摘要：目的:对2017年贵阳市在售的进口三文鱼进行抽样检测,在省内首先实践相关检测技术,为市场监督和管理部门提供参考。方法:由贵州省产品质量监督检验院专业抽样人员进行随机抽样,餐饮、散装、包装各10批次,通过荧光pcr法进行检测,所用引物和探针根据转基因三文鱼AquAdvantage公开序列进行设计。结果:未检出含有转基因成分的样品批次。结论:目前转基因三文鱼尚未大规模进入当地市场。

摘要：目的建立生鲜肉中牛源性和羊源性成分荧光pcr定量检测方法。方法以线粒体细胞色素b（Cytb）基因核苷酸序列为检测靶点,设计并优化引物,建立基于SYBR染料的荧光pcr定量检测方法,并对该方法进行特异性和灵敏度验证。结果在退火温度60℃的条件下,荧光pcr检测体系中各条引物特异性良好,目标成分检测信号Ct值均小于20,非特异性检测信号Ct值均大于35,该方法在模板浓度为0.016~10 ng/μL时线性关系良好;以Ct30作为阳性或阴性结果的判定限,目标源性成分荧光pcr定量检测的灵敏度可达1%。结论本方法可为生鲜肉制品种源鉴定和掺假检测提供理论依据。

摘要：为建立非洲猪瘟病毒微滴式数字pcr方法,以非洲猪瘟病毒P72蛋白编码基因为靶基因设计引物和探针,利用正交试验方法优化反应体系及扩增程序,建立了非洲猪瘟病毒微滴式数字pcr方法,并对其敏感性、特异性及稳定性进行评估。结果显示:建立的方法最低检出限为0.58 copies/μL,与荧光pcr方法相比更敏感;本方法与布鲁氏菌、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒无交叉反应;对10倍稀释的标准物质检测10次,变异系数为8.44%,重复性好。利用建立的方法对100份临床样品进行检测,结果均为阴性,与荧光pcr检测结果一致;对5份实验室间比对样品进行检测,检测出阳性样品4份,阴性样品1份,与实验室间比对给定的样品盘结果一致。结果表明,本研究建立的微滴式数字pcr方法的敏感性、特异性和稳定性符合要求,适于非洲猪瘟病毒临床检测。

摘要：目的建立快速检测隐孢子虫卵囊的pcr检测体系,以期在人群和食品及其饮用水腹泻原虫监测中推广应用。方法以隐孢子虫小亚基SSU r RNA和卵囊壁蛋白(COWP)为靶基因,设计巢式pcr和荧光pcr的引物和探针;以分离纯化后的微小隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行扩增,分别进行两种检测方法的敏感性和特异性试验;再用某水牛养殖场采集的58份牛粪样考核检测体系的应用价值。结果设计的巢式pcr引物和荧光pcr引物探针特异性都很高,巢式pcr对隐孢子虫DNA的检测最低OD阈值为2 pg隐孢子虫DNA;实时荧光pcr显示最低检测阈值为200 fg隐孢子虫DNA,灵敏性都比较高,实时荧光pcr的灵敏性比巢式pcr高1个数量级(10倍);58份检测样本中,有一份为阳性样本,pcr产物经序列分析显示为微小隐孢子虫。结论巢式pcr和实时荧光pcr检测隐孢子虫的特异性和灵敏性均高,操作简便,能为隐孢子虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段和方法依据。奶牛感染人兽共患微小隐孢子虫基因亚型,具有人兽共患传播的可能性。

摘要：目的:建立18种中高危型人乳头状瘤病毒的高效分型方法。方法:根据NCBI序列设计人乳头状瘤病毒18种中高危基因型(16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)特异性引物探针并用国家参考品和临床样本进行验证。结果:中高危型人乳头状瘤病毒的高效分型方法可以在短时间内准确高效地对国家参考品和临床样本进行型别甄别,重复性变异系数(CV)小于5%,检测限均不高于100 copies/m L,与金标准测序对应良好。结论:中高危型人乳头状瘤病毒的高效分型方法可以准确高效地进行18种中高危型人乳头状瘤病毒基因型的分型检测,可应用于宫颈病变的早期诊断。

摘要：目的建立食品中致癌真菌污染的培养分离结合实时荧光pcr检测技术,对厦门地区一些可能污染真菌的食品进行监测。方法按照国家标准方法GB/T4789.15-2003进行食品检样的真菌分离培养,并采用涂片染色及镜检方法初步分析真菌种类。在分析比较真菌产毒素相关基因的基础上,依据黄曲霉和寄生曲霉产毒素相关基因的保守区序列设计了两组特异性引物及荧光标记探针,采用液氮研磨结合CTAB法提取真菌DNA,应用实时荧光pcr技术对分离的曲霉菌进行了基因检测。结果从11种食品检样中共分离到35株曲霉菌、2株镰刀菌和6株青霉菌而从糯米鸡、咖喱角和春卷等三种食品中分离的13株曲霉菌含有产毒素相关基因(即为可能的致癌菌株),占全部35株曲霉菌的37.14%。结论提示厦门市食品中致癌真菌污染的比例较高(27.27%),应引起重视。

摘要：目的分析GJB2基因热点突变在耳聋及耳聋高危人群中的突变谱和突变频率。方法收集2014年11月~2017年3月江苏地区耳聋患者59例及耳聋高危人群49例,应用荧光pcr法对其进行GJB2基因的4个热点突变位点筛查,分析突变数据,通过直接测序法验证其全部检测结果。结果 108例研究对象中,检测出GJB2基因突变共84例,检出率为77.78%。其中c.235del C、c.299-300del AT、c.176del16bp和c.512ins AACG检出率分别为62.96%(68/108)、17.59%(19/108)、13.89%(15/108)和0.93%(1/108)。耳聋患者中GJB2 c.235del C纯合突变和GJB2双等位基因突变发生率分别为30.51%(18/59)和28.81%(17/59),耳聋高危人群中未发现纯合突变和双等位基因突变。进一步采用直接测序法验证全部检测结果,其结果与荧光pcr法一致。结论在本研究中c.235del C是最常见的热点突变,GJB2 c.235del C纯合突变是最为常见的分子致病因素,其次是GJB2双等位基因突变。

摘要：目前，由天津检验检疫局动物检疫实验室申报的《非洲猪瘟CP530R基因的荧光pcr检测试剂及其制备方法与用途》正式获得发明专利授权证书。据介绍，该发明公开了一种非洲猪瘟病毒CP530R基因的荧光pcr检测试剂及其制备方法与用途，设计合成了一套特异性的引物及Taqman探针和阳性对照，并利用该引物及探针建立了一种快速简便、特异性强、灵敏度高的荧光pcr检测体系.