摘要：茉莉酸是植物体内天然的调节剂,在植物生长发育过程及响应外界环境胁迫方面具有重要的作用。为了分析水稻中茉莉酸的响应基因,设计了Os PDF1.2,Os VSP2,Os JAZ8的定量PCR引物,利用100μmol/L茉莉酸和100μmol/L菲尼酮(内源茉莉酸合成抑制剂)处理的叶片为材料,分析了Os JAZ8,Os PDF1.2,Os VSP2等3个基因对茉莉酸的响应情况。结果表明,Os JAZ8,Os PDF1.2随着茉莉酸处理时间的延长,表达量逐渐升高,随着菲尼酮处理时间的延长,表达量逐渐降低,而Os VSP2则与之相反;Os JAZ8对于茉莉酸的响应较Os PDF1.2,Os VSP2这2个基因更加敏感。据此结果认为,Os JAZ8的表达量可以作为水稻叶片中茉莉酸相对含量的指标。

摘要：【目的】分析枣WRKY转录因子对枣疯病植原体以及不同激素的响应,探讨WRKY基因在枣疯病发病过程中的作用,为进一步研究枣WRKY转录因子的生物学功能及枣与植原体相互作用机制奠定基础。【方法】利用同源比对从NCBI数据库以及转录组数据库鉴定出枣假定WRKY转录因子,并利用SMART等对其进行生物信息学分析;从转录组分析中挑选出差异表达的6个基因,设计定量引物,验证其在灰枣枣疯病发病过程中的表达量变化情况;以‘蜂蜜罐’枣胚培苗为材料,外源施加0.1 mmol·L^(-1)水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)后,利用实时荧光定量PCR(q PCR)技术分析枣WRKY基因的表达量变化情况。【结果】确定了69个枣假定WRKY转录因子,重新命名为ZjWRKY1-69,可分为3个组GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ,GroupⅠ含有17个成员,GroupⅡ又可细分为Ⅱa、b、c、d、e 5个亚组,分别包含3、11、15、3、9个成员,GroupⅢ有11个成员;69个枣WRKY转录因子基因中,有43个ZjWRKY基因可以定位到11条染色体上,但在染色体上呈不均匀分布,7号染色体上没有ZjWRKY基因存在;大部分ZjWRKY蛋白都包含有WRKYGQK保守序列,有2个ZjWRKY蛋白(ZjWRKY23和ZjWRKY46,GroupⅡc)变异为WRKYGKK;GroupⅠ中的WRKY转录因子含有较多的保守基序(10个),且同一个组内WRKY蛋白的保守基序类型及个数相似。从枣疯病发生过程中枣叶片的转录组数据中检测到28个ZjWRKY转录因子基因的差异表达主要集中在嫁接后38~52周。枣疯病发病过程中ZjWRKY8、ZjWRKY52、ZjWRKY61、ZjWRKY69基因表达量发生明显变化(上调)。SA处理后,ZjWRKY42和ZjWRKY52表达量显著升高;MeJA的积累诱导ZjWRKY42和ZjWRKY61的表达量发生较明显变化。【结论】初步确定了枣69个WRKY转录因子,分为3组;43个枣WRKY基因可以定位到11条染色体上,呈不均匀分布,7号染色体上尚没有发现WRKY基因的存在。枣疯病植原体侵染枣树后,诱导了ZjWRKY5、ZjWRKY8、ZjWRKY42、ZjWRKY52、ZjWRKY61基因的表达,SA和MeJA处理后分别使ZjWRKY42、ZjWRKY52和ZjWRKY42、ZjWRKY61表达量显著升高。

