摘要：为建立一种快速检测赤狐皮毛的方法,试验根据赤狐皮毛线粒体COX3基因保守区设计了特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应条件建立了一种检测赤狐皮毛的Taq Man探针荧光pcr检测方法。结果表明,该方法对赤狐皮毛具有特异性,不与兔皮毛、山羊皮毛、绵羊皮毛、貂皮毛和貉子皮毛发生交叉反应。该方法对质粒标准对照(PUC-VV-)的最适线性检测范围为4.8×10^(1)~4.8×10^(8) copies/μL,标准曲线方程为Y=-3.4752X+40.118,相关系数(r^(2))为0.9897,检测下限为48 copies/μL。对3个不同浓度的pcr-GPTV-ITR进行组内试验和组间试验,每个浓度的重复试验Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。采用该方法检测2份赤狐皮毛为阳性,其他10份动物皮毛样品为阴性。本方法的建立为赤狐皮毛检测提供了一种快速准确的技术手段。

摘要：为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光pcr检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1 gB基因呈现特异性扩增,与禽传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病毒和牛传染性鼻气管炎病毒不发生交叉反应,对阳性标准质粒对照(pcr-MaHV-1-gB)的最低检测限为8个拷贝数/反应。该方法的组内和组间试验的Ct值变异系数介于0.17%～0.96%之间,具有良好的重现性。试验结果表明,本研究建立的实时荧光pcr方法可用于袋鼠MaHV-1的病原学检测。

摘要：[目的]发展一种快速、敏感、特异的荧光pcr方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌。[方法]针对单增李斯特氏菌溶血素基因(hlyA),设计特异的引物和TaqMan探针,优化体系,建立荧光pcr检测方法,对该方法的特异性和敏感性进行评价,并且在对188个进出口食品样本的检测中与传统方法进行对比。[结果]经对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株检测,结果显示该方法具有良好的特异性。灵敏度检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h。在实际样本的检测中,检测结果与传统方法结果一致。[结论]该方法能快速、简便和准确地检出单核细胞增生李斯氏菌,具有良好的应用前景。

摘要：为了建立山羊痘病毒(Goat pox virus,GTPV)和绵羊痘病毒(Sheep pox virus,SPPV)快速荧光pcr检测方法,本研究对2种病毒的保守基因P32基因在GeneBank上进行Blast比对,设计合成特异性荧光pcr引物和探针,构建了该病原特异性基因P32的重组质粒。建立了可以同时检测山羊痘病毒和绵羊痘病毒荧光pcr方法,对方法的特异性、敏感性和重复性进行研究,结果显示该方法具有高度的特异性,除了识别山羊痘病毒和绵羊痘病毒基因组外,对羊的基因组及山羊和绵羊常见病原的基因组均不发生交叉反应。在敏感性和重复性实验中,该方法对山羊痘病毒和绵羊痘病毒的检测限为1000Copies·mL-1,变异系数小于3%,因此具有优良的敏感性和稳定性。用该方法检测实验室模拟制备的样品,检测结果与预期相符合。

摘要：目的建立适用于肉类产品中单核增生李斯特氏菌的荧光pcr检测方法。方法根据单增李斯特氏菌溶血素基因hlyA,设计合成引物和荧光探针,结合免疫磁珠筛选,选择简便的DNA提取方法,建立适用于检测肉类制品中单增李斯特氏菌的荧光pcr方法。对该方法进行特异性、灵敏度及模拟样品检测效果的研究。结果对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株,及混合菌液的检测,结果显示该方法具有良好的特异性。对染菌模拟样本的检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h。结论免疫磁分离荧光pcr方法为快速、简便和准确检测肉类制品中单增李斯氏菌提供了一个新的途径。

摘要：非洲猪瘟缺乏安全有效的疫苗,其防控有赖于及时、准确的诊断和消毒灭源。本研究在对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)B646L基因序列进行分析的基础上设计引物、探针,建立了基于微芯片的ASFV免提取荧光pcr检测技术。特异性试验结果显示,微芯片pcr可用于我国不同地区ASFV毒株的通用检测,对其他主要猪源病毒均为阴性;敏感性试验结果显示其检测下限为10拷贝/μL;对117份临床样品的检测结果显示,该方法可用于猪全血、淋巴结、脾脏、肌肉样本中ASFV核酸的检测,与世界动物卫生组织推荐的荧光pcr检测方法相符率达100%,且显著简化了检测操作步骤,检测用时缩短在30 min之内,获得农业农村部第一批非洲猪瘟现场快速检测试剂的推荐,应用于养殖场、屠宰场和流通环节中ASFV核酸的检测。