摘要：针对现有表面等离子激元折射率传感器纵向探测深度小、探测范围无法覆盖整个细胞厚度的问题,提出一种大探测深度、高灵敏度的活细胞折射率实时测量方法,并利用该方法开展了药物敏感性的实验研究。基于偏振选择吸收效应,设计并搭建了全内反射条件下的石墨烯折射率传感系统,进行了不同质量分数氯化钠溶液折射率的测量,结果表明系统具有9.5×10~6 mV/RIU的灵敏度和5.5×10^(-7) RIU的分辨率;利用该系统开展了活细胞药物敏感性的实验研究,分别研究了顺铂和紫杉醇作用于Ramos细胞和Jeko-1细胞时生物演化过程中细胞折射率的实时变化规律,验证了折射率变化与其药性机理作用的一致性。

摘要：目的:探讨稳定下调K562细胞株FMI表达对其甲磺酸伊马替尼药物敏感性的影响及其可能的作用机制。方法:应用Western-blot方法分别检测K562细胞、慢性髓系白血病(CML)病人、慢性髓系急变病人及健康志愿者外周血单个核细胞FMI蛋白表达;设计靶向人FMI的特异性干扰序列,连接入慢病毒载体LV3;用三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染K562细胞,筛选稳定下调FMI的K562细胞;应用CCK8法鉴定K562细胞对伊马替尼药物敏感性的变化,AnnexinⅤ/7-AAD双标记的流式细胞术检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测白血病细胞FMI、Fz8的转录水平,Western-Blot方法检测白血病细胞FMI、Fz8、NFAT1、BCR-ABL、β-catenin的表达水平。结果:在CML急变病人外周血单个核细胞与K562细胞可检测到FMI蛋白表达,在CML缓解期病人及健康志愿者外周血单个核细胞未检测到FMI表达。成功构建重组慢病毒载体LV3/FMI,并包装慢病毒,筛选出稳定下调FMI蛋白的K562细胞株;稳定下调K562细胞FMI表达后,在相同药物浓度作用下白血病细胞增殖率降低、凋亡率升高,Fz8基因转录水平降低,Fz8蛋白表达水平下降,NFAT1总蛋白水平增高,核转位增加,BCR-ABL融合蛋白表达水平无明显变化,总β-catenin蛋白表达水平下降。结论:稳定下调FMI表达后,K562细胞对伊马替尼药物敏感性增高,凋亡增加,此作用可能是通过抑制FMI-Fz8信号通路而激活Ca2+-NFAT与Wnt/β-catenin信号通路实现的。

摘要：目的探讨利用分子生物学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段），运用聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）银染色法，检测４５株结核分支杆菌临床分离株，对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析；运用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患者痰标本进行直接快速检测，并与药敏试验结果做对照分析。结果４５株临床分离株中１６株ＲＦＰ敏感结核分支杆菌ＳＳＣＰ带谱与结核分支杆菌标准株（Ｈ３７Ｒｖ）相同，２９株ＲＦＰ耐药株中有２６株检测到突变图谱，阳性率为９０％。从具有ＳＳＣＰ特征性带谱的菌株中筛选８株临床分离株进行ｒｐｏＢ基因序列分析显示：１株ＲＦＰ敏感株无ｒｐｏＢ基因突变，７株耐药株均发生碱基突变（符合率１００％）。碱基以单点突变为主，以５３１位碱基突变最为多见［４株５３１位ＴＣＧ→ＴＴＧ，Ｓｅｒ→Ｌｅｕ（５７％）；１株５３１位ＴＣＧ→ＣＡＧ，Ｓｅｒ→Ｇｌｎ（１４％）；２株５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ，Ｈｉｓ→Ｔｙｒ（２９％）］。与ＢＡＣＴＥＣ对照临床痰标本直接快速检测阳性率为６４％。结论结核分支杆菌耐ＲＦＰ?

