摘要：目的建立1种检测16型乳头状瘤病毒(HPV16)7862nt上CpG位点非甲基化的方法.方法培养宫颈癌SiHa和CaSki细胞系,提取基因组DNA,通过亚硫酸氢钠修饰将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,PCR法预扩增包含该位点的HPV序列,针对该CpG位点5'端序列设计并合成延伸引物,再在同时含ddTrP和ddCTP的体系中进行延伸反应,用变性高效液相色谱法同时分离检测2种延伸产物.结果在SiHa细胞的延伸产物中仅能够检测到代表未甲基化位点的ddTTP延伸产物(保留时间6.7 min),而在CaSki细胞的延伸产物中不仅能够检测到ddTTP的延伸产物,还能检测到代表甲基化位点的ddCTP的延伸产物(保留时间6.3 min).结论所建立的引物延伸-变性高效液相色谱联合检测法能够同时检出感染细胞中非甲基化活化和甲基化失活的HPV病毒拷贝,灵敏度达1/500(0.2%).

摘要：目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定水杨酸25℃平衡溶解度及表观油水分配系数(Papp),为其制剂的设计与制备提供理论依据。方法采用摇瓶法及HPLC法,Waters C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液=(47∶53);柱温:室温;流速:1.0 m L·min-1,检测波长:270 nm;进样量20μL。考察25℃水杨酸在水中,p H值1.0盐酸溶液,p H值2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,7.8磷酸盐缓冲溶液体系中平衡溶解度及Papp。结果25℃下水杨酸在水中平衡溶解度为(2.205±0.020)mg·m L^(-1),Papp为(6.18±0.08);在p H值1.0盐酸溶液,p H值2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,7.8磷酸盐缓冲液中平衡溶解度分别为(1.169×10-3±7.40×10-6),(2.250±0.010),(2.410±0.010),(2.694±0.003),(5.208±0.010),(5.826±0.006),(6.255±0.030),(3.353±0.070)mg·m L^(-1),相应的Papp分别为(16.39±0.19),(4.23±0.07),(6.03±0.11),(5.56±0.10),(1.25±0.01),(0.27±0.001),(0.08±0.001),(0.07±0.002)。结论水杨酸的平衡溶解度随溶液p H值增大而增大;Papp随着p H值的增大而减小。其溶解度小,脂溶性小,属于生物药剂学分类系统(BCS)的Ⅳ类药物。

摘要：目的建立水环境中4种苯并三唑类紫外吸收剂的高效液相色谱测定法。方法取35 ml水样,调节水样pH值为6,采用40 mg Ce/MOF-801固相萃取柱富集5 min,1 ml乙腈洗脱待测物,经C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,以乙腈∶水(体积比为52∶48)为流动相进行等度洗脱,柱温25℃。采用紫外检测器(200 nm)测定4种苯并三唑类紫外吸收剂,外标法定量。结果在0.02~1.00μg/ml的范围内,4种苯并三唑类紫外吸收剂所得回归方程的线性关系良好,r≥0.9992。该方法的检出限为0.057~0.117μg/L,定量下限为0.171~0.351μg/L;平均回收率为79.3%~107.2%,RSD为0.51%~4.47%。吸附剂可重复使用至少8次,富集因子可以达到56.6~73.9。结论该方法具有灵敏、简便且快速等优点,适用于水环境中痕量4种紫外吸收剂的检测。

摘要：霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)是临床常用免疫抑制剂吗替麦考酚酯的活性代谢产物,因其肝毒性、肾毒性低,耐受性好,已被广泛应用于肾、肝或其他组织器官移植后的排异反应和某些自身免疫性疾病的治疗[1]。有研究表明,MPA的药动学和药效学存在极大的个体差异,浓度与疗效之间个体差异很大,浓度与药品不良反应(ADRs)之间也有相关性[2]。而通过治疗药物监测(therapeutic drug monitoring,TDM)调整用药剂量,实现个体化精准用药,可以进一步优化MPA的使用,较好地改善患者预后。

