摘要：目的建立一种检测全血标本中日本血吸虫DNA的环介导同温扩增（LAMP）方法。方法选择日本血吸虫基因组重复序列DNA SjR2（839～1 138 bp、563～764 bp）、SjSH7（204～399 bp）和Sj-nonLTR1（1 678～1 877 bp）的4段DNA序列作为扩增片段,根据LAMP原理设计合成4组引物,通过对此4组引物用于DNA LAMP扩增的敏感性和特异性进行比较分析和检测条件的优化,建立特异、敏感,可用于检测全血日本血吸虫DNA的LAMP方法。应用此方法对10只日本血吸虫感染前及感染后不同时间同一家兔的配对全血DNA进行扩增,观察其应用价值。结果 4组引物中,以日本血吸虫SjR2（839～1 138 bp）作为扩增靶片段,可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株（检出限为10-4ngDNA）、菲律宾株和曼氏血吸虫的基因组DNA,人全血基因组DNA、华支睾吸虫基因组DNA、疟原虫基因组DNA不能扩增。以Sj-nonLTR1（1 678～1 877 bp）为靶片段,LAMP扩增无特异性。以SjR2（563～764 bp）和SjSH7（204～399bp）为靶片段,可特异性扩增日本血吸虫中国大陆株基因组DNA（检出限为10-6ng和10-3ng）及菲律宾株基因组DNA,人全血基因组DNA、华支睾吸虫基因组DNA、曼氏血吸虫基因组DNA和疟原虫基因组DNA不能扩增。用SjR2（839～1 138 bp）引物对10只日本血吸虫感染兔不同时间的配对全血标本进行扩增,感染前血样均为阴性,感染后连续5周全血基因组DNA的浓缩标本均为阳性,非浓缩标本部分阳性。结论本研究建立了检测兔全血日本血吸虫兔基因组DNA的LAMP方法。该方法对浓缩DNA标本的检出效率高于非浓缩标本,具有血吸虫感染早期诊断价值。

摘要：目的研究自然条件下钉螺血吸虫感染率与粪便虫卵负荷、钉螺密度间的相关关系,探讨血吸虫病流行区达传播阻断所需的血吸虫负荷和/或钉螺密度阈值。方法采用两因素三水平的正交设计L9（34）：虫卵负荷设为1 000、5 000和10 000个/m^2,钉螺密度设50、100和200只/m^2,共设置9个实验组。于秋季10月份用含血吸虫虫卵粪便现场感染阴性钉螺,次年春季4月份回收钉螺并压碎镜检钉螺感染情况。结果 9个实验组钉螺感染率在1.09%~25.53%之间;同等粪便虫卵负荷下,钉螺感染率随钉螺密度的降低而增高,1 000只虫卵组有统计学意义（P〈0.01）;经多因素方差分析,钉螺感染率与粪便虫卵负荷、钉螺密度无显著相关性且后二者无交互作用（F=3.930,P〉0.05）。结论当钉螺密度≥5只/0.1 m^2,秋季1 000个及以上血吸虫虫卵可致1 m^2范围内的钉螺感染血吸虫。在钉螺感染环节中粪便虫卵负荷的作用似大于钉螺密度。

摘要：目的建立一种快速鉴定血吸虫感染性钉螺的环介导同温DNA扩增方法。方法选择一个高拷贝的日本血吸虫基因SjR2的部分DNA序列作为扩增靶位,根据环介导同温DNA扩增原理设计合成引物,建立扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法。使用此方法与聚合酶链反应(PCR)方法同时检测血吸虫感染性钉螺与正常钉螺的DNA,观察其应用价值。结果日本血吸虫SjR2基因的839～1 138 bp区段被成功扩增和克隆。利用根据该片段DNA序列设计合成的环介导同温DNA扩增反应的引物,成功地建立了能扩增该片段的环介导同温DNA扩增方法,其敏感性高于PCR法,能检出1 pg的血吸虫DNA。用此法检测30只感染性钉螺,阳性率为93.33%,而PCR的阳性率83.33%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论环介导同温DNA扩增检测血吸虫感染性钉螺具有较高的敏感性,是一种潜在有效的血吸虫感染性钉螺鉴定方法。

摘要：目的观察转化生长因子(transforming growth factorβ1,TGFβ1)小干扰RNA对小鼠血吸虫病肝纤维化的抑制作用。方法设计3条针对TGFβ1不同靶位的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),以及1条无关对照序列(HK),克隆至pGenesil-1质粒中。30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、无关序列对照组、序列1治疗组、序列2治疗组、序列3治疗组各5只。建立血吸虫病肝纤维化小鼠模型。测定各组小鼠肝组织羟脯氨酸含量;苏木精-伊红染色与Masson染色观察肝组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法分别检测肝组织内TGFβ1、母亲信号蛋白同源物(mothers against decapentaplegic homolog,Smad)3、Smad 7、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA和蛋白质表达水平。计量资料组间比较采用两独立样本t检验。结果所有治疗组小鼠的肝组织纤维化病理改变较模型组均得到明显改善;序列1治疗组、序列2治疗组和序列3治疗组小鼠肝组织羟脯氨酸含量较模型组均降低(t=14.870、7.097、10.741,均P<0.01)。所有治疗组肝脏内TGFβ1、Smad 3和α-SMA mRNA表达水平(模型组比序列1组t=3.235、5.141、10.026,模型组比序列2组t=3.396、5.145、4.951,模型组比序列3组t=3.511、5.429、6.485)与蛋白质表达水平(模型组比序列1组t=8.847、8.044、10.746,模型组比序列2组t=9.709、7.484、10.847,模型组比序列3组t=9.672、8.766、11.508)较模型组均下降(均P<0.01),而Smad 7的mRNA与蛋白质表达水平较模型组均升高(序列1组比模型组t=11.742、11.211,序列2组比模型组t=14.446、13.736,序列3组比模型组t=10.892、10.908,均P<0.01)。结论TGFβ1的RNA干扰能有效抑制小鼠血吸虫肝纤维化的发生,其机制可能通过抑制肝内TGFβ1、Smad 3和α-SMA的表达,促进Smad 7表达,从而下调肝星状细胞的激活信号,减少细胞内胶原合成,发挥抗血吸虫肝纤维化作用。