摘要：设计并合成了具有不同碱性氨基酸残基数和不同疏水性片段链长的基于Mel(12～26)的系列反序肽类似物. 结果表明, 反序肽的正电荷和疏水性对于抑菌活性都很重要, N端至少保留3个碱性氨基酸(正电荷>4)和C端的疏水性片段的链长至少为8个氨基酸残基的类似物具有较高的抑菌活性, 具有较大的抑菌活性的最小反序肽类似物为具有11个氨基酸残基的RetroMel(13～23). 这些反序肽的溶血活性都很小.

摘要：为了保留蜂毒肽抗类风湿关节炎活性,降低溶血性和致敏性,设计合成蜂毒肽的片段,观察它对兔免疫性关节炎的治疗作用。采用多肽合成法合成蜂毒肽结构中亲水性片段,经高效液相色谱(HPLC)及质谱(MS)分析。建立家兔卵蛋白性关节炎模型,进行溶血性试验、致敏性试验以及动物模型治疗实验。结果蜂毒肽片段溶血率<5%,致敏率<8%,动物模型治疗有效率可达到70%。蜂毒肽片段可有效地保留蜂毒肽抗类风湿关节炎活性,减低蜂毒肽的强溶血活性及致敏活性。

摘要：蜂毒肽对耐药菌具有较强的抗菌活性,但是蜂毒肽存在严重的溶血作用,限制了其临床使用。因此,需要研发新型高抗菌活性、低溶血作用的蜂毒肽衍生物。本研究通过改变蜂毒肽的氨基酸疏水性、极性和正电荷数量设计合成新衍生物20个,并评价其抗菌活性和溶血作用。结果表明,8个衍生物对阳性菌的抗菌活性保持或提高(MIC:1~4μg·m L~(-1)),16个衍生物的溶血作用(HC_(50)≥11.9μg·m L~(-1))降低。与蜂毒肽(MIC:4μg·m L~(-1),HC_(50):5.3±0.4μg·m L~(-1))相比,衍生物13 (MIC:2~4μg·m L~(-1))和15 (MIC:1~2μg·m L~(-1))对测定的耐药或敏感的金葡菌和屎肠球菌显示出相当或提高的抗菌活性,并且衍生物13的溶血作用(HC_(50):24.0±4.3μg·m L~(-1))明显降低。本研究为蜂毒肽的构效关系与构毒关系研究奠定基础。

摘要：采用固相法设计合成了４个蜂毒肽片段：Ｍｅｌ１２、Ｍｅ１１３、Ｍｅｌ１４、Ｍｅｌ１５。应用电泳技术，抑制钙依赖性的磷酸二酯酶酶活方法和荧光技术研究了这些多肽与钙调蛋白的相互作用。结果表明这些多肽与钙调蛋白均形成１：１复合物，抑制钙依赖性的磷酸二酯酶的活性，其中Ｍｅｌ１４和Ｍｅｌ１５对钙调蛋白的结合活性与完整的蜂毒肽比较接近。

摘要：目的制备重组抗白细胞介素4受体(recombinant anti-interleukin-4receptor,anti-IL-4R)单链抗体(singlechain variable fragment,scFv)与蜂毒肽(melitin,MLT)的融合蛋白。方法设计并合成抗IL-4R单链抗体基因与蜂毒肽基因,再用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定;通过重叠延伸PCR(gene splicing by over lap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)技术将抗IL-4R单链抗体基因与蜂毒肽基因连接成scFv-MLT融合基因,并以1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定;scFv-MLT融合基因连接pET-32a原核表达载体以构建重组质粒,并用EcoRⅠ和XhoⅠ内切酶进行酶切鉴定;将重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌感受态细胞,37℃环境下培养于含有羧苄青霉素(100μg/mL)的平板TB固体培养基表面,分离出单菌落;挑取单菌落接种于含有羧苄青霉素(200μg/mL)TB液体培养基中,于通气良好的37℃环境下培养,使其A600nm值达到0.4~0.6,用浓度为1mmol/L的诱导剂IPTG诱导表达scFv-MLT融合蛋白;3h后达到表达高峰,离心沉淀菌体并将其裂解,提取所有蛋白并进行scFv-MLT融合蛋白纯化和复性;通过SDS-PAGE分析scFv-MLT融合蛋白的分子量,运用Western blot检测表达蛋白的特异性。结果 scFv-MLT基因序列大小约1 000bp,IL-4R单链抗体与蜂毒肽重组蛋白的分子量在48~63kD之间,与预期分子量52kD相符,scFv-MLT融合蛋白具有较高的特异性。结论成功制备了scFv-MLT重组蛋白,为进一步研究抗IL-4R单链抗体与蜂毒肽的融合蛋白的靶向生物治疗奠定了工作基础。

