摘要：背景:肿瘤对于化疗药物具有耐药性,而耐药性产生又与肿瘤干细胞密切相关。因此,如何靶向杀伤肿瘤干细胞,将成为口腔鳞癌治疗的关键。目的:探讨5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113肿瘤细胞生物学特性的影响。方法:利用CCK-8实验检测不同质量浓度5-氟尿嘧啶对Tca8113细胞活性的影响,筛选相对较好的药物质量浓度和作用时间进行后续实验,以不添加5-氟尿嘧啶为对照组,流式细胞仪检测细胞周期及肿瘤细胞中侧群细胞比例的变化,划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力变化。结果与结论:CCK-8检测显示:5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113细胞系细胞的活性抑制呈时间及药物浓度的正相关关系,50 mg/L 5-氟尿嘧啶作用48 h时,细胞活性抑制效果相对较好。流式细胞仪细胞周期检测显示:实验组G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P=0.01),S期细胞较对照组下降(P=0.244),实验组G2/M期细胞完全消失(P=0.00)。5-氟尿嘧啶处理后侧群细胞比例较处理前明显升高(P=0.00)。细胞划痕实验显示实验组划痕愈合能力较对照组增强。结果表明5-氟尿嘧啶药物筛选人舌鳞癌Tca8113细胞可以作为富集类肿瘤干细胞的方法之一。

摘要：目的研究Fas配体(FasL)及FasL反义寡脱氧核苷酸(ASODN)在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用。方法对人舌鳞癌细胞中FasL表达及功能进行检测,设计合成特异FasL ASODN,转染舌鳞癌细胞,封闭舌鳞癌细胞的FasL表达。通过流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和四唑盐(MTT)等方法,观察基因-蛋白-细胞效应。结果通过RT-PCR检测提示在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO的浓度越高,转染效率越高。MTT/FCM结果显示ASO对SCC-9细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05)。结论 Fas/FasL途径是口腔鳞癌细胞免疫逃逸的重要机制之一,可作为免疫治疗的新靶点。

摘要：目的:观察细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)在舌鳞癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系,探讨体外沉默Cdc42基因对舌鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法:通过免疫组织化学法检测Cdc42基因在舌鳞癌及癌旁组织中的表达,分析Cdc42表达与舌鳞癌临床病理学参数的相关性及对预后的影响。将人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞随机分为3组,分别为Cdc42-siRNA组、阴性对照组和空白对照组。设计并构建针对人Cdc42基因序列的3条小干扰RNA(siRNA),应用脂质体介导转染方法分别将Cdc42-siRNA和NCsiRNA转染至Cdc42-siRNA组和阴性对照组,空白对照组仅加入转染试剂。通过实时荧光定量反转录PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Cdc42的mRNA及蛋白表达,将沉默效率最高的Cdc42-siRNA转染组作为后续实验组。Western blot检测EMT及MAPK JNK/p38通路相关蛋白的表达,CCK-8、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Cdc42在44例舌鳞癌患者中的阳性表达率为70.5%(31/44),在癌旁组织中的阳性率为38.6%(17/44),差异具有统计学意义(P0.05)。体外实验中,Cdc42-siRNA组细胞Cdc42 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),而p-p38-MAPK、p-JNK蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Cdc42-siRNA组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:舌鳞癌患者中Cdc42表达增加,并且其表达与颈淋巴结转移、临床分期及浸润深度相关。沉默Cdc42可能通过阻断MAPK JNK/p38通路抑制舌鳞癌细胞EMT过程,进而抑制侵袭迁移,同时可负向调节舌鳞癌细胞增殖。

摘要：目的研究舌癌与p16基因启动子区域的Cp G岛甲基化的潜在关系,并了解p16基因甲基化与临床病理的关系。方法观察组舌癌标本及对照组正常舌组织标本所提取的DNA,经亚硫酸氢钠处理改变甲基化碱基,设计相应引物(p16-M、p16-U)Q-MSP扩增,检测样本中的甲基化比例。结果观察组甲基化阳性率为64.58%(31/48),对照组阳性率仅2.08%(1/48),差异有统计学意义(P<0.05);舌癌个体中pl6基因甲基化比例与病理分期、发生淋巴转移、组织学分化程度相关,与年龄、性别无关。结论 p16基因启动子Cp G岛甲基化现象与舌鳞癌的发生发展关系密切;癌症发展越晚期、肿瘤浸润更深、发生转移、更低分化者p16基因启动子Cp G岛甲基化的频率更高,但与患者年龄、性别等因素无关。

摘要：目的研究整合素连接激酶(ILK)在细胞中的功能,构建ILK基因sh RNA慢病毒载体,并对其在舌鳞癌细胞株Tca-8113中沉默效果进行鉴定。方法针对ILK基因有效靶序列的3个位点,设计合成3对oligo DNA,退火形成双链DNA,与线性化p ENTR/U6载体连接产生sh ILK-LV慢病毒载体,筛选出阳性克隆测序鉴定,用sh ILK-LV载体、包装质粒Packaging Mix共转染293T包装细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达数目测定病毒滴度并确定恰当的MOI值。获得重组慢病毒后感染人舌鳞癌细胞株Tca-8113,用q PCR及Western blot检测ILK在Tca-8113细胞中的表达。结果测序证实成功构建了3个ILK-sh RNA慢病毒载体,分别转染Tca-8113细胞后用sybr法检测出sh RNA-ILK-370组ILK的表达明显下降,ΔΔCt值为0.268。用sh RNA-ILK-370慢病毒载体包装病毒,测定病毒滴度,并得出当MOI=30-60时,细胞阳性比率最高。用病毒感染Tca-8113细胞后再用抗生素筛选稳转株,后用q PCR检测干扰效率达90.5%,Western blot检测ILK表达明显被抑制。结论成功构建sh ILK-LV慢病毒载体并建立了稳定的Tca-8113-sh ILK细胞模型,为研究ILK在舌鳞癌信号转导通路中的作用提供了坚实基础。