摘要：丙二烯氧化物环化酶(allene oxide cyclase,AOC)是茉莉酸生物合成途径中的一个关键酶,在植物防御反应中发挥重要作用。本研究根据白木香转录组高通量测序结果设计引物扩增,利用RT-PCR技术从白木香中首次克隆得到1个AOC基因,命名为AsAOC1,并进行生物学信息分析、原核表达和纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激素诱导表达分析。白木香AsAOC1基因的开放阅读框(ORF)长753 bp,编码251个氨基酸,其蛋白分子质量是27.46 kD。生物学信息分析表明AsAOC1蛋白包含1个保守的allene_ox_cyc结构域,系统进化树显示AsAOC1蛋白与川桑(Morus notabilis)AOC蛋白具有较高的同源性。构建原核表达载体pET28a-As AOC1并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达AsAOC1重组蛋白,利用Ni^(2+)亲和色谱纯化得到可溶性AsAOC1重组蛋白。实时荧光定量PCR检测结果表明AsAOC1基因在茎中表达量最高,根与茎尖次之,叶中表达量最低。盐、干旱、低温以及重金属胁迫均能够诱导白木香愈伤组织中AsAOC1基因表达;茉莉酸甲酯、水杨酸、赤霉素和脱落酸诱导后,愈伤组织中AsAOC1基因的表达量明显上升。本研究为进一步研究茉莉酸途径在白木香结香机制和植物防御反应中作用奠定基础。

摘要：茉莉酸(jasmonic acid,JA)为植物防御反应的重要信号分子,其生物合成途径的关键酶是丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)。本研究以白木香(Aquilaria sinensis)为材料,设计特异引物,克隆了白木香As AOS1基因的c DNA序列,并进行氨基酸序列分析、原核表达和纯化、组织特异性分析及非生物胁迫和激素诱导表达分析。白木香As AOS1基因的开放阅读框(ORF)长1 575 bp,编码524个氨基酸,其蛋白分子质量是58.70 k Da。As AOS1蛋白包含细胞色素P450的保守区域。系统进化树显示As AOS1蛋白与甜橙(Citrus sinensis)AOS蛋白同源性较高。构建原核表达载体p ET28a-As AOS1并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达As AOS1重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱纯化得到可溶性As AOS1重组蛋白。荧光定量PCR结果显示As AOS1基因在茎中表达最高,根次之,叶中表达最低。盐、低温和重金属胁迫能够诱导白木香愈伤组织中As AOS1基因表达,诱导12 h表达量达到最高;激素茉莉酸甲酯、水杨酸和脱落酸诱导后,愈伤组织中As AOS1基因的表达量明显上升,而干旱胁迫和赤霉素处理对本As AOS1基因的表达量影响不大。本研究为进一步研究茉莉酸途径在白木香结香机制和植物防御反应中作用奠定基础。

摘要：通过RT-PCR与RACE技术从唐菖蒲(Gladiolus hybridus)品种‘Rose Supreme’球茎中克隆茉莉酸生物合成途径中的关键酶——12–氧–植物二烯酸还原酶(12-oxo-phytodienoic acid reductase,OPR)基因的1 489 bp全长cDNA序列,quantitative RT-PCR结果表明,GhOPR3在唐菖蒲叶、花、根、匍匐茎、新球茎和籽球中都表达,其中在籽球和匍匐茎中相对表达量较高;0.1～0.5 mmol·L-1的茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJ)处理后,提高了GhOPR3在球茎中的表达量和内源MJ含量;采用农杆菌介导侵染拟南芥花粉,进行GhOPR3基因的过表达分析,过表达拟南芥株系较野生型提高了耐盐性和抗旱性;提高了机械损伤后相关基因的表达水平和内源MJ含量。

摘要：根据已获得的1个在巴西橡胶树自根幼态无性系与老态无性系之间差异表达的SSH片段的序列信息设计引物,通过RACE方法获得了1个橡胶树编码含有R3H结构域蛋白的cDNA(命名为HbR3HP1)。序列分析结果表明:HbR3HP1长为1 286 bp,含有1 056 bp的阅读框、30 bp的5′-UTR和160 bp的3′-UTR,HbR3HP1编码的蛋白质由351个氨基酸组成,分子量为40.23 ku,等电点为8.29。HbR3HP1含有保守的R3H结构域,与1个蓖麻、1个蒺藜苜蓿和3个拟南芥的含有R3H结构域蛋白的同源性分别为82%、64%、65%、56%和54%。定量PCR分析结果表明,HbR3HP1在橡胶树的根、花、叶、树皮、胶乳中均有表达,在树皮和胶乳中表达量相对较高;茉莉酸可以诱导HbR3HP1的表达,乙烯对HbR3HP1的表达基本无影响。

