摘要：目的分析铜绿假单胞菌性角膜炎的细菌基因分型及其体外药物敏感性的特点。设计实验性研究。研究对象分离自铜绿假单胞菌性角膜炎患者的23株铜绿假单胞菌。方法提取DNA进行PCR扩增,扩增产物分离纯化,测序,结果提交MLST(Mult Locus sequences Typing)网站进行基因分型。应用试剂盒进行体外药物敏感性试验。主要指标细菌基因分型及药物敏感性。结果MLST可将23株细菌分为20个基因型,聚类后分为2个类群。细菌对氨基甙类的药物敏感性整体高于氟喹诺酮类。结论分离自铜绿假单胞菌性角膜炎的细菌之间有种株同源性,未发现基因型与药物敏感性之间明显相关关系。

摘要：目的探讨高压氧(HBO)增强食管癌ECA109细胞对紫杉醇(Pac)的药物敏感性及其作用机制。方法体外培养食管癌ECA109细胞完成后,按照实验设计将细胞分为4组:对照组、Pac组、HBO组和HBO+Pac组。对照组加入DMSO;Pac组加入5 mg/L的Pac(参照IC50值);HBO组在高压氧舱单独暴露90 min;HBO+Pac组首先将细胞在高压氧舱暴露90 min,随后采用5 mg/L Pac处理。利用CCK-8法检测ECA109细胞的增殖能力,流式细胞术检测ECA109细胞的凋亡情况,Western blotting实验检测ECA109细胞内凋亡蛋白、耐药相关蛋白及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果与对照组和HBO组比较,Pac组ECA109细胞的存活率明显降低,凋亡率明显升高(P0.05)。结论HBO联合Pac处理能够增强Pac对ECA109细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过调节ECA109细胞中的MAPK信号通路实现的。

摘要：目的使用临床样本成功构建卵巢癌类器官模型,选用卵巢癌临床常用一线化疗药物卡铂,探究不同处理因素对卵巢癌类器官药物敏感性测试结果的影响,为肿瘤患者个体化用药和精准治疗方案的选择提供依据。方法采用不同细胞密度、不同药物剂量、不同药物作用时间对2例卵巢癌类器官OC-1、OC-2进行处理,设置对照组和处理组,比较分析2例卵巢癌类器官对卡铂的敏感性。药物剂量上设计6组不同浓度(100、50、10、1、0.1、0.01μmol/L)卡铂作用于2例卵巢癌类器官。药物作用时间上,以相同剂量100μmol/L卡铂分别作用于2例卵巢癌类器官3~9 d。细胞药物敏感性测试上通过CCK-8法检测细胞增殖活力,根据肿瘤细胞相对抑制率(T/C)比较分析不同处理因素对卵巢癌类器官药物敏感性测试结果的影响。结果(1)在细胞密度的选择上,每孔接种8000个和4000个细胞时,50~100μmol/L卡铂均对卵巢癌类器官OC-1、OC-2的生长抑制作用显著(P0.05)。(2)在不同药物剂量的选择上,50~100μmol/L卡铂均对卵巢癌类器官OC-1、OC-2体外有效(T/C≤50%),而其余4个剂量组体外无效。(3)在药物作用时间的选择上,100μmol/L的卡铂对类器官OC-1、OC-2在3~9 d观测期中,与对照组相比,随时间延长具有更显著的生长抑制作用(P<0.01或P<0.001)。结论通过卵巢癌类器官模拟体内真实的肿瘤环境下,化疗药物卡铂在不同剂量、不同作用时间下均影响卵巢癌药物敏感性检测结果。利用卵巢癌类器官为卵巢癌患者设计个体化用药方案具有十分积极的意义。

摘要：为了解近期鸭疫里默氏菌的血清流行病学,明确鸭疫里默氏菌的敏感药物,本研究根据鸭疫里默氏菌的gyrB基因序列设计检测引物,建立PCR检测方法,并对收集的2006~2012年间福建省及邻近省份的疑似鸭疫里默氏菌病死亡鸭、鹅,进行细菌分离,PCR鉴定,凝集试验确定血清型,纸片法分析药物敏感性。该PCR法具有较好的特异性,检测敏感性可达102~103CFU/mL。分离鉴定鸭疫里默氏菌423株,分属于1、2、3、6、10、11、13、14、17型和未知型,2型、11型、1型和17型合计占所有菌株数量的86.4%。50%以上分离菌株敏感的药物有氟苯尼考、头孢拉定、头孢氨苄、阿莫西林、头孢唑啉和壮观霉素。

摘要：目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin基因表达对增强人喉癌HEP-2细胞化疗药物敏感性。方法:针对Survivin mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Survivin重组表达载体,转染人喉癌HEP-2细胞;通过RT-PCR和Western blot分析其对HEP-2细胞内源性Survivin表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HEP-2细胞对化疗药物5-FU和优福定敏感性的改变。结果:成功构建pRNAT-Survivin重组质粒,并成功转染HEP-2细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Survivin基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在5-FU和优福定联合作用下,pRNAT-Survivin组HEP-2细胞的生长抑制率明显增高(P<0.01)。结论:pRNAT-Survivin可抑制Survivin在人喉癌HEP-2细胞中的表达,并增强HEP-2细胞对化疗药物敏感性。

摘要：目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性作用。方法:设计、合成bFGF寡核苷酸,用聚乙烯亚胺(polyemyleneimine,PEI)介导bFGF反义硫代寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞,MTT法检测bFGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖率;半定量RT-PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;流式细胞仪分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导的细胞凋亡。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸对B16细胞增殖的抑制率为64.8%,且呈剂量依赖效应。B16细胞中bFGF mRNA被bFGF反义硫代寡核苷酸显著降低,为对照细胞的57.9%,且bFGF反义硫代寡核苷酸诱导B16细胞凋亡,凋亡率为41.8%。bFGF反义硫代寡核苷酸转染能显著增强B16细胞对阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂的敏感性,非特异性硫代寡核苷酸不影响阿霉素、5-氟脲嘧啶及顺铂抑制B16细胞增殖。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸显著增强B16细胞的化疗敏感性,表明其可协同化疗药物用于治疗肿瘤。

