摘要：为了实现新城疫病毒（NDV）-F蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验采用基因工程方法对NDV-F蛋白的原核表达进行研究,在不改变NDV-F蛋白氨基酸序列的情况下,以NDV-F全基因组为模板设计并合成引物,采用RT-PCR法扩增NDV-F基因,并将其克隆到原核表达载体p ET32a（＋）中,构建重组质粒pET32a（＋）/NDV-F,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化重组蛋白NDV-F,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明：重组菌株在16℃条件下,以0.1 mmol/L IPTG诱导20小时时,NDV-F重组蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后在78 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明NDV-F重组蛋白在大肠杆菌中成功表达,且纯度较高,特异性较好。

摘要：为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/P33,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。