摘要：目的评价我国近40年细菌性角膜炎患者病原菌分布及药物敏感性变化规律。方法采用Meta分析方法,检索PubMed、ScienceDirect、Embase、中国知网和万方数据知识服务平台5个数据库。研究现场限定为以医院为基础,人群不限,文献发表时间为1980—2020年,文献研究设计类型为横断面研究,文献中英文不限。2名研究人员遵循纳入标准和排除标准完成文献检索、数据提取及参考针对“率”的方法学评分系统对文献进行质量评估。采用Q检验和I 2检验评估纳入文献的异质性,并依据异质性决定采用固定效应模型或随机效应模型计算合并后的率指标完成Meta分析。结果最终纳入27篇原始研究文献,共计50046例细菌性角膜炎患者入组。随机效应模型Meta分析结果显示,细菌性角膜炎细菌培养阳性率为28%(95%CI:0.24~0.32)。培养阳性细菌中革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌占比分别为57%(95%CI:0.52~0.62)和32%(95%CI:0.28~0.37),革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌占比分别为8%(95%CI:0.06~0.10)和1%(95%CI:0.01~0.02)。近40年间,我国细菌性角膜炎中分离的革兰阳性球菌比例呈上升趋势,革兰阴性杆菌比例逐渐下降。其中,凝固酶阴性葡萄球菌比例最高,占23%(95%CI:0.17~0.30),其次为铜绿假单胞菌占18%(95%CI:0.14~0.23)、肺炎链球菌占8%(95%CI:0.06~0.12)、金黄色葡萄球菌占6%(95%CI:0.04~0.08)、棒状杆菌占4%(95%CI:0.03~0.07)以及大肠杆菌占4%(95%CI:0.02~0.06)。药物敏感性试验结果显示,革兰阳性球菌对万古霉素、莫西沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星高度敏感;铜绿假单胞菌对妥布霉素最敏感,大肠杆菌对氧氟沙星最敏感。结论近40年间我国细菌性角膜炎中分离的革兰阳性球菌比例呈上升趋势,革兰阴性杆菌比例逐渐下降。目前凝固酶阴性葡萄球菌和铜绿假单胞菌为我国细菌性角膜炎感染常见的致病菌,各种菌属对常用抗生素的敏感性均有下降趋势,应根据药物敏感性结果正确选择敏感抗菌药物治疗。

摘要：目的:观察不同中医辨证分型肝癌患者肝癌细胞体外化疗药物敏感性。方法:选取60例肝癌切除标本,利用 MTT 法测定不同证型肝癌患者对6种常用化疗药物的体外敏感性。结果:脾气虚组、肝气郁结组、瘀血阻络组之间各药敏感性有逐步下降趋势,但无统计学意义;各药在肝瘀脾虚阻络组敏感性明显下降。结论:不同中医辨证分型肝癌患者对化疗药物的敏感性存在一定差异,中西医结合个体化治疗肝癌,就是要根据具体患者药敏实验结果结合辨证论治设计治疗方案。

摘要：目的:研究SOX2表达对人喉癌上皮细胞Hep-2化疗敏感性的影响。方法:设计合成RNAi-SOX2序列,瞬时转染Hep-2细胞,Western blot法筛选沉默效率最好的RNAi-SOX2构建pGCsi-H1-SOX2质粒,并构建其对照质粒pGCsi-H1-NC,分别转染Hep-2细胞建立稳定沉默SOX2表达细胞株psiSOX2-Hep-2及其对照细胞株psiNC-Hep-2。CCK-8法检测SOX2表达沉默对Hep-2细胞对化疗药物敏感性的影响;Hoechst染色法检测SOX2表达沉默对化疗药物诱导Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot法检测SOX2表达沉默对凋亡相关基因Survivin、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表达的影响。结果:成功获取SOX2表达沉默细胞株psiSOX2-Hep-2及其对照psiNC-Hep-2细胞株,与psiNC-Hep-2细胞相比,psiSOX2-Hep-2中SOX2表达下降78%。SOX2表达沉默后,psiSOX2-Hep-2细胞对5-FU和紫杉醇的敏感性均增强,psiSOX2-Hep-2细胞48h的IC50值分别下降到8.12μg/ml和5.16μg/ml;同时,psiSOX2-Hep-2细胞凋亡数增多;抗凋亡基因Survivin、Bcl-2表达下降明显,凋亡基因Bax、cleaved caspase-3表达显著上升。结论:RNAi沉默SOX2表达将显著增强人喉癌上皮细胞Hep-2对5-FU和紫杉醇的敏感性。