摘要：为了保留蜂毒肽抗类风湿关节炎活性,降低溶血性和致敏性,设计合成蜂毒肽的片段,观察它对兔免疫性关节炎的治疗作用。采用多肽合成法合成蜂毒肽结构中亲水性片段,经高效液相色谱及质谱分析,确定合成多肽片段的氨基酸组成。建立家兔卵蛋白性关节炎模型,进行溶血性试验、致敏性试验以及动物模型治疗实验。结果:蜂毒肽片段溶血率<5%,致敏率<8%,动物模型治疗有效率可达到70%。实验证明蜂毒肽片段的合成可有效地保留蜂毒肽抗类风湿关节炎活性,减低蜂毒肽的强溶血活性及致敏活性。

摘要：目的构建蜂毒肽与人变构白细胞介素-2原核表达载体，为进一步研究该融合基因而奠定基础。方法以本室构建质粒pGEX-4T-2／Melittin-IL-2（^88Arg）为模板，设计引物，用PCR定点突变的方法将IL-2部分的^125Cys突变为Ala，PCR产物与pMD18-T连接，转化大肠杆菌，小提质粒，DNA测序后再将目的片段连接于pET-15b，最后酶切鉴定。结果PCR产物542bp，构建质粒双酶切、DNA测序鉴定如预期。结论成功构建蜂毒肽与人变构白细胞介素-2原核表达载体。

摘要：目的构建蜂毒肽与人变构白细胞介素－2原核表达载体，为进一步研究该融合基因而奠定基础。方法以本室构建质粒pGEX－4T-2／Melittin－IL－2（^88Arg）为模板，设计引物，用PCR定点突变的方法将IL-2部分的^125Cys突变为Ala，PCR产物与pMD18-T连接，转化大肠杆菌，小提质粒，DNA测序后再将目的片段连接于pET-15b，最后酶切鉴定。结果PCR产物542bp，构建质粒双酶切、DNA测序鉴定如预期。结论成功构建蜂毒肽与人变构白细胞介素-2原核表达载体。

摘要：目的:为了提高蜂毒肽Melittin的抗肿瘤活性,我们设计出新型多肽并将其命名为Melittin-K1。并对多肽Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用进行研究。方法:采用CCK-8法检测细胞活力。扫描电镜拍照结合培养基上清中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的表达水平来评价细胞膜的损伤水平。构建BEL-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价Melittin-K1、Melittin体内对肝癌生长的影响以及毒性。结果:与Melittin相比,Melittin-K1抑制BEL-7402细胞生长的作用更显著;与L02细胞相比,BEL-7402对Melittin-K1的杀伤作用更敏感;Melittin-K1体外抑制BEL-7402细胞生长呈时间、剂量依赖性。扫描电镜以及LDH检测结果均显示Melittin-K1处理组细胞膜的破损情况严重。BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型结果表明,Melittin-K1体内显著抑制肿瘤生长,其抗肿瘤作用明显高于同剂量Melittin。Melittin-K1和Melittin体内毒性小,主要表现在,与模型组相比,体重曲线、肝功指标均未发生明显改变。结论:Melittin-K1能够明显抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖,是一种极具潜力的抗肝癌药物。

摘要：蜂毒肽是一种两亲性阳离子肽,作用类似跨膜G蛋白偶联受体,具有溶血、广谱抗菌和抗肿瘤细胞等生物学活性。为进一步研究蜂毒肽对黑色素调控相关G蛋白基因表达的影响,本研究选择30日龄乌骨鸡20只,平均分为2组,实验组注射蜂毒肽(剂量为150~200μg/kg体重,6 d后重复注射1次),对照组注射同剂量的生理盐水安慰剂。12 d后采集胸侧皮肤样本,进行组织切片、染色镜检和相关基因的转录、蛋白水平检测等。结果表明:与对照组相比,蜂毒肽组日增重下降,肤色亮度(L)值的始末增幅加大;蜂毒肽组GNAI1基因及其上游EDNRB基因的mRNA表达量较对照组升高(P0.05),GNAS基因编码Gs蛋白的表达量下降(P>0.05);蜂毒肽组的胞内cAMP浓度较对照组降低(P<0.05);免疫组化分析结果表明,蜂毒肽组的GNAI1表达强度高于对照组;GNAS表达强度略低于对照组。综上,蜂毒肽可促进Gi活化,抑制Gs活性,进而影响包括cAMP在内的G蛋白上下游的黑色素调控因子,对乌骨鸡体内黑色素的表达产生了抑制效应。