摘要：目的研究葡萄膜黑色素瘤(UM)组织中肿瘤相关淋巴管生成与肿瘤组织病理学高危因素的关系。设计实验研究。研究对象北京同仁医院眼科病理室2009-2014年55例(55眼)UM眼球石蜡组织标本。方法采用淋巴管内皮特异性标记物LYVE-1和D2-40,通过免疫组织化学Elivision法检测UM组织中淋巴管生成情况,结合患者临床组织病理学资料进行统计学分析;统计肿瘤的微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMD),结合CD-34检测肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)的结果分析两者的相关性。主要指标UM组织的淋巴管阳性率、LMD、MVD。结果 55例UM组织标本中36例(65.5%)观察到淋巴管。肿瘤累及睫状体者淋巴管阳性率(95.0%)明显高于未累及者(48.6%),发生球外蔓延者淋巴管阳性率(93.3%)明显高于未发生者(55.0%),肿瘤最大基底直径>16 mm者淋巴管阳性率(82.4%)明显高于≤16 mm者(38.1%),上皮样细胞类型者淋巴管阳性率(88.0%)明显高于非上皮样细胞类型者(46.7%)(P均<0.05)。患者年龄(P=0.187)、性别(P=0.452)、眼别(P=0.663)、是否有虹膜新生血管(P=0.395)、是否继发视网膜脱离(P=0.641)、视盘是否受累(P=0.121)、是否浸润巩膜(P=0.284)及术前是否放疗(P=0.483)与UM组织中的淋巴管阳性率均无统计学相关。LMD与MVD成正相关(r=0.917,P<0.001)。结论 2/3的葡萄膜黑色素瘤中存在肿瘤相关淋巴管,其在UM的侵袭转移中可能起到一定的作用。免疫组织化学法检测淋巴管生成是判断UM患者预后的重要指标之一。

摘要：目的探讨动态血管模型(DVP)曲线及参数图在葡萄膜黑色素瘤超声造影诊断中的应用价值。设计实验研究。研究对象 53例(53眼)葡萄膜黑色素瘤患者的超声造影资料。方法通过Sonoliver软件对超声造影资料进行定量分析,并以病变与同一患者邻近正常眶内对照组织的增强水平差值构建DVP曲线及DVP参数图。根据病变绿色曲线开口方向与黄线的关系将DVP曲线分为Ⅰ~Ⅳ型,根据三组颜色是否出现将DVP参数图分为Ⅰ~Ⅳ型。主要指标峰值强度(IMAX)、上升时间(RT)、达峰时间(TTP)、平均渡越时间(m TT);DVP曲线及参数图类型的构成比。结果葡萄膜黑色素瘤的IMAX(210.08±102.14)%高于正常眶内对照组织(100.00±0.00)%(t=7.846,P=0.000)、葡萄膜黑色素瘤的m TT(39.40±17.97)s快于正常眶内对照组织(49.95±18.64)s(t=-3.417,P=0.001)。葡萄膜黑色素瘤DVP曲线:Ⅰ型38例(71.70%),Ⅱ型10例(18.87%),Ⅲ型3例(5.66%),Ⅳ型2例(3.77%)。DVP参数图:Ⅰ型43例(81.13%),Ⅱ型5例(9.43%),Ⅲ型3例(5.66%),Ⅳ型2例(3.77%)。结论超声造影DVP可以反映葡萄膜黑色素瘤与正常眶内组织之间的灌注差异特点,大多数葡萄膜黑色素瘤主要表现为Ⅰ型DVP曲线及Ⅰ型DVP参数图。