摘要：采集江苏省不同地区15个鸡场的疑似大肠杆菌感染病例的病料,通过细菌学分离鉴定,共获得45株大肠杆菌,并确定了O78(53.33%)和O109(28.89%)为优势O抗原型。根据Pap菌毛基因设计1对引物,根据文献报道合成2对引物,分别用于Pap菌毛、F1菌毛以及毒力岛HPI的基因检测;通过对45株大肠杆菌分离株的PCR扩增,确定了7株(15.56%)为F1+大肠杆菌,1株(2.22%)为F1+Pap+大肠杆菌,22株(48.89%)为F1+HPI+大肠杆菌,4株(8.89%)为F1+Pap+HPI+大肠杆菌,5株(11.11%)为HPI+大肠杆菌,未发现Pap+菌株。选用7种临床常用的抗菌药对全部菌株进行药敏试验,结果表明:绝大多菌株对呋喃妥因、头孢唑林、多黏菌素B敏感,对环丙沙星和庆大霉素因菌株差异而异,林可霉素、四环素多不敏感。

摘要：为了解副猪嗜血杆菌江西株的药物敏感性及其耐药基因,本实验采用K-B法测定分离株对57种药物的敏感性,结果显示20株副猪嗜血杆菌均对阿洛西林和万古霉素敏感,80%及以上的分离株对氨苄西林\舒巴坦、阿莫西林\棒酸等高度敏感。但分离株对恩诺沙星、氨曲南、四环素等的耐受性较强,某些菌株对多种药物具有抗性,其中6株菌能够耐受5种药物,5株菌能够耐受12种药物,3株菌能够耐受13种药物,甚至有2株菌能够耐受多达22种药物。将江西分离株的药物敏感性结果与其它国家或地区以及不同时间分离菌株的结果相比较表明,不同地区及不同时间段分离的菌株药物敏感性存在较大差异。为探索副猪嗜血杆菌耐药的分子机制,本研究设计引物并建立了检测四环素耐药基因tet(B)的PCR方法。运用所建立的方法检测江西株tet(B)基因,在15株四环素耐药菌株中检测出其中9株菌存在该基因,推测tet(B)可能是介导该菌对四环素耐药的主要分子机制之一。

摘要：目的研究特异性siRNA抑制结肠癌细胞HCT-116真核翻译延长因子1A1(e EF1A1)基因及其对结肠癌细胞HCT-116凋亡和药物敏感性的影响。方法设计针对人源结肠癌细胞HCT-116 e EF1A1基因的siRNA,转染至对数生长期的结肠癌细胞HCT-116,分别用反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法鉴定e EF1A1基因沉默的效果,用流式细胞仪检测e EF1A1基因表达抑制对结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响,用噻唑蓝法(MTT)检测e EF1A1基因表达抑制后结肠癌细胞HCT-116药物敏感性的变化。结果 e EF1A1靶向siRNA能显著降低结肠癌细胞HCT-116中e EF1A1的表达,e EF1A1表达抑制后结肠癌细胞HCT-116的增值能力显著低于对照组(P<0.05),5-氟尿嘧啶和顺铂对e EF1A1表达抑制的结肠癌细胞HCT-116的半抑制浓度显著低于对照组(P<0.05)。结论 e EF1A1靶向siRNA能有效抑制e EF1A1基因表达,并能协同增强5-氟尿嘧啶和顺铂对结肠癌细胞HCT-116的杀伤作用和诱导凋亡作用。

摘要：目的:筛选出PDCD4 siRNA的有效序列,并研究其对白血病K562细胞药物敏感性的影响。方法:利用生物信息学的方法设计并合成3条PDCD4 siRNA候选序列,将PDCD4 siRNA候选序列分别转染K562细胞,用实时定量RT-PCR的方法(Real-time RT-PCR)筛选出能有效沉默PDCD4基因mRNA表达的序列,并用蛋白印迹法(Western blotting)检测该有效序列对细胞内PDCD4蛋白表达水平的影响。将有效序列转染k562细胞6 h后,分别与常用的抗白血病药物三氧化二砷(As2O3)、阿糖胞苷(Ara-c)、小檗碱(BB)联合作用72 h,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测PDCD4 siRNA对细胞药物敏感性的影响。结果:用实时定量PCR成功筛选出一条有效干扰PDCD4mRNA表达的序列,用Western blotting法检测该序列可显著降低PDCD4蛋白的表达水平(P<0.05);与ATO,Ara-c,BB联合作用72 h后,PDCD4表达的下调降低了细胞的药物敏感性(P<0.05)。结论:沉默PDCD4能够显著降低白血病细胞的药物敏感性,PDCD4 siRNA能够显著挽救药物作用后的细胞活性。