摘要：目的探讨麻疹病毒（MeV）流行株血凝素蛋白（H）抗原表位上氨基酸（aa）变异对病毒抗原性的可能影响。方法利用生物信息学软件预测MeVH蛋白上B细胞线性表位，设计并合成来源于疫苗株和流行株表位以及同一区域非表位上的多肽对。间接ELISA法检测合成多肽的免疫原性，并制备多肽免疫血清。采用交叉ELISA法分析两条多肽间的抗原性差异，计算抗原比。结果合成的多肽均能与MeV免疫血清结合，其中设计在表位区的多肽对CW23／CW22（273。282aa）结合能力最强，而非表位区多肽对CW150／CW151（418～427aa）结合能力最弱。多肽对中来源不同两条多肽间抗原性差异较大，其中CW23（疫苗株来源）与CW22（流行株来源）间抗原比为16，CW123（疫苗株来源）与CW124（流行株来源）（236～246aa）间的抗原比为2．877±0．583。非表位多肽对中，CW125与CW126（356—364aa）间抗原比为1．631±0．481，而CW150与CW151间抗原比为10．367±1．617。结论麻疹流行株上仍存在保守的抗原表位，但预测的抗原表位及非表位区上的部分aa变异导致疫苗株与流行株间抗原性存在差异。

摘要：目的制备并鉴定中国境内流行的高致病性禽流感病毒H5N1血凝素蛋白(HA)的中和抗体及其表位。方法选取9个HA候选抗原表位序列设计串联表位,利用表面线性表位抗体库(SEAL)专利技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体,酶联免疫吸附实验检测亚型及与合成肽结合的剂量依赖性,假病毒微量中和实验筛选中和抗体,免疫印迹法验证与不同毒株HA的结合。结果共制备了23株单抗,其中亚型鉴定10株为IgG型;证明3株IgG3亚型的抗体具有高中和活性,均能与4种不同分枝HA结合;中和抗体识别肽为"LIKKNNAYPT"和"R/KSSFFRNVVW"且具有剂量依赖性。结论鉴定出3株分泌抗中国境内流行H5N1 HA的中和抗体,其对应的HA抗原表位为中和表位,可作为H5N1疫苗研制的候选表位。

摘要：目的:通过哺乳动物细胞表达出禽源H7N9流感表面HA蛋白,并鉴定其抗原性。方法:通过引物设计,利用融合PCR方法扩增得到H7N9禽流感HA基因,以p CAGGS为表达载体构建重组质粒p CAGGS-H7-thrombin。测序正确后将重组质粒转染293T细胞。经72 h后收获上清,通过镍柱和凝胶层析柱纯化后得到目的蛋白。Western blot和ELISA结果鉴定纯化的H7蛋白的抗原性。结果:293T细胞表达的上清经HisTrapTMHP纯化后过Superdex 200 10/300 GL分子筛,在洗脱体积达到11 m L左右出峰,由出峰位置判断其为H7三聚体。Western blot检测在60 ku左右有一条阳性条带,ELISA检测其对抗H7N9小鼠阳性血清有很高的反应值。试验成功表达禽流感病毒H7N9的H7蛋白,并且针对H7N9的阳性血清有较高的灵敏性,为进一步研究H7N9亚单位疫苗奠定了基础。

摘要：目的研究3种不同类型的马铃薯三糖五环三萜能否通过抑制H5N1流感病毒进入靶细胞,作为潜在的新型抗流感药物进行研发。方法以马铃薯三糖薯蓣皂苷衍生物1为先导化合物,设计并合成3个目标化合物,利用建立的H5N1假病毒活性检测方法,测试化合物的抑制活性。结果目标化合物1a、1b和1c对源自A/Thailand/Kan353/2004的H5N1假病毒毒株均具有明显的抑制作用,且化合物1b的活性最好,其IC50达到(1.25±0.22)μmol·L-1。结论初步构效关系研究表明,将先导化合物1结构中的薯蓣皂苷苷元替换成五环三萜苷元后可提高其抗病毒活性;五环三萜的苷元类型对抗病毒活性有重要影响,乌苏烷型的五环三萜为苷元其抗病毒活性最强。

摘要：H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8H5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8H5Fab的三维空间结构.8H5Fab与3种HA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8H5抗体与HA蛋白的作用模式与HA宿主来源无关,但与HA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8H5抗体识别的广谱中和表位是由HA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为H5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据。

摘要：应用DNAStar软件,参照GenBank中注册的AIV H5亚型毒株HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H5亚型AIV的HA基因,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点将H5 HA基因插入转移质粒载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-H5HA并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H5HA,再将其转染昆虫细胞High Five,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经SDS-PAGE和Western blotting检测,HA基因在High Five细胞中得到了表达,表达产物大小约为67ku,而且具有特异的免疫反应性。

摘要：【研究目的】利用杆状病毒表达系统表达AIVH9N2亚型HA基因以获得可以利用的HA蛋白;【方法】应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIVH9N2亚型HA基因序列,设计了一对引物,用RT-PCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H9亚型AIV的HA基因,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点将H9HA基因插入转移质粒载体pFastbacHTa中,获得重组转移载体pFastbacHTa-H9HA并将其转化DH10Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H9HA,再将其转染昆虫细胞HighFive,进行PCR鉴定、SDS-PAGE和WesternBlot检测;【结果】HA基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,HA基因在HighFive细胞中得到了表达,H9HA大小约为67KD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性;【结论】HA基因在昆虫细胞获得表达,为进一步生产检测H9N2亚型流感病毒的检测试剂或者构建亚单位疫苗奠定了基础。

摘要：Damian Ekiert及其同事披露了有关如何将一个人类的抗体与某一关键性流感蛋白结合的细节，该结合能够帮助人们研发针对季节性和大规模流行性感冒病毒的广谱疫苗。这种叫做CR6261的抗体会与流感病毒血凝素蛋白的一个高度保守（即其结构在许多不同的流感病毒株中都非常相似）的区域结合。这一发现对那些希望设计一种较为“通用型”的流感疫苗的研究人员来说是一个好消息，