摘要：药物靶点的研究一直是新药研发中最重要的内容之一,microRNA(miRNA)作为调节基因与蛋白之间相互关系的纽带无疑是药物靶点研究的重要对象,以它们作为靶点的药物设计和药物研发工作也在不断深入,并获得了一系列新发现.其中,对细胞内miRNA的表达或者功能具有调控活性的化学小分子的研究很值得关注.这些化学小分子不但可以用于研究细胞内miRNA的调控网络,而且基于其对重大疾病,如肿瘤、心脏疾病、神经性疾病等相关的miRNA的调控,可能在将来的疾病治疗方面有着潜在的重要作用.本文围绕miRNA化学小分子抑制剂及其筛选方法进行综述,通过总结归纳现有的研究进展,希望对今后的miRNA特异性小分子抑制剂的发现和研究提供借鉴.

摘要：目的:预测人肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因上的泛素化位点,并构建泛素化位点突变质粒,探讨突变质粒对人结直肠癌HCT116和SW480细胞中核因子κB(NF-κB)和激活蛋白1(AP-1)相对荧光素酶活性的影响。方法:采用UbPred、UbiSite和BDM-PUB软件预测TRAF6基因的泛素化位点,采用CE Design V1.04软件设计突变引物,采用突变试剂盒进行定点突变,采用PCR法扩增获得突变后的目的片段,扩增产物经Dpnl酶消化,去除甲基化模板质粒,消化产物在ExnaseⅡ催化作用下发生同源重组获得重组质粒;将重组质粒转化至DH5α大肠杆菌感受态细胞,对重组质粒进行DNA测序。采用双荧光素酶报告基因系统检测转染突变质粒后HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性。结果:经过DNA测序,泛素化突变位点已经成功突变,泛素化突变质粒构建成功。与TRAF6野生型基因比较,转染第124、319和331位突变质粒后,结直肠癌HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低(P<0.05或P<0.01),其中转染第124位突变质粒后,结直肠癌HCT116和SW480细胞中NF-κB和AP-1相对荧光素酶活性降低最明显(P<0.01)。结论:成功构建人TRAF6基因的泛素化突变质粒,TRAF6的第124位氨基酸是其最重要的泛素化位点,可能影响下游信号通路中NF-κB和AP-1的活性。