摘要：目的比较荧光原位杂交(FISH)和多重连接依赖式探针扩增(MLPA)两种方法对于检测葡萄膜黑色素瘤的3号染色体异常的效能。设计实验研究。研究对象北京同仁医院2019年行眼球摘除治疗的33例葡萄膜黑色素瘤患者的眼球标本。方法分析33例患者的临床组织病理学特征。对摘除后行福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的眼球标本中的肿瘤组织采用FISH和MLPA两种方法分别检测3号染色体的拷贝数并进行比较,并对单体型3号染色体与临床组织病理特征做相关性分析。主要指标3号染色体拷贝数,年龄,性别,肿瘤位置,肿瘤最大基底径,肿瘤细胞类型。结果 33例葡萄膜黑色素瘤患者的肿瘤组织通过FISH和MLPA两种方法检测到单体型3号染色体的比例分别为33.3%和36.4%,其中1例患者FISH检测为二倍体型3号染色体,但MLPA检测为单体型3号染色体。FISH和MLPA两种方法检测的总体符合率为97.0%。单体型3号染色体的比例在肿瘤侵犯睫状体组为66.7%(6/9例),而在肿瘤未侵犯睫状体组仅为25.0%(6/24例)(P=0.044)。单体型3号染色体的比例在上皮样细胞型组为50.0%(8/16例),而在非上皮样细胞型组为23.5%(4/17例)(P=0.157)。结论葡萄膜黑色素瘤为单体型3号染色体者占36.4%。FISH和MLPA均可在葡萄膜黑色素瘤的FFPE样本中完成3号染色体异常的检测,MLPA检测的敏感性较FISH略高。

摘要：在葡萄膜黑色素瘤(UM)的研究历程中,眼部黑色素瘤协作研究(COMS)是里程碑式的、卓越的临床研究。其研究结论是今天UM临床工作及指南制定的基础。COMS是首次也是迄今为止实施的最大的一组随机临床试验,比较两种或两种以上治疗方案对眼内原发恶性肿瘤的生存结果,可信度高;其研究设计、研究方法和研究结论,至今仍被广泛引用。学习COMS的研究经验,积极总结基于亚洲人群的研究数据,制定适合亚洲UM患者的治疗方法,既是对COMS数据的有力补充,也是对该项世界性研究的深入拓展,对进一步提高我国UM诊疗水平具有重要意义。

摘要：目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响。方法·应用免疫组织化学染色和Western blotting,分别检测眼部黑色素瘤[UM和结膜黑色素瘤(conjunctival melanoma,CM)]组织和细胞中APOBEC3B蛋白的表达水平。通过检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析UM中APOBEC3B表达水平与预后的关联。使用CRISPR-Cas9质粒APOBEC3B-sgRNA敲除UM细胞系OMM2.3中APOBEC3B基因,构建APOBEC3B敲除的OMM2.3稳转细胞系sgAPOBEC3B以及对照细胞系Vector;并通过克隆形成实验,探索APOBEC3B敲除对OMM2.3细胞增殖的影响。同时,通过APOBEC3B-shRNA和空载质粒建立APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞shAPOBEC3B和对照细胞shCtrl,对其进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),检测差异基因,并通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)揭示APOBEC3B调控的下游通路。通过免疫荧光染色鉴定下游通路的关键蛋白。通过应用通路靶向药物处理,检测APOBEC3B对UM药物治疗敏感性的影响。结果·免疫组织化学染色结果表明眼部黑色素瘤(UM和CM)组织相较于良性色素痣组织APOBEC3B表达更高。Western blotting也表明包括OMM2.3细胞在内的大多数眼部黑色素瘤细胞相较于正常对照细胞(视网膜色素上皮细胞)APOBEC3B蛋白表达水平更高。并且TCGA数据库分析表明,APOBEC3B高表达的UM患者总生存期(P=0.032)和无病生存期(P=0.000)更短。然而APOBEC3B敲除并不影响OMM2.3细胞克隆形成的能力,APOBEC3B敲低也没有造成细胞周期的显著改变。shAPOBEC3B和shCtrl细胞系的RNA-seq差异基因富集分析结果显示,APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞的复制应激相关通路,并且热图分析也显示APOBEC3B敲低后DNA复制应激相关通路基因表达发生改变。免疫荧光染色结果显示,APOBEC3B敲低后复制应激通路关键靶标磷酸化的复制蛋白A 32 kDa亚基(replication protein A 32 kDa subunit,RPA32)水平降低。在对APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞和对照细胞的药物敏感性实验中,发现相较于shAPOBEC3B细胞,shCtrl细胞对细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)抑制剂的敏感性更高。结论·APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞复制应激相关通路,且APOBEC3B表达的OMM2.3细胞对CHK1抑制剂的处理更为敏感。