摘要：目的探讨RNA干扰技术抑制Cyr61基因表达增强人脑胶质瘤U251细胞对化疗药物敏感性及凋亡能力的研究。方法针对Cyr61mRNA序列设计合成小干扰RNA（siRNA）的DNA模板，构建pRNAT-Cyr61重组表达载体，转染人脑胶质瘤U251细胞；通过RT-PCR和Westernblot分析其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响；用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察U251细胞对化疗药物顺铂和替莫唑胺敏感性的改变；用流式细胞仪检测U251细胞体外凋亡的变化。结果成功构建pRNAT-Cyail重组质粒，并成功转染U251细胞：RT-PCR和Westemblot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyr61基因表达（P〈0．01）；MTT及流式细胞仪结果证明在和顺铂或替莫唑胺联合作用下．pRNAT-Cyr61组U251细胞的生长抑制率和凋亡率都明显增高（P〈0．01）。结论pRNAT-Cyr61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达，并增强U251细胞对化疗药物敏感性及其体外凋亡率。

摘要：目的阿霉素是一种临床上广泛使用的抗肿瘤药物,但其治疗作用的发挥受到耐药性的限制。目前研究显示阿霉素主要通过诱导活性氧自由基的产生而杀死肿瘤细胞。人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)是一种DNA氧化损伤的修复酶,可特异性的切除由活性氧产生的8-羟基鸟嘌呤。针对这一机制,设计并合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因,构建其真核表达载体并初步探讨在该基因作用下,人肺腺癌A549细胞株对阿霉素的药物敏感性的影响。方法人工设计并合成核酶基因(RZ),将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,阳性重组子由BamH和EcoR酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE6的介导下引入A549细胞株,RT-PCR(逆转录多聚酶链反应)法鉴定转染,并半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。MTT法检测细胞转染前后对阿霉素敏感性的变化;彗星试验检测细胞转染前后DNA氧化损伤修复能力的改变。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列成功克隆入pcDNA3.1(+)中,命名为pcDNA3.1(+)-RZ。经RT-PCR法鉴定质粒成功导入靶细胞中,并检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降36%,与空白细胞组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测显示转染细胞组对阿霉素的药物敏感性增加,与未转染细胞组之间差异具有统计学意义(P<0.05);彗星试验表明在1.0μg/mL阿霉素作用下,转染细胞组较未转染细胞组DNA损伤程度增加(P<0.05),但无时效关系。结论成功构建HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体。核酶在A549细胞内有效抑制靶基因HOGG1的表达,增加了该细胞对抗肿瘤药物阿霉素的敏感性。为进一步研究HOGG1基因的功能奠定了基础。

摘要：目的　探讨和监测我国不同地区病房医院获得感染 (HAI)与社区获得感染 (CAI)患者中分离的革兰阴性杆菌耐药状况。方法　按原设计方案对 13家医院从 2 0 0 0年 7月 1日至 2 0 0 1年 6月 30日年度内分离的 2 4 0 1株致病菌中的 15 96株革兰阴性杆菌 ,采用国际标准琼脂二倍稀释法进行体外敏感试验 ,按 2 0 0 1年美国临床实验标准委员会 (NCCLS)指导原则的标准 ,测得最低抑菌浓度(MIC) ,以MIC50 、MIC90 表示抗菌药物的抗菌活性 ,并计算出所测细菌对抗菌药物的耐药率R %、中介率I%和敏感率S %。结果　分离到 15种阴性杆菌 ,大多数菌种均能从CAI与HAI患者中分离到。但引起HAI的细菌耐药率 ,特别是阴沟肠杆菌、沙雷菌属和不动杆菌属高于CAI细菌耐药率。对所测各类抗菌药物对 15种革兰阴性杆菌的抗菌作用。碳青霉烯类抗生素是所测定抗菌药物中对肠道阴性杆菌作用最强的一类抗生素。多数革兰阴性杆菌对头孢哌酮 /舒巴坦和头孢吡肟均显示了很高的敏感率。对第三代头孢菌素中的头孢他啶 ,多数革兰阴性菌仍有较高的敏感率 (70 %～ 10 0 % )。氟喹诺酮类抗菌药物显示了强大广谱抗革兰阴性菌作用 ,但大肠埃希菌对氟喹诺酮的耐药率仍高达 5 0 %以上 ,铜绿假单胞菌和流感嗜血杆菌的敏感性均有所下降。结论　 (1)本次监?

摘要：目的　研究阻断自分泌通路对膀胱癌细胞的影响。方法　设计针对胰岛素样生长因子1受体 (insulin likegrowthfactor 1receptor,IGF1R )基因的反义脱氧寡核苷酸 (oligodexynucleotide ,ODN) ,采用RT PCR、MTT试验、3H掺入试验、流式细胞仪分析、透射电子显微镜 ,对经反义ODN作用后的T2 4膀胱癌细胞进行动态分析研究。结果　经反义ODN处理 48h后 ,T2 4细胞mRNA表达水平下降72 .9% ,癌细胞生长明显受抑 (P <0 .0 5 ) ,对膀胱灌注药物丝裂霉素 (MMC)的敏感性明显增强 (P <0 .0 5 )。结论　反义ODN可有效降低T2 4细胞IGF1R基因表达及生长增殖 ,增强膀胱癌细胞对MMC的敏感性及凋亡易感性。