摘要：目的:观察国产选择性5-羟色胺再摄取抑制剂氢溴酸西酞普兰片在正常人体内的药物代谢动力学行为,并与进口氢溴酸西酞普兰片进行生物等效性的对比。方法:选择经医院伦理委员会审议通过的健康男性志愿受试者20人。实验前签署知情同意书,受试期间停服任何药物,并禁烟和酒。采用随机交叉设计,口服国产氢溴酸西酞普兰片和进口氢溴酸西酞普兰片剂40mg,(国产氢溴酸西酞普兰片由北京万全药物技术开发有限公司和徐州恩华药业集团有限责任公司共同研发,20mg/片;进口氢溴酸西酞普兰片,商品名希普妙,丹麦灵北药厂,20mg/片)。服药后0.5～132h内间隔取血。血样加入内标盐酸普萘洛尔经预处理后用高效液相色谱测定。计算主要药物代谢动力学参数,并以进口片剂为参比制剂,估算国产氢溴酸西酞普兰片的生物利用度,判断其生物等效性。结果:志愿者1人缺席,1人在第一轮试验服药后1h发生呕吐,且132h的血药浓度为7.1μg/L,0.5h血药浓度为0,吸收和代谢均有影响,故舍去;其余18人进入结果分析。国产氢溴酸西酞普兰片和进口氢溴酸西酞普兰片的血药浓度-时间曲线均符合二房室模型,其血药浓度-时间曲线下面积AUC0-132分别为(1894.6±460.2)μg/(h·L)和(1876.9±398.3)μg/(h·L),差异无显著性(P>0.05);达峰浓度分别为(46.1±9.8)μg/L和(47.7±11.7)μg/L,差异无显著性(P>0.05);半衰期分别为(37.6±10.0)h和(38.8±9.8)h,差异无显著性(P>0.05);达峰时间分别(3.2±1.9)h和(3.2±1.5)h,差异无显著性(P>0.05)。以进口制剂为对照,用血药浓度-时间曲线下面积AUC0-132计算的国产氢溴酸西酞普兰片生物利用度为(100.3±11.7)%。结论:国产氢溴酸西酞普兰片与进口氢溴酸西酞普兰片具有生物等效性。

摘要：目的优选徐长卿超临界二氧化碳(CO_2)提取工艺条件。方法以丹皮酚提取量为考察指标,采用高效液相色谱法测定其丹皮酚的含量,采用星点设计-效应面法优选其提取条件。结果优选工艺条件为萃取压力10.81 MPa,萃取温度为55℃,CO_2流量为59.91 L·h^(-1),萃取时间为2.42 h。结论优选工艺萃取徐长卿中丹皮酚含量较高,工艺稳定可行。

摘要：目的:设计、合成积雪草酸衍生物,并对其在大鼠体内的药动学性质进行研究。方法:在积雪草酸的3位和23位之间引入异丙叉基,在28位引入苄基,分别合成积雪草酸衍生物3,23-O-异丙叉积雪草酸(A1)和积雪草酸苄酯(Z3),其结构通过1 H-NMR和MS确证。采用随机数字表法将12只大鼠分为尾静脉注射组和灌胃给药组,每组6只。以Z3为内标,建立大鼠血浆中A1的HPLC-MS定量分析方法,并测定尾静脉注射和灌胃给药后不同时间点A1的血药浓度,计算药动学参数。结果:与大鼠灌胃积雪草酸后的药动学参数相比,A1的t1/2和MRT0～∞显著延长,cmax和AUC0～∞分别增加11.14倍和57.51倍,CL降低为6.95%。A1的绝对生物利用度为75.81%,是积雪草酸(16.25%)的4.67倍。结论:本研究合成的积雪草酸衍生物A1的药动学性质优于积雪草酸,具有进一步开发的价值。