摘要：目的研究葡萄膜黑色素瘤细胞系中凝血酶敏感蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)表达水平与葡萄膜黑色素瘤患者临床病理特征与肿瘤血管生成机制之间的关系。设计实验研究。研究对象葡萄膜黑色素瘤组织标本,葡萄膜黑色素瘤细胞系MUM-2B。方法 2004年1月至2007年12月在北京同仁医院行眼球摘除手术并经病理证实为葡萄膜黑色素瘤组织的标本50例,应用免疫组织化学法检测石蜡标本中TSP-1的表达,分析其与性别、年龄、组织学类型、肿瘤大小、侵犯睫状体、侵犯巩膜导管相关性。应用免疫组织化学法检测石蜡标本中CD34的表达,计算微血管密度(microvessel density,MVD),检测TSP-1与其相关性。构建TSP-1过表达慢病毒载体转染UM细胞系MUM-2e B,运用Q-PCR以及Western蛋白印迹法检测转染前后细胞系VEGF的表达量变化。主要指标葡萄膜黑色素瘤组织标本中TSP-1的表达与临床资料相关性,组织标本中MVD,细胞系TSP-1过表达前后VEGF表达量变化。结果 50例葡萄膜黑色素瘤组织中侵犯睫状体与未侵犯睫状体TSP-1表达阳性者分别为5/20和27/30;大肿瘤(最大基底直径>16 mm或高度>10 mm)和中等大小肿瘤(最大基底直径<16 mm或高度在2.5~10 mm)表达阳性者分别为3/11和29/39(χ2=5.470、4.845,P<0.05)。不同性别、年龄、组织学类型以及是否侵犯巩膜导管间TSP-1表达阳性例数的比较差异均无统计学意义(P=0.664、0.606、0.856、0.723)。葡萄膜黑色素瘤细胞系中TSP-1表达阳性组与阴性组的MVD差异具有统计学意义(Z=-4.616,P<0.05)。构建TSP-1过表达慢病毒载体转染UM细胞系MUM-2B,转染前后VEGF含量较前下降(P<0.05)。结论 TSP-1与葡萄膜黑色素瘤血管生成相关,葡萄膜黑色素瘤组织中TSP-1表达升高可抑制肿瘤血管生成,提示TSP-1可能作为预测葡萄膜黑色素瘤发生发展以及分子治疗靶点的指标。

摘要：目的探讨星形胶质细胞活化基因-1（AEG-1）对葡萄膜黑色素瘤（UM）生物学行为的影响。方法培养不同侵袭转移潜能的MUM-2B和MUM-2C细胞系，根据AEG-1基因序列设计出有效RNA干扰（RNAi）靶点序列及RNAi阴性对照scramble序列进行慢病毒载体的制备和病毒包装。在2株细胞系中，经AEG-1-RNAi慢病毒感染的细胞作为慢病毒感染组，空白慢病毒载体感染的细胞作为阴性对照组，未处理的细胞作为正常对照组。采用Real-time PCR、Western blot法分别检测各组细胞中AEG-1转录水平和蛋白表达水平；采用MTT法、Annexin V-APC法、细胞侵袭试验和细胞Transwell试验检测慢病毒介导AEG-1沉默对人UM细胞系生物学行为的影响。结果成功制备RNAi慢病毒载体而进行病毒包装，然后分别转染对数生长期的MUM-2B、MUM-2C细胞系，2株细胞系中的正常对照组、阴性对照组和慢病毒感染组间细胞中AEG-1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F=130.02，P0.05）。Western blot法检测结果显示，AEG-1蛋白表达水平在2株细胞系中的各组比较，差异均有统计学意义（F=146.17，P<0.01；F=156.79，P<0.01），其中慢病毒感染组较阴性对照组蛋白相对表达均显示下调，差异均有统计学意义（均P<0.01）。MTT法检测发现，2株细胞系实验第2～5天，慢病毒感染组细胞增生倍数较阴性对照组明显下降，差异均有统计学意义（t=5.78、30.68、23.99、29.40，均P<0.01；t=7.88、7.09、5.56、6.60，均P<0.01）；Annexin V-APC法检测发现，2株细胞系中慢病毒感染组凋亡率明显高于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=54.34，P＜0.01；t=11.68，P＜0.01）；细胞侵袭试验发现，在2株细胞系中慢病毒感染组侵袭倍数明显低于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=16.04，P＜0.01；t=13.98，P＜0.01）；细胞Transwell试验发现，在2株细胞系中慢病毒感染组转移倍数均明显低于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=12.04，P＜0.01；t=22.43，P＜0.01）。结论慢病毒介导AEG-1沉默后，通过抑制UM细胞AEG-1的转录水平和蛋白表达水平，从而改变UM细胞的生物学行为，一定程度上减缓细胞增生，促进细胞凋亡并降低细胞侵袭和转移的能力。

