摘要：目的探讨脂肪肉瘤中DDIT3荧光原位杂交(FISH)分离探针判读陷阱及其意义。方法收集DDIT3端粒侧信号簇状扩增的脂肪肿瘤18例,回顾其HE形态、免疫组织化学及临床病理资料,加做MDM2、CDK4扩增FISH检测,结合临床资料、形态学、免疫学、分子结果对其重新诊断。结果18例DDIT3端粒侧信号扩增的脂肪肿瘤均应诊断为高分化脂肪肉瘤或去分化脂肪肉瘤,其MDM2、CDK4基因扩增FISH结果均为阳性。对照说明书探针设计细节并辅以MDM2、CDK4基因扩增FISH实验论证,发现DDIT3分离双色探针位于DDIT3基因两侧,均不覆盖DDIT3基因本身,而DDIT3基因及CDK4基因都位于第12号染色体长臂,距离很近,DDIT3分离探针的端粒侧探针覆盖CDK4基因;因此,当DDIT3分离探针不出现红绿信号分离结果,而覆盖CDK4基因的端粒侧信号出现簇状扩增,不能提示DDIT3基因存在异常,无法支持黏液样脂肪肉瘤/圆细胞脂肪肉瘤的诊断,反而能提示CDK4基因存在扩增改变,因此可支持高分化脂肪肉瘤/去分化脂肪肉瘤的诊断。结论基于临床工作观察,发现脂肪肉瘤中DDIT3 FISH分离探针判读存在陷阱,可能对脂肪肉瘤诊断产生误导。

摘要：目的:比较未经分选直接进行荧光原位杂交(D-FISH)检测和CD138免疫磁珠分选结合荧光原位杂交(MACS-FISH)检测对多发性骨髓瘤(MM)患者细胞遗传学分析的影响。方法:回顾性分析229例初发MM患者的FISH检测结果,一组为140例采用D-FISH法,另一组为89例采用MACS-FISH法,设计探针组合为P53、D13S319、RB1、1q21和IgH,比较两组间细胞遗传学检测结果。结果:D-FISH组遗传学异常总检出率为52.9%,MACS-FISH组总检出率为79.8%,两组间的细胞遗传学异常检出率比较存在显著性差异(P=0.020);两组中检出率最高的细胞遗传学异常基因分别为1q21和IgH,检出率最低的为P53;两组间P53阳性细胞率比较无显著性差异,而D13S319、RB1、1q21和IgH阳性细胞率比较均存在显著性差异(P=0.0002,P<0.0001,P=0.0033,P=0.0032)。D-FISH组骨髓细胞形态学检测浆细胞比例与遗传学异常检出率无显著相关性,而流式细胞术检测浆细胞比例与遗传学异常检出率存在相关性(r=0.364)。MACS-FISH组骨髓细胞形态学和流式细胞术检测浆细胞比例与5种基因的检出率及阳性细胞率均无相关性。骨髓细胞形态学与流式细胞术的浆细胞比例检测结果存在显著性差异(P<0.0001)。结论:CD138免疫磁珠分选技术结合FISH能显著提高MM细胞遗传学异常的检出率。

摘要：寡核苷酸荧光原位杂交技术是一种整合了生物信息学分析、DNA高通量合成以及荧光原位杂交实验的新兴技术。该技术适用于任何具有参考基因组的植物物种,并可根据研究需求设计靶向某个染色体区域、整条染色体或一组染色体的寡核苷酸探针,目前已成功应用于数种植物的核型分析、染色体变异、种群演化、同源染色体配对、单倍型分析和异源多倍体识别等研究。该文详述了植物寡核苷酸探针的设计、扩增和标记、染色体制备以及荧光原位杂交的具体操作流程,以期促进寡核苷酸荧光原位杂交技术在细胞遗传学研究中的应用。

摘要：为了研究芽孢杆菌荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的影响因素,该实验以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为研究对象,分析了不同探针、菌体预处理方式、细胞通透化处理条件及杂交条件对FISH检测结果的影响,并进一步对选出来的探针进行特异性检测。结果表明,在设计的探针中有两个可以特异性识别地衣芽孢杆菌,且使用双探针检测比单探针荧光效果更好,提高1.54倍灰度值;当反应条件为超声分散菌体时间120 s、溶菌酶处理40 min、杂交时间为6 h、甲酰胺浓度为30%时检测结果最佳,其灰度值为41.16、菌体检出率为96.35%;特异性检测表明该方法可以特异性识别地衣芽孢杆菌。该研究建立了一种操作简单的地衣芽孢杆菌的双位点荧光原位杂交检测方法,无需核酸提取及扩增,且具有较强特异性。

