摘要：蛋白酶体由多个亚基结构组成,主要负责清理机体的缺陷蛋白,并维持蛋白质稳态,蛋白酶体系统是控制蛋白质降解的主要途径。多项研究表明,蛋白酶体各结构成分的水平和活性会随着衰老逐渐下降,并影响衰老及衰老相关疾病(如神经退行性疾病等)的发生发展。同时,蛋白酶体活性的降低会引起蛋白质稳态失衡,加速衰老的发生。该文综述了近年来蛋白酶体在衰老领域中的研究进展,旨在阐明蛋白酶体与衰老的关系,为设计预防衰老相关疾病或抗衰老的靶向药物提供理论基础。

摘要：蛋白酶体调节颗粒(regulatory particle,RP)参与调控许多重要信号通路的蛋白质降解,在维持细胞稳态中发挥重要作用。近年来,真核细胞蛋白酶体在癌症治疗中的作用机制及药物研发已引起了广泛关注,并有3种蛋白酶体抑制剂已用于临床治疗。随着蛋白酶体功能研究的不断深入,以及晶体学和冷冻电镜技术在其结构生物学研究中的广泛应用,目前已解析了3类蛋白酶体调节颗粒的原子结构。类型1是保守的调节颗粒19S(PA700);类型2是11S蛋白酶体调节颗粒PA28(PA28α,PA28β,PA28γ)和PA26等;类型3是保守的Blm10/PA200蛋白酶体调节颗粒。其中,类型1以ATP依赖的方式发挥蛋白质降解活性,类型2和类型3以非ATP依赖的方式发挥功能。通过研究3种不同类型蛋白酶体调节颗粒的结构和功能,阐明了蛋白酶体活性调节机制并促进了基于蛋白酶体结构的抑制剂开发。本文以蛋白酶体调节颗粒的结构生物学研究为基础,系统地总结了3类家族蛋白质的结构生物学特征和其调节蛋白酶体活性机制的研究进展,这些将为深入了解蛋白酶体的作用机制及其在癌症治疗领域的药物设计提供重要的参考信息。

摘要：本文基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术设计构建纳米磷光探针。设计构建一种用于活细胞蛋白酶体实时活性检测的探针。主要设计思路为利用纳米金和铱金属配位化合物之间产生的FRET现象,通过目标蛋白酶的底物多肽连接二者。纳米磷光探针中的上述底物多肽被相应的蛋白酶体特异性识别和切割。FRET供体(铱)配合物与FRET受体(金纳米颗粒)分离,导致FRET现象消失,呈现铱配位配合物的绿色磷光信号。本研究所设计纳米探针针对蛋白酶体(目标蛋白)产生的磷光信号与其酶活性呈正相关,可用于试管和活细胞水平的蛋白酶体活性检测。此外,本研究中所述的酶活检测探针,针对不同的蛋白酶活性检测具有灵活的转变能力,通过多肽序列的替换,可获得目的蛋白酶活性检测磷光探针,大大拓展了其应用。

摘要：蛋白酶体是细胞内存在的一种多亚基复合物,对真核细胞内环境的稳态有着至关重要的作用。其中,免疫蛋白酶体是能够调控炎症因子、参与MHC-I抗原提呈路径的一类特殊蛋白酶体。本文对近年来免疫蛋白酶体在病毒复制、免疫逃逸、致病性以及抗病毒治疗等方面的研究进展进行综述,为设计新型抗病毒药物提供新思路。

摘要：目的通过筛选华支睾吸虫cDNA文库发现蛋白酶体β1(CsPSMB1)新基因,表达其重组蛋白,为进一步研究CsPSMB1的功能及应用提供基础数据。方法将插入于pBluscripetⅡSK(+)载体中的cDNA随机测序,发现CsPSMB1新基因。根据pGEX-4T-1的多克隆位点及CsPSMB1编码区序列设计引物,进行PCR扩增,双酶切后连接到pGEX-4T-1载体中。重组表达质粒pGEX-4T-1-CsPSMB1经PCR、双酶切及测序鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果发现了编码PSMB1基因的一个新成员CsPSMB1,CsPSMB1全长749个核苷酸,编码一个217个氨基酸残基的蛋白,理论分子量为24kD,预测的蛋白与人的PSMB1蛋白同源性为50%并且含有一个蛋白酶体结构域。序列已经成功登录GeneBank,登录号为AY849971。构建成功重组质粒pGEX-4T-1-CsPSMB1,经IPTG诱导后表达出PSMB1的GST融合蛋白。结论发现了华支睾吸虫新基因CsPSMB1,成功构建pGEX-4T-1-CsPSMB1重组表达载体并表达出了CsPSMB1的GST融合蛋白。

