摘要：血液系统恶性疾病及实体肿瘤的现代化疗和造血干细胞移植治疗,使得患者获得较彻底的治疗.微小残留病(minimal residual disease,MRD),是影响治疗效果的一个重要临床问题.在目前判断标准确定的MRD范围内,常规骨髓细胞形态学及细胞遗传学方法,不能敏感地检测MRD,难以客观地对病情转归进行科学预测,使治疗存在较大的盲目性.检测MRD的临床意义,在于指导治疗方案设计、发现耐药、评估疗效、预测复发.

摘要：目的:为观察溴结构域包含蛋白2(bromodomain containing protein 2,Brd2)基因在小鼠中枢神经系统的表达与分布,本研究制备了两条地高辛标记的Brd2 cRNA探针。方法:提取小鼠脑组织总RNA,设计两对Brd2引物,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增得到两个Brd2的DNA片段,并将它们分别克隆到pCRⅡ-TOPO载体中。利用体外转录方法合成地高辛标记的cRNA探针,最后通过荧光原位杂交实验分析所标记探针的特异性及杂交效果。结果:本实验成功构建了两个Brd2/pCRⅡ-TOPO质粒,获得了特异性的地高辛标记的Brd2cRNA探针,在荧光原位杂交实验中应用两条探针得到了较好的杂交信号。结论:本实验制备的地高辛标记的cRNA探针可特异地检测Brd2 mRNA,为进一步观察Brd2 mRNA在中枢神经系统的分布及功能研究提供了工具。

摘要：本研究设计了一种基于沙门氏菌毒力基因侵袭蛋白A(invA)的特异性肽核酸(PNA)探针,在前期优化条件的基础上,建立并评估了沙门氏菌肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)的检测方法。特异性试验结果显示,该方法的Sal-invA探针除对目标菌杂交呈阳性外,与12株常见的非目标菌杂交均为阴性,特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对沙门氏菌的检测限为105 cfu/mL,而荧光定量PCR方法和细菌分离培养法对沙门氏菌的最低检测限分别为102 cfu/mL和105 cfu/mL,PNA-FISH方法的灵敏度与分离培养方法相近。人工污染沙门氏菌的生肉制品,增菌培养后经上述3种方法检测的最低检测限均可达到100 cfu/mL。对83份生鲜肉经增菌培养后,用上述3种方法检测。结果显示,该方法与细菌分离培养方法和荧光定量PCR方法的符合率均达到98.8%。表明,增菌培养是提高该PNA-FISH检测方法灵敏性的重要步骤。本研究建立的检测沙门氏菌的PNA-FISH方法快速、准确、灵敏,适合用于临床肉制品的检测。

摘要：目的 利用荧光原位杂交法快速检测尿液中的金黄色葡萄球菌,筛查金黄色葡萄球菌所致的尿路感染.方法 针对金黄色葡萄球菌16sRNA设计荧光标记的核苷酸探针,利用荧光原位杂交技术（FISH）对132例疑似尿路感染患者中段尿标本进行检测;同时进行中段尿培养.结果 荧光原位杂交法检测阳性的有9例,与中段尿培养比较,其敏感度为100.0%,特异度为99.2%,阳性预期值为90.0%,阴性预期值为100.0%.结论 荧光原位杂交能快速检测尿液中的金黄色葡萄球菌,对金黄色葡萄球菌所致的尿路感染进行快速诊断.

摘要：背景:染色体相互易位在人群中比较常见,下一代常常产生相同或不同的易位,易导致容易流产,而植入前诊断方法之一的CGH难以检测到相互易位,因此原位杂交(FISH)依然是解决诊断相互易位的有力手段。目的:通过设计个体化的FISH探针,制备探针,并在卵裂球单细胞水平进一步验证探针的准确性,为筛选正常核型的囊胚进行植入奠定技术基础,为个体化的FISH探针植入前诊断提供应用研究基础。方法:通过设计1q和6p平衡易位探针,进行探针标记,再采用患者和正常人核型验证探针质量,通过荧光原位杂交技术进一步检测正常人受精后的卵裂球中1q和6p平衡易位对易位染色体状态。结果:3个卵接球裂均呈现单个完整细胞核,荧光原位杂交中各细胞核均有清晰明亮的杂交信号。信号数分别为2。均为正常胚胎,可以考虑进一步对该易位患者进行卵裂球进行诊断,上述研究对个体化的易位探针的应用研究提供了研究基础。

摘要：目的建立荧光原位杂交技术诊断细菌性阴道病的方法,为细菌性阴道病的诊断和治疗提供准确的实验室依据。方法设计针对阴道加德纳菌、阴道阿托波菌、普雷沃菌、乳酸杆菌的荧光探针。对临床确诊的33例细菌性阴道病妇女,健康体检的28例健康妇女阴道分泌物涂片进行荧光原位杂交检测,建立积分标准。与Nugent评分标准进行比对评估。结果荧光原位杂交及积分评价标准对于细菌性阴道病的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和符合率分别为93.9%、96.4%、96.9%、93.1%和95.1%。结论荧光原位杂交方法较传统的实验室涂片染色方法更加客观反映阴道菌群的变化,是一种较Nugent评分更准确的细菌性阴道病实验室诊断方法。