摘要：根据博德特氏菌(Bordetellasp.)的16S rRNA基因序列,设计荧光原位杂交(FISH)检测博德特氏菌的寡核苷酸探针FW_iso_62和FW_iso_761,在20%～60%甲酰胺均有很强的荧光信号。采用探针FW_iso_62及其竞争探针,结合Nycodenz和DAPI技术,建立定量检测土壤中博德特氏菌的DAPI-FISH方法。该方法可排除土壤颗粒的自动荧光对细菌信号的掩盖,保证图片中有大量微生物供统计分析,还能有效保存微生物的原位信息。应用该方法分析土壤中1,2,4-三氯苯降解菌-博德特氏菌,结果未受氯苯污染的农田土壤中没有检测到博德特氏菌,而氯苯污染土壤中检测到大量的博德特氏菌,每克土壤含3.78×106个。将该污染土壤中分离的博德特氏降解菌及其降解菌群接种至农田土壤中,降解菌的数量均随培养而增加,一个月后分别占DAPI计数的1.7%和3.8%。本研究设计的探针可有效用于复杂环境样品中博德特氏菌的定性与定量检测。

摘要：腺泡状软组织肉瘤是一种好发于儿童和青年的罕见恶性软组织肉瘤，主要症状为缓慢生长的软组织肿块，多数患者在诊断数年后出现远处转移，预后差。腺泡状软组织肉瘤的肿瘤组织中存在特异性基因非平衡易位：der（17）t（X；17）（p11.2；q25）［1-2］，即Xp11.2处TFE3端粒侧基因经复制后易位至17q25位点，并与该位点着丝粒侧的ASPL基因融合形成ASPL-TFE3基因，同时原X染色体是完整的，而17 q25端粒侧基因丢失。根据腺泡状软组织肉瘤特有的基因改变，我们设计了一种荧光原位杂交（ FISH）多克隆探针，用来判断肿瘤组织内是否存在TFE3基因的非平衡易位，提供了一种诊断腺泡状软组织肉瘤的新方法。

摘要：目的　在龈下菌斑中观察一种未获培养的牙周可疑致病微生物AU126。方法　针对AU126设计并评估特异性探针。使用激光共聚焦显微镜，通过与包含插入子克隆的原位杂交，定量分析荧光信号强度研判杂交严谨度。在严谨度分析获得的特定条件下，将慢性牙周炎患者的龈下菌斑标本与AU126探针进行杂交，运用共聚焦显微镜寻找AU126。结果　AU126探针理想杂交是在10％甲酰胺中进行。通过对细菌轮廓荧光强度均值的判断，证实龈下菌斑中存在ROX-126标记的阳性细菌。细胞呈杆状，长4．0—5．4μm，宽0．64—0．84μm。结论　在评估了AU126探针的特异性以及确定理想杂交严谨度的条件下，运用荧光原位杂交结合激光共聚焦显微镜技术，成功观察到人类龈下菌斑中的一种未获培养微生物AU126。

摘要：探索了用荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)技术检测赤潮藻的可行性.用FISH技术鉴定了2株已知的赤潮甲藻--东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)和塔马亚历山大藻(Alexandrium tamarense).荧光标记的DNA探针是东海原甲藻的核糖体转录单元内间隔区(ITS)序列.研究结果如下:(1)在荧光显微镜下观察与荧光探针杂交后的东海原甲藻细胞,在细胞顶端可见绿色的荧光,而作为对照的塔马亚历山大藻在与标记的探针杂交后没有产生绿色荧光,说明探针只与目标株东海原甲藻反应,不与对照组反应,表明根据ITS序列设计的探针是高度特异的,(2)材料固定后,经蓝光激发,均未产生细胞内源的叶绿素和甲藻素等色素荧光干扰杂交信号的现象,说明固定材料的方法正确.以上的结果表明,FISH技术在鉴定赤潮微藻方面具有其它技术无法比拟的优越性:准确、快速、简单,将其应用到现场定性、定量检测赤潮微藻方面将具有很大的潜力.

摘要：荧光原位杂交技术（FISH）址一项仡在生命科学研究中常用的实验技术。设计“商粒序列的荧光原位杂交定位”实验，交将这一技术转化为适合本科基础实验教学的内容。该实验分为染色体标本的制备和原位杂交两部分，每部分4～5个学时。通过这个实验，学生可以掌握荧光原位杂交技术的实验原理、实验方法及荧光显微镜的使用，并以此提高学生的科研能力和综合素质。

摘要：目的探讨荧光原位杂交法在检测淡水湖泊沉积物硫酸盐还原菌检测中的应用。方法建立荧光原位杂交方法并应用该法进行洱海沉积物硫酸盐还原菌含量分析,所用寡核酸苷酸探针为依据硫酸盐还原菌16SrRNA特异性区域而设计的SRB385。结果荧光显微镜下标本中可见发特异性红色荧光的硫酸盐还原菌菌体。经荧光原为杂交分析,洱海沉积物前18cm硫酸盐还原菌含量为(0.08～8.50)×103个/g,平均为(1.91±2.51)×103个/g。硫酸盐还原菌含量在空间分布上表现为悬浮层、5和8cm深度有较小谷值,3、6和11cm深度有较高的峰值,其中11cm深度形成的峰较宽。结论荧光原位杂交法具有快速准确、检测信号强、杂交特异性高的特点,可以进行淡水湖泊沉积物硫酸盐还原菌含量的检测。洱海沉积物硫酸盐还原菌含量丰富且不同深度的沉积物中硫酸盐还原菌含量分布是不均一的。