摘要：菜薹因为没有好的雄性不育材料或自交不亲和系,至今尚无一代杂种用于生产,根据拟南芥及白菜型油菜的花药不开裂基因DAD1的保守序列设计引物,扩增菜薹的DAD1基因片段(DAD1F),构建反义DAD1F植物表达载体,用农杆菌介导法转化菜薹,对转基因植株进行分子检测,鉴定其雄性不育性并进行育性恢复试验。克隆得到的菜薹的DAD1基因片段大小为678bp,命名为BrcpDAD1F,其序列与拟南芥和白菜型油菜的DAD1高度同源,同源率分别为88%和99%;共得到了12株转基因植株,有6株在转录水平上得到表达,表现为雄性不育,花器官畸形,花粉活力低,萌发率不到10%,且开花后不能结角果或结空角果,或者得到极少种子但种子不萌发;用对照的花粉给转基因植株授粉可使其正常结实。以500μmol.L-1茉莉酸甲酯处理可使其雄性不育得到恢复,花粉可以在柱头和培养基上萌发,具有受精能力。T1代可育株与不育株的比例都呈1∶3分离,T2代不同株系的育性分离比例不同,有些株系继续呈1∶3的分离,有些株系全是可育株或全是不育株,说明反义抑制呈单基因稳定遗传。

摘要：[目的]为今后深入了解茉莉酸诱导橡胶树乳管分化的分子机理奠定基础。[方法]根据bHLH转录因子基因保守区设计引物,以橡胶树树皮RNA反转录第一链cDNA为模板,获得橡胶树树皮组织bHLH基因的EST序列,以此序列设计巢式引物,应用3′RACE技术对其三端序列进行克隆,并利用半定量RT-PCR分析该基因在茉莉酸处理后4 h、8 h、1 d、2 d、3 d的表达情况。[结果]克隆共得到1 084 bp的HbbHLH基因3端序列,序列分析发现该基因属于MYC型HLH结构域。表达分析结果显示,茉莉酸处理后,bHLH基因在8 h内表达逐渐增强,1 d、2 d时表达稳定最高,3 d时表达水平开始减弱。[结论]茉莉酸对HbbHLH基因的表达具有调控作用。

摘要：为了探究日本结缕草修剪后防御响应的分子机制,分析防御类植物激素茉莉酸(JA)和脱落酸(ABA)对这一过程的影响,对日本结缕草品种"Zenith"在修剪后0,2,6 h和24h四个时间点,创伤叶片的过氧化氢(H2O2)含量及细胞膜透性进行检测,以探究其叶片创伤程度随时间的变化,同时通过对内源JA和ABA水平的检测,以及这两种植物激素信号转导途径四个关键基因相对表达量的检测,来探究JA和ABA对修剪后日本结缕草防御响应的影响,初步探究日本结缕草耐机械损伤胁迫的分子机制,以期为提高禾本科草地植物耐修剪和抗践踏性能提供理论基础。

摘要：bHLH转录因子在高等植物生长发育、激素应答和次生代谢调节中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)HbbHLH1基因设计了2个特异性反向引物,利用Genome Walking方法从巴西橡胶树叶片基因组DNA中克隆获得了HbbHLH1基因起始密码子上游819bp的调控片段。序列分析表明,该片段除了含有一个典型的真核生物核心启动子区域(-60～-10bp)外,还含有多个TATA-box、CAAT-box等启动子元件以及多种与激素和胁迫诱导相关的顺式调控元件,其中在-290bp和-309bp位点分别有一个应答Me-JA信号反应的调控元件,但没有发现典型的乙烯响应元件。这暗示了HbbHLH1转录因子可能在橡胶树乳管分化和胶乳生物合成中具有调控作用。