摘要：为探究菊粉酶降低红肉风险物质N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)含量的效果和分子机制,本研究首先采用菊粉酶处理Neu5Gc标准品并对其进行液相质谱检测,其次选择外切型菊粉酶(蛋白数据序列号:1Y9G)和内切型菊粉酶(蛋白数据序列号:3SC7)与Neu5Gc进行分子对接和分子动力学模拟,并以氨基酸虚拟突变验证菊粉酶结合Neu5Gc的关键残基。最后利用密度泛函理论(DFT)和独立密度梯度模型(IGM)分析动力学平衡后Neu5Gc和菊粉酶活性残基复合物的分子间弱相互作用强度与分布。结果表明,外切和内切型菊粉酶对Neu5Gc标准品含量的平均降低率分别为55.33%和43.81%;理论计算表明,Neu5Gc主要以羟基氧、酰胺氮原子与菊粉酶活性位点残基发生弱相互作用而稳定结合到活性口袋中,水环境下对外切和内切菊粉酶的结合能分别为-22.71和-8.46 kJ·mol^-1。本研究结果为菊粉酶的理性设计和在红肉安全性控制中的应用提供了一定的参考。

摘要：在单因素试验基础上,为进一步提高马克斯克鲁维酵母固态发酵产生的菊粉酶的活力,采用全因子试验设计和中心组合设计对影响的因素进行优化,运用响应面分析模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,优化的培养条件为:菊芋粉3.62%,玉米浆干粉2.40%,培养温度28.13℃。模型预测的最大响应值为314.71U/g ds,在优化条件下酶活为316.35U/g ds,二者基本一致。

摘要：以保藏的黑曲霉菌种作为菌源,利用黑曲霉细胞深层发酵法生产内切型菊粉酶。以牛蒡为唯一碳源,获得产菊粉酶菌株;通过测定发酵液酶活,从20株黑曲霉菌株筛选得到产菊粉酶活力最高的编号为08013的一株黑曲霉菌株,酶活力为3.27U/mL。通过单因素试验对最佳发酵时间和不同的营养条件对黑曲霉产菊粉酶的影响进行研究。结果表明:最佳发酵时间为108h,最佳金属离子为Na+,质量浓度为0.5g/100mL;最佳碳源为牛蒡汁,体积分数为10%;最佳有机氮源为酵母膏,质量浓度为2g/100mL;最佳无机氮源为(NH4)2HPO4,质量浓度为2g/100mL。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken响应面试验设计对内切型菊粉酶生产菌株发酵培养基配方中的牛蒡汁体积分数、酵母膏和(NH4)2HPO4的质量浓度进行定量研究,建立并分析各因素与酶活关系的数学模型。得到培养基最优配方为牛蒡汁9.98%、酵母膏1.74g/100mL、(NH4)2HPO41.82g/100mL时,此时菊粉酶酶活力最高,为7.23U/mL。经验证,在此条件下进行实验,测得菊粉酶酶活力为7.26U/mL,与理论计算值7.23U/mL基本一致。说明回归模型能较好地预测菊粉酶酶活。通过对发酵培养基的优化,使最终酶活比初始酶活力(3.27U/mL)提高了122%。

摘要：为了实现内生真菌Shiraia *** 14菊粉酶基因在大肠杆菌中的高效表达,建立有效的包涵体复性技术,获得有活性的重组菊粉酶,本研究通过提取Shiraia *** 14的总RNA,反转录合成cDNA,设计PCR引物扩增出菊粉酶基因,将其克隆至pET-22b（＋）载体后转入*** BL21（DE3）,利用SDS-PAGE法检测IPTG诱导表达后重组蛋白的表达情况,并进一步检测了包涵体复性及重组酶酶活情况,最终成功获得了相对分子量为62.07 kD的重组蛋白,成功复性包涵体,复性率为25.23%,重组菊粉酶活力为6.84 U/m L。本研究为活性重组菊粉酶的获得及包涵体复性提供了新的方法和依据。

