摘要：[目的]比较不同聚合酶链式反应(PCR)技术在食品源性分析中的应用,分析引物、荧光染料和探针的特点及其发展前景。[方法]介绍PCR、荧光定量PCR技术,比较该技术及荧光标记基团的特性,及其在食品源性成分鉴定方面的实际应用。[结果]通过完善DNA提取方法、优化反应体系、设计特异性引物或探针均能有效提高PCR检测的灵敏度及准确性。[结论]采用PCR、荧光定量PCR技术能有效地实现食品中源性成分鉴定,且方法具有高灵敏度、高特异性、高效率等优势,能满足实验室对食品中源性成分的检测分析。

摘要：目的制备甲型H1N1流感病毒核酸检测标准阳性模板,将其应用于日常甲型流感病毒荧光定量PCR(RTPCR)检测中。方法根据甲型H1N1流感病毒基因序列设计出M、HA、NA片段的全基因扩增引物,采用RT-PCR方法扩增以上3个基因片段,将3个目标片段分别连接到PGM-T载体上构建重组质粒,筛选出分别含M、HA、NA基因阳性质粒,将以上阳性质粒两两连接,最后制备成含M、HA、NA基因的标准阳性模板。结果此模板在-20℃保存3个月对荧光定量PCR结果无显著影响,具有较好的稳定性,Ct值最大变异系数为1.30%。使用该模板建立的定量范围为1×1010copy/ml^1×1019copy/ml,标准曲线方程为:y=-2.7232x+40.99。检测方法表明该标准阳性模板具有良好的特异性。结论本次制备成的标准阳性模板适用于各甲型H1N1流感病毒检测实验室的质量控制,可用于临床诊断。

摘要：目的对淡色库蚊抗性种群和敏感品系中的铁蛋白基因表达量进行分析。方法设计引物,扩增目的基因全长、纯化测序、序列分析,荧光定量PCR检测铁蛋白基因的表达水平;采用假设检验中的t检验方法,对2种不同处理的淡色库蚊样本体内铁蛋白基因表达量进行统计分析。结果成功扩增淡色库蚊铁蛋白基因片段,经荧光定量PCR测定,淡色库蚊敏感品系铁蛋白荧光定量(F敏)和抗性种群铁蛋白荧光定量(F抗)平均值分别为11.41和15.73,内参基因荧光定量(β敏和β抗)平均值分别为10.03和18.27,铁蛋白基因在淡色库蚊抗性种群中的表达量是敏感品系的15.08倍,t检验结果显示,两样本体内铁蛋白基因表达差异有统计学意义(t=26.100,P<0.001)。结论淡色库蚊铁蛋白基因可作为蚊虫抗性检测及治理的靶标基因。

摘要：目的利用相对定量分析铁调节蛋白基因在淡色库蚊敏感和抗氯氰菊酯品系体内的表达量。方法设计引物、提取RNA、普通PCR、纯化测序、序列比对、荧光定量PCR,采用F检验和t检验对敏感和抗性品系淡色库蚊体内铁调节蛋白基因表达量进行统计学分析。结果将扩增的淡色库蚊铁调节蛋白基因片段进行序列比对,与致倦库蚊相似性较高。荧光定量PCR数据分析,淡色库蚊敏感品系(IRP敏)和抗性品系(IRP抗)铁调节蛋白Ct平均值分别为15.17和18.37,内参基因(β敏和β抗)Ct平均值分别为20.49和19.06,t检验显示两样本铁调节蛋白基因表达差异具有统计学意义(t=9.52,P<0.001),铁调节蛋白基因在淡色库蚊抗性品系中的表达量降低。结论淡色库蚊铁调节蛋白可能参与了抗性机制。