摘要：目的设计并建立一种基于结核分支杆菌表面抗原表位的蛋白芯片检测方法,用来进行临床分离样本的检测,探讨其在临床诊断中的应用价值。方法利用生物信息学方法,分析结核分枝杆菌抗原Ag85A,38 kD,CFP10,MPT51,16 kD,TB10.4和ESAT-6的表位,并克隆表达这些优势肽段,用于制备多靶点的蛋白芯片;使用该芯片对300株临床分析样本进行检测,与商品化蛋白芯片结果进行比较,分析其敏感性与特异性。结果在200例临床确诊结核病人中,商品化芯片检测敏感性为35.5%。而本文建立的蛋白芯片检测敏感性为98.5%;在100例临床检测非结核病人中,商品化芯片特异性92%,而本文建立的蛋白芯片特异性97%。结论基于优势表位的蛋白芯片敏感性及特异性均显著高于商品化试剂盒,具有较高的临床诊断价值,可提高检测阳性率。

摘要：本文采用间接竞争免疫法,研究了可视化蛋白芯片快速检测牛奶中庆大霉素的方法。在固定有庆大霉素人工抗原的醛基修饰芯片的反应区内,加入庆大霉素单克隆抗体和游离的庆大霉素或牛奶样品混合物,待抗原抗体反应完全后依次加入纳米银标记的二抗（羊抗鼠）及银增强显色剂进行可视化检测,结果采用可视化生物芯片检测系统进行定量分析。通过设计制备内标点及建立的内标曲线,可在同一孔内定量检测游离的庆大霉素。该法庆大霉素的线性检测范围为0.1∽200ng/mL,检测限为0.1ng/mL,样品的加标回收率为95%∽112%。

摘要：目的探索一种纯度高、简便、低成本制备抗子宫内膜抗原的系统和便捷的检测方法。方法通过YK537大肠杆菌表达系统制备人重组子宫内膜抗原蛋白。获得蛋白制备蛋白芯片,利用蛋白芯片方法和酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测71例不孕患者抗子宫内膜抗体。结果重组子宫内膜蛋白基因序列克隆入表达载体phoA下游并在大肠杆菌中成功表达。SDS-PAGE和HPLC的结果显示重组子宫内膜抗原蛋白纯度大于95%。通过蛋白芯片和ELISA检测显示蛋白芯片和传统ELISA方法的受试者工作特征曲线(ROC曲线)显示结果一致,曲线下面积为0.89。结论新设计的重组子宫内膜抗原蛋白能在大肠杆菌分泌表达系统简便、高效地表达,将获得的新抗原用于蛋白芯片,操作简便,结果可信,有望成为临床检测抗子宫内膜抗体的手段。

摘要：本研究根据抗原和抗体特异性结合的免疫学原理,采用荧光标记竞争免疫法,构建蛋白芯片测定样品中的兽药残留含量。同时设计了一种简便快速的样品制备方法,能够从多种组织样品同时提取多种残留兽药。结合博奥生物有限公司研发的样品分子提取仪、芯片扫描仪以及配套的自动化数据分析软件,开发了晶芯兽药残留蛋白芯片检测系统。陔系统可用于猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、牛奶中磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、链霉素、双氢链霉素、恩诺沙星以及氯霉素的定量检测。

摘要：纳秒脉冲电场具有诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤生长和诱导抗肿瘤免疫的作用。由于纳秒脉冲诱导治疗涉及的通路过多和常规检测特异性生物标志物技术的局限性,其凋亡机制尚未达成共识且暂时没有高效的研究方法。为了深入研究凋亡机制,该文利用蛋白芯片技术和富集分析技术研究了纳秒脉冲电场诱导小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡机制,并推导了纳秒脉冲诱导治疗的凋亡机制。该研究方法对于有此类靶点数目众多的机制研究具有独特的优势,可为设计未来的纳秒脉冲诱导治疗方案提供参考,优化最佳的脉冲参数或增强/抑制特定的分子以获得最佳治疗效果。