摘要：以黑曲霉菌种作为菌源,利用深层发酵法生产内切型菊粉酶。通过测定发酵液酶活力,从20株黑曲霉菌株筛选得到产菊粉酶活力最高的1株黑曲霉菌株,酶活力为3.05 U/mL。通过单因素试验对最佳工艺条件进行研究,结果表明:培养基装液量为100 mL/250 mL、培养温度30℃、接种量1 cm2/250 mL、转速180 r/min、pH 5.0。在单因素试验的基础上,采用中心组合试验原理设计响应面法优化工艺条件,得到最佳工艺条件为:发酵液装液量99 mL/250 mL、接种量0.99 cm2/250 m L、培养温度31℃、转速180 r/min、pH 5.0。在此条件下,测得内切型菊粉酶的酶活力为6.43 U/mL,比初始酶活力提高了111%。

摘要：研究菊粉酶热稳定性,菊粉酶在60℃具有较好的热稳定性;一些醇类物质和增稠剂可以提高菊粉酶的热稳定性;利用甘油、黄原胶和CaCl2设计三因素三水平的正交试验,确定了以6%的甘油,0·6%的黄原胶,100mmol/L的CaCl2组合的保护剂,对提高酶的热稳定性具有显著作用。

摘要：对实验室保存的一株无花果曲霉产菊粉酶的固态发酵工艺条件进行了优化。采用Placktt-Burman和Box-Behnken实验设计确定了最佳培养基组成和培养条件为:固体基质麸皮10 g,菊芋粉11.47%,NH4H2PO40.76%,NaCl 0.5%,MgSO40.05%,ZnSO4 0.01%,KH2PO40.1%,玉米浆5.71%,吐温-80 0.5%(均为相对于固体基质的质量分数),液固比1.3∶1,初始pH 5.5,28℃下静止培养72 h,期间翻曲3-4次,酶活最高达到205.14 U/g干曲。

摘要：以大蒜渣为原料,利用马克斯克鲁维酵母诱导产出菊粉酶。所得菊粉酶经硫酸铵盐析,得出最佳饱和度为40%～80%。在这一区间的饱和度下经过透析、冷冻干燥,沉淀得到较纯的外切菊粉酶。再利用发酵酶水解大蒜渣制备果葡糖浆,经选择温度,酶活,底物浓度,pH以及时间这5个单因素,并正交设计,得出最优方案:pH4.8,温度为45℃,底物浓度9mg/mL,酶活量53.95U/mL,时间为8h,此时水解率达到96%。经高效液相色谱法-示差折光分析法可以知道,酶解液以果糖为主。

摘要：筛选到1株菊粉酶高产克鲁维酵母菌株,采用酵母高密度细胞发酵方法,最高菊粉酶产量达到28878u/mL,比80～90年代国际上报道的克鲁维酵母菊粉酶最高产量高68倍。该酶的菊粉酶/转化酶活性比为1/2472;菊糖Km=133mmol/L,蔗糖Km=626mmol/L;最适反应pH值为44,但在pH38～56的范围内均保持了较高的活性,相当于最适pH值下活性的90%;最适反应温度为55℃,在50～575℃范围内能够保持较高活性,50℃下酶的半衰期约为16h;外加Mg2+提高酶活性1128%。

摘要：利用克鲁维酵母菊粉酶酶解菊粉制作高果糖浆 ,优选的酶解条件是 :菊糖浓度15.0 % ,酶作用剂量 2 2U/g ,50℃下作用 6～ 36h ,底物水解率 >95%。水解产物中果糖占95%以上 ,葡萄糖占 5%以下 ,不含其它糖。产酶酵母所含营养物质非常丰富。真蛋白含量4 3.10 % ,赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、色氨酸分别是 3.0 2、0 .58、0 .4 4、0 .52mg/kg ,维生素B1和B2含量分别是 5.53和 6 0 .70mg/kg ,重要微量元素铜、锌、铁、锰的含量分别是 19、110、170和 15mg/kg。在本研究设计工艺下 ,高果糖浆和高值兼用酵母生产可以一举两得。