摘要：目的:建立HPLC法测定富马酸替诺福韦酯(tenofovir disoproxil fumarate,TDF)口服固体制剂的溶出度,并用两种评价方法对国内4个厂家生产的TDF口服固体制剂仿制药与其原研药的溶出度进行一致性评价。方法:建立并验证测定TDF口服固体制剂在4种溶出介质中浓度的HPLC法。在桨转速优化和耐用性评价的基础上,建立TDF口服固体制剂溶出度评价方法,并采用非模型依赖法和威布尔模型法评价TDF口服固体制剂仿制药与原研药溶出行为的一致性。结果:所建立的HPLC法专属性良好,TDF在103.01~1030.10μg/ml范围内线性关系良好(r>0.999),精密度RSD均0.05)。用非模型依赖法评价时,在4种溶出介质中,除胶囊剂外,其余3种TDF仿制药片与原研药均在15 min内溶出>85%。用威布尔模型法评价时,3种仿制药片与原研药的溶出参数存在差异,国内不同厂家生产的TDF片的溶出参数也存在较大差异,其中C厂生产的TDF片在4种溶出介质中药物溶出50%的时间参数(T 50)、药物溶出63.2%的时间参数(T d)和药物溶出85%的时间参数(T 85)分别是A厂产品的35.31、18.08及5.21倍。结论:本研究建立的HPLC法适用于TDF口服固体制剂溶出度的一致性评价。仅用非模型依赖法评价TDF口服固体制剂的溶出行为存在局限,用威布尔模型法可以更准确地描述不同厂家仿制药的溶出行为。不仅TDF口服固体制剂仿制药与原研药的溶出行为存在差异,而且国内不同厂家生产的TDF仿制药片剂的溶出行为也存在显著差异。

摘要：目的优化清胰颗粒处方与制备工艺,并测定其中蒽醌类成分含量。方法以颗粒成型率、溶化率、含水量、休止角为评价指标,以填充剂与浸膏粉配比、乙醇浓度、黏合剂PEG6000浓度及用量、制粒筛目、干燥温度为考察因素,采用Plackett-Burman(PB)设计优化清胰颗粒的处方与成型工艺。高效液相色谱(HPLC)法测定其中蒽醌类成分含量。结果最佳处方和工艺为:糊精:浸膏粉=0.5:1,乙醇浓度95%,PEG6000浓度1.0%,用量25%,16目筛(筛孔内径:1 180μm)制粒,干燥温度65℃;按此工艺制得清胰颗粒成型率、溶化率、含水量、休止角、吸湿率分别为(94.83±0.47)%,(75.15±0.44)%,(5.96±0.15)%,(22.55°±0.22°),(12.78±0.33)%;芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚均在2.5~40.0μg·mL^-1、大黄素甲醚在2.0~32.0μg·mL^-1范围内线性关系良好。结论该成型工艺合理、可行、稳定,所建立的HPLC法准确,简便,重复性好,可用于清胰颗粒的质量控制。

摘要：目的研究盐酸西替利嗪咀嚼片人体相对生物利用度,并评价其生物等效性。方法采用两周期自身对照交叉试验设计,单剂量口服给药,高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)法测定血浆盐酸西替利嗪浓度,DAS2.0软件处理血药浓度数据并计算参数,评价生物等效性。结果单剂量口服受试制剂盐酸西替利嗪咀嚼片和参比制剂盐酸西替利嗪片20 mg,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0→t)分别为(5.814±1.454),(5.802±1.028)μ***-1.h;AUC0→∞分别(6.358±1.617),(6.236±1.186)μ***-1.h;Cmax分别为(0.749±0.149),(0.716±0.153)μ***-1;tmax分别为(0.819±0.391)和(1.000±0.429)h;t1/2分别为(7.332±0.199)和(7.375±1.420)h;相对生物利用度(99.9±17.5)%。结论所建立的血浆盐酸西替利嗪浓度检测方法可满足相对生物利用度试验方法学要求,受试制剂与参比制剂生物等效。