摘要：蛋白酶体是一种庞大的、多价复合酶 ,它在承担细胞内蛋白质降解的泛蛋白 蛋白酶体通路(UPP)的关键步骤中起催化作用。UPP不仅可以催化降解异常蛋白质 ,而且在许多调控蛋白质的更新和加工过程中起重要作用 ,这些蛋白质的催化过程涉及到人类疾病发病机制的重要生化机制。目前 ,与UPP有关的酶已被认为是药物设计的分子靶位 ,蛋白酶体参与调节多种细胞功能 ,其特异性抑制剂不仅可以作为研究UPP的有利工具 ,而且也是潜在的抗肿瘤、抗炎药物。本文综述了蛋白酶体抑制剂的药理活性研究进展。

摘要：目的研究原核类泛素（Pup）-蛋白酶体系统对分枝杆菌生长活力的影响。方法分别敲除耻垢分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统中pup和蛋白酶体β亚基基因（prcB）。选取待敲除基因的上下游侧翼序列设计引物，构建自杀性载体，靶基因同源序列和菌株基因组发生同源重组后获得基因敲除的菌株。分别连续测定野生型和基因敲除株在正常及低氧和厌氧应激培养条件下的吸光度值，比较菌株生长活力的变化。结果正确构建敲除pup和prcB基因的突变株，分别命名为△SM-Pup和△SM-prcB。△SM-Pup菌株生长速度快于野生型菌株和△SM—preB株。prcB基因的敲除对细菌的生长活力没有产生明显的影响。结论Pup-蛋白酶体系统对耻垢分枝杆菌的生长产生了一定作用，但具体机制仍需要进一步研究探讨。

摘要：alpha-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)异常累积与聚集是帕金森病的重要致病因素之一。目前,已有的降低细胞内α-syn的方法多是从抑制新蛋白质合成角度进行,而无法干预已经存在并产生毒性的蛋白质。该研究旨在探索一种可以降解α-syn的新方法,从而挽救α-syn造成的细胞损伤。本研究依据Trim-Away方法设计了2种针对α-syn降解的肽段,即Pep1和Pep2,并将其过表达至HEK293T以及SH-SY5Y细胞中。Western印迹检测和免疫荧光分析以及免疫共沉淀结果表明,Pep1和Pep2可以在上述细胞系中表达,并与α-syn形成复合物,协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn(P<0.05,P<0.0001)。进一步的细胞活力以及细胞毒性结果显示,Pep1和Pep2可以挽救α-syn引起的细胞活力的下降(P<0.0001),并且可以缓解α-syn造成的细胞毒性的增加(P<0.0001)。总之,本文的结果提示,肽段可以协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn,并缓解α-syn造成的细胞损伤。本研究为短肽的研发、应用以及帕金森病的干预提供新的思路。

摘要：应激是指机体对外界或内部的各种刺激所产生的非特异性应答反应。泛素通过泛素-蛋白酶体途径在应激蛋白的降解过程中发挥重要作用,从而使生物体适应各种胁迫并对之产生抗性。对泛素-蛋白酶体系统作用机理及其基因分子结构的阐明,将有助于途径特异性位点抑制剂的设计,本文介绍了泛素-蛋白酶体系统的组成结构、作用机理和调控机制。

摘要：设计合成了一类新型金诺芬衍生物,采用核磁共振波谱(NMR)和高分辨质谱(HRMS)确认了其结构.以目标化合物处理肿瘤细胞后,采用四氮唑蓝盐(MTS)法检测细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测总的泛素化蛋白(Ub-Prs)、K48位链接多聚泛素化蛋白以及蛋白酶体外源性特异性底物(GFPu)的表达情况.结果表明,金诺芬衍生物可通过抑制蛋白酶体功能来发挥抗肿瘤效果.