摘要：目的:基于分析方法质量源于设计(analytical quality by design, AQbD)理念进行实验设计(design of experiment, DOE),建立硫酸新霉素药物中外源DNA荧光染色检测方法。方法:利用MODDE?Pro11软件进行DOE开发,对关键影响因素和模型参数进行考察和优化,再采用基于荧光染色原理的Qubit?DNA检测试剂盒进行方法建立。结果:建立了硫酸新霉素中外源DNA的通用性检测方法。该方法的关键影响因素为溶剂种类、溶剂浓度和供试液浓度;溶剂种类选择氯化钠,最优分析条件为溶剂浓度1.4 mol·L^(-1)、供试液浓度1.8 mg·mL^(-1);该方法线性关系良好(r=0.995 7,n=2),加样回收率>81.0%,耐用性实验中加样回收率均在优化标准80%~120%范围内。结论:该方法准确度高、稳固性强、通用性好,为建立发酵来源化学药品中的外源DNA方法提供了参考。

摘要：动物源性生物材料的残留DNA定量检测是产品脱细胞处理过程是否彻底,以及免疫原性风险是否得到有效控制的重要产品技术指标之一。目前,国际上还没有针对这类材料的残留DNA检测方法。本研究设计了动物源性生物材料的残留DNA定量检测三步法,即固体生物材料的蛋白酶K消化,DNA纯化和荧光染色法DNA测定。在整个实验过程中增加了回收率实验,经过回收率曲线方程校正后得到最终检测结果。实验过程中的磁珠法DNA纯化步骤的优化设计保证了较好的回收率,同时满足了准确性和精密度。该实验方法经验证,其检测灵敏度达到6.25ng/每份样品,回收率样品DNA含量在3.125～100ng以及25～400ng范围内线性良好,其回收率曲线R2>0.99。此方法保证了生物材料中微量或痕量DNA检测的科学性和可信性。