摘要：Actinobacteria是形态上变化各异的 ,具有超过 5 0 % G+ C的 DNA碱基组成的 ,革兰氏染色呈阳性的微生物 ,放线菌是 Actinobacteria的一个组成部分 ,它们可产生丰富的次级代谢产物。目前 ,临床上使用的抗生素中有三分之二来自于放线菌。具有普通细菌形态的 Actinobacteria由于和放线菌具有相近的共同祖先 ,可能会具有一些其它的共性 ,是目前药物筛选中一个新的研究对象 ,但很难用形态观察的方法将之和其它细菌加以区分。本论文利用此类微生物 16 Sr RNA基因同源性 ,设计了两个探针 PA- 1、PA- 2并运用荧光原位杂交方法进行 Actinobacteria的鉴定 ,G+ C含量测定结果表明 ,这两个探针联合使用可直观、正确地鉴定 Acti-nobacteria。

摘要：目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术结合羊水细胞培养在检测胎儿染色体异常中的临床应用价值。方法用FISH技术检测322例孕17-28周孕妇的未培养羊水细胞,同时进行常规羊水细胞培养核型分析,将两者结果进行对照分析。结果 322例未培养羊水细胞FISH检测成功321例,其中检出正常303例,数目异常18例,与常规细胞培养核型分析结果一致,另外4例正常变异、1例嵌合体以及1例罗伯逊易位型21三体未被FISH技术检测出。结论 FISH技术检测未培养羊水细胞染色体数目异常具有快速、简便、所用样本量少的优势,可以作为羊水细胞染色体核型分析的补充,但对于检测同源罗伯逊易位型21三体有一定局限性。

摘要：目的　了解定位新基因 1A6在不同组织来源肿瘤中的状态。方法　用单色FISH法将载于质粒的 1A6基因小片段cDNA定位于C组某一染色体长臂 ,根据该基因测序结果设计 8对引物 ,通过PCR在PAC文库中筛选目的基因的基因组DNA。用切口翻译法分别用红绿荧光直接标记 12号α 卫星重复序列和 1A6基因组DNA ,采用双色荧光共杂交的方法定位 1A6基因 ,并对其及 12号染色体进行了数量分析。结果　 1A6基因定位于 12q2 3 .2 2 3.3。 1A6基因在乳腺癌、卵巢癌及胃癌细胞株中双色FISH的绿红信号比 (R值 )为 0 .96～ 1.0 1,在胃癌组织印片中R值为 0 .93～ 1.11。 12号染色体在乳腺癌细胞株BMI中的双体率 87.7% ,三体率 7.4% ;在卵巢癌细胞株SKOV3中的多体率 10 0 % ,其中五体率 6 7.6 % ;在胃癌细胞株BGC82 3中的多体率为 83.1% ,其中三体率为 71%。在实体瘤胃癌组织印片中 ,86 .4% (19/ 2 2 )的病例 12号染色体以双拷贝为主。结论　 1A6基因在实体瘤胃癌组织及肿瘤细胞株 (BGC82 3、SKOV3、BMI)中均无明显扩增和缺失 ,推测其在肿瘤中的作用方式不是扩增或缺失。 12号染色体数目在不同组织来源肿瘤细胞株中各异 ,意义有待探讨。

摘要：Objective. To evaluate and compare HER2/neu protein overexpression and gene amplification in uterine serous papillary endometrial cancer (USPC). Study design. Immunohistochemical (IHC) and fluorescent in situ hybridization (FISH) assays were used to analyze and compare HER2/neu protein expression and gene amplification, respectively, in paraffin blocks from 26 women harboring stage IA to IV USPC treated at the University of Arkansas for Medical Sciences from 1997 to 2004. Chromosome 17 polysomy status by FISH was also assessed in all specimens. Results. Moderate-to-strong expression of HER2/neu protein was noted in 16 (62% ) of 26 USPC samples evaluated, with 7 (27% ) samples showing moderate staining (2? ) and 9 (35% ) showing strong staining (3? ) for HER2/neu. Amplification of the ERBB2 gene by FISH was observed in 11 of the 26 (42% ) cases. Protein overexpression and gene amplification were found to correlate in 100% (9 of 9) of the 3? positive tumors and 2 out of 7 (29% ) of the 2? positive tumors. Heterogeneity was noted in 3 cases in the amplification of the HER2/neu gene within the same tumor samples with pockets of amplified tumor cells amidst nonamplified tumor cells. None of the 10 USPC cases scored by IHC as 0 or 1? was found positive for ERBB2 amplification by FISH. Conclusions. Amplification of the HER2/neu oncogene represents a common finding in USPC. FISH analysis should be used for confirmation of gene amplification in USPC showing 2? expression of HER2/neu. Prior screening and selection of appropriate immunohistochemistry-positive areas may be beneficial in the selection of some USPC patients undergoing FISH analysis.