摘要：目的应用比较蛋白质组学技术,分析鉴定葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜差异蛋白质,筛选出葡萄膜黑色素瘤相关蛋白。设计实验性研究。研究对象手术中切除的人葡萄膜黑色素瘤标本4例以及正常人捐献眼葡萄膜标本4例。方法研磨组织提取蛋白质后,应用双向凝胶电泳进行总蛋白分离,考马斯亮兰染色,Image Master 5.0软件分析蛋白胶图。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定部分差异蛋白质点,通过MASCOT软件在NCBI数据库中检索蛋白质信息。主要指标差异蛋白质。结果建立了葡萄膜黑色素瘤和正常人葡萄膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜之间差异表达的蛋白质30种,其中24种蛋白只在葡萄膜黑色素瘤中出现。葡萄膜黑色素瘤中表达上调的蛋白5种,表达下调的蛋白1种。这些差异蛋白可能执行新陈代谢酶、信号转导调节、细胞骨架、免疫调节等生物学功能。结论通过比较蛋白质组学初步筛选出与葡萄膜黑色素瘤发生演进相关的蛋白质。需要进一步验证蛋白的定位及功能。

摘要：目的：研究家族性葡萄膜黑色素瘤（ＦＵＭ）患者的临床简况和家族。设计：回顾性病例组。地点：三期转诊中心。患者：对４５００例葡萄膜黑色素瘤患者的病历进行葡萄膜黑色素瘤家族史的复习。研究这些患者及其家族的临床简况，以确定ＦＵＭ的发生率和遗传模式。用统计学方法分析ＦＵＮ与皮肤黑色素瘤、家族性不典型痣和黑色素瘤综合征及其他非黑色素细胞癌的相关性。结果：４５００例葡萄膜黑色素瘤患者中，２７个家族内５６例患者（

摘要：目的探索葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)转移相关分子标志物,构建预测UM转移风险的基因评分模型。设计病例对照研究和诊断试验。研究对象癌症基因组(TCGA)公共数据库和基因表达综合(GEO)数据库中获取的UM患者原发肿瘤组织的转录组数据。方法通过获取公共数据库中UM肿瘤组织的转录组数据,分析转移性UM样本中差异表达基因,联合样本预后和临床信息,构建预测UM转移风险的基因评分模型,并在另外独立数据集中进行验证。分别对GSE21138和GSE44299数据集中转移和非转移原发UM肿瘤组织样本转录组数据的差异基因进行分析,以GSE21138中样本作为训练集,将两数据集中在转移性UM组织中均发生上调或下调的基因纳入Lasso-Cox回归分析,构建预测UM患者无转移生存的预测模型。绘制该模型预测1、3、5年无转移生存的接受者操作特性曲线,并根据最佳评分Cut-off值对UM患者的转移风险进行分组,绘制Kaplan-Meier生存曲线;最后在GSE44299数据集和TCGA数据库的UM样本中验证该模型的预测能力。主要指标转移性UM组织和非转移性UM组织中的差异表达基因以及构建的基因评分模型对UM患者无转移生存、转移相关死亡、总生存和疾病特异生存的预测价值。结果共鉴定出在转移性UM样本中差异表达基因且变化倍数>2的基因共17个,Lasso-Cox回归构建了包含6基因(RIMS2、PTP4A3、HTR2B、HNMT、COBLL1、ID2)的UM患者无转移生存预测模型。该6基因评分模型预测1、3、5年无转移生存的AUC值分别为0.78、0.89、0.85。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,6基因评分分层为高危的患者具有较差的无转移生存。且该6基因评分模型在GSE44299数据集和TCGA数据库的样本中亦显示出对患者总生存和疾病特异生存的良好预测价值。结论构建了基于UM转移相关基因的预后预测模型,该模型对UM患者无转移生存、总生存及疾病特异生存均有较好的预测价值。