摘要：为了克服现有被动式生物芯片的不足,我们从抗原抗体反应的基本原理出发,建立了固相表面的抗原抗体反应模型,并根据模型设计了一种新型的主动式蛋白芯片系统,该系统中引入负压发生装置及控制装置,可对硝酸纤维素(NC)膜上发生的抗原抗体反应进行控制。并对该系统进行了仿真,结果表明它具有快速、稳定、鲁棒性好等优点,能满足实际要求。该系统将有助于提高抗原抗体反应的效率,改善芯片检测结果的重复性和准确性。

摘要：蛋白质组学方法发展迅速 ,并日见成熟。蛋白芯片技术、双向电泳 -质谱技术、多维液相色谱 -质谱技术等 ,已被广泛应用于寻找疾病相关的差异表达蛋白质、疾病相关的生物标记分子以及药物靶点用于临床诊断、药物设计、以及疾病发病机理的研究等。本文对上述研究进展作了简要综述。

摘要：目的:克隆纤连蛋白(fibronectin)各功能区域基因,在大肠杆菌中表达以筛选与HBsAg相互作用的区域。方法:将纤连蛋白分成7个片段,设计引物,利用RT-PCR从HepG2.2.15中扩增出相应的PCR产物,连接到表达载体pGEX4T-1中,用IPTG诱导目的蛋白在***中表达,通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定。融合蛋白纯化后制备蛋白芯片,与HBsAg杂交,筛选纤连蛋白中与HBsAg相互作用的区域。结果:经RT-PCR从HepG2.2.15中扩增到各结构域片段的cDNA,序列分析均正确;SDS-PAGE分析表明,各结构域片段的可溶性表达产物均占细菌可溶性蛋白的10%以上;Western印迹分析提示,诱导表达产物可与GST单抗发生特异性反应。经制备蛋白芯片并杂交,发现片段FN1、FN2信号最强。结论:成功地表达了纤连蛋白各片段,蛋白芯片杂交结果显示纤连蛋白可能是通过Ⅱ型肝素结合区及其羰基端(c端)与HBsAg相互作用。

摘要：目的利用网络药理学预测分析和动物模型试验验证的方法,对红花调控皮肤色素沉着的调控机制进行研究。方法利用TCMSP数据库筛选红花的有效成分和相应的作用靶点,在GeneCards数据库收集皮肤色素沉着疾病的靶点,通过String数据库分析潜在靶点的蛋白互作,并利用David数据库对通路进行富集分析,随后采用Cytoscape3.7.2软件构建有效成分-靶点-通路的网络。通过UVB豚鼠动物模型和蛋白芯片技术检测MAPK通路中关键蛋白的含量。结果网络药理学预测了红花有22个活性成分和351个靶点,色素沉着疾病有203个靶点,红花活性物调控色素沉着的交集靶点有26个。其中,红花调控皮肤色素沉着的主要活性成分为槲皮素、木犀草素、黄芩素等;潜在的靶点为AKT1、MAPK1、EGFR等;核心通路为黑色素瘤、P13K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。动物蛋白芯片的实验结果显示,红花提取物参与调控MAPK/MITF通路,可抑制p38、p-JNK、p-MAPK1、MITF的表达水平。结论本研究预测了红花治疗皮肤色素沉着可能的作用机制,为红花治疗皮肤色素沉着的应用和研究提供了参考。

摘要：为了克服现有被动式生物芯片的不足,本文设计了一种新型的主动式芯片系统,在该系统中引入负压发生装置及控制装置,对NC膜上发生的抗原抗体反应进行控制。对该系统进行仿真,结果表明它具有快速、稳定、鲁棒性好等优点,能满足实际要求。该系统将有助于提高抗原抗体反应的效率,改善芯片检测结果的重复性和准确性。