体。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PET28a(+)-gp210重组质粒。经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了具有免疫原性的重组gp210融合蛋白。经ELISA检测,PBC患者中抗gp210抗体的阳性率为40.5%,与疾病对照组及正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。PBC患者临床资料分析表明,抗gp210阳性患者中IgM浓度显著高于抗gp210阴性患者;经UDCA治疗后,28位PBC患者中,3例抗gp210抗体由阳性转为阴性,9例抗gp210抗体持续阳性,1例抗gp210抗体由阴性转为阳性,16例抗gp210抗体持续阴性;其他临床症状与抗gp210抗体无显著相关。结论应用重组gp210融合蛋白建立ELISA检测自身抗体,对PBC诊断具有较好的特异性,为PBC的临床诊断和病情监测提供了有力依据。

摘要：核酸疫苗能诱导抗原特异的细胞免疫和体液免疫反应,抑制肿瘤生长。由于肿瘤抗原大多数是属于自身抗原,因此,打破机体对自身抗原的免疫耐受是肿瘤疫苗必备的前提条件,提高疫苗的免疫效能是抗肿瘤核酸疫苗发展的关键目标。本综述描述近期在抗肿瘤核酸疫苗的设计中有关优化抗原表位研究的进展。

摘要：目的克隆表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原侧链2-氧酸脱氢酶复合体E2(BCOADC-E2)、丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)及其连接形成的二联体BP-E2融合蛋白,用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期临床诊断。方法根据BCOADC-E2,PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-BCOADC-E2,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-BP-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE,Western blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的BP-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的实验室诊断。

摘要：目的　设计克隆表达抗原蛋白三联体 BPO,利用纯化的重组 BPO,建立原发性胆汁性肝硬化 ( primary biliarycirrhosis,PBC)特异性免疫学诊断方法。方法　利用基因工程方法克隆表达 M2抗原及其三联体 BPO,并加以鉴定。纯化BPO,建立 ELISA法。应用 ELISA法检测 1 7例 PBC患者血清 M2抗体 ,以 1 67例非 PBC患者和 1 2 2 5例健康人作对照。结果　 1 7例临床诊断为 PBC的患者 ,M2抗体均为阳性 ,而对照组 M2抗体均为阴性。结论　本法检测 M2抗体有较好的敏感性及特异性 ,为 PBC的临床诊断提供了有效手段。

摘要：目的重组表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)及其连接形成的二联体PO-E2融合蛋白,已用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断。方法针对PDC-E2,OGDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-P0-E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质。表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定。结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的PO-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断。

摘要：干扰素α(IFNα)的应用是目前国际上公认的丙型肝炎治疗药物,但其疗效仍不十分令人满意。随着丙肝病毒(HCV)以及HCV与肝细胞之间相互作用的分子生物学机制的阐明,将有助于抗HCV基因治疗新方案的设计,标志着抗病毒治疗的一个重要研究方向。

摘要：【简讯】 临床免疫治疗新进展 免疫治疗肿瘤的临床应用在多个领域迅速发展,包括抗肿瘤反应性T细胞的过继转移,治疗性疫苗的应用等。最近的研究显示临床和免疫学终点得到了改善。实验室设计的新策略以及临床前期的动物肿瘤模型中所证明的理论正在进入临床应用,目的是增强目前治疗的有效性。新策略包括通过抑制调节性T细胞提高T细胞的共刺激分子,联合重组细胞因子和其他具有免疫增强活性的分子打破对肿瘤自身抗原的免疫耐受。(Curr Opin Immunol 2004 Apr;16:130～136)