摘要：目的设计针对结核杆菌耐链霉素(SM)rpsL43密码子的发夹型DNA探针,尝试运用荧光分光光度仪直接观测液相中发夹探针与rpsL43密码子扩增产物杂交后荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计针对rpsL43密码子的发夹探针,应用荧光分光光度仪检测rpsL43密码子扩增片段与探针杂交后荧光信号,并比较扩增产物测序结果。结果通过荧光分光光度仪观测到结核杆菌标准株及SM耐药rpsL43密码子扩增产物杂交荧光信号存在显著差异;20株SM耐药组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,SM耐药组rpsL43密码子突变检出率为70%,测序法突变检出率为65%,发夹探针杂交法假阳性株1例(504S)。结论应用荧光分光光度仪直接观测发夹探针液相杂交荧光信号具有简单、灵敏等优特点;rpsL43密码子点突变是重庆地区SM耐药的主要因素之一。

摘要：目的设计结核分枝杆菌高特异性分子信标探针及优化TB-MB-PCR体系,尝试运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。方法运用软件Beacon designer设计分子信标探针,优化TB-MB-PCR反应体系各组份浓度,运用荧光分光光度计观测反应后的荧光信号。结果优化后的MgCl2、引物、dNTP以及MB在PCR反应体系中的最佳终浓度分别为4mmol/L、0.04μmol/L、0.2mmol/L以及0.04～0.05μmol/L;3种稀释标本TB-MB-PCR阳性产物、TB-MB-PCR阴性产物;TB-PCR阴性产物（空白对照）的荧光信号差异明显。结论高特异性分子信标探针设计较理想、优化后的TB-MB-PCR反应体系灵敏性、特异性好;荧光分光光度仪可直接检测反应产物,有简单、灵敏、准确等优点。