摘要：目的 :试图用计算机设计并筛选出血管内皮生长因子 (VEGF)的高效反义核酸 ;用实验方法研究VEGF反义核酸对K5 6 2细胞增殖的影响。方法 :用RNAstructure (version 3.7)软件 ,选择总自由能 (overall△G3 7)相对低的反义核酸 ,共计 7条 ,长度 18- 2 0核苷酸 ,全硫代修饰 ;细胞培养 72h ,采用台盼蓝拒染法观察存活细胞 ,用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平 ,分析反义核酸对K5 6 2细胞的作用。结果 :筛选出 6条反义药物对K5 6 2细胞生长有明显抑制作用 ,均优于阳性对照组 (X2 )。与随机对照组 (X1)相比 ,最优序列X7组细胞生长抑制率达31 9%、培养液中VEGF蛋白表达抑制率达 5 1.4 % ,overall△G3 7与反义药物活性密切相关 (r=0 887,P <0 0 1)。结论 :计算机辅助设计有助于获得更好反义药物 ,VEGF反义药物可抑制K5 6 2细胞生长及VEGF蛋白表达 ,内源性VEGF蛋白具有促进K5 6

摘要：目的探讨血管内皮生长因子小分子干扰RNA（VEGFsiRNA）体外实验对缺氧视网膜微血管内皮细胞（RMECs）的影响。方法原代培养未足月胎儿的视网膜微血管内皮细胞，用氯化钴模拟缺氧生长状态。设计、合成VEGFsiRNA并转染缺氧培养的细胞，分为VEGFsiRNA转染组（实验组）、缺氧组（空白对照组）和阴性siRNA转染组（阴性对照组），用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后VEGF表达的变化，噻唑蓝比色法（MTY法）观察细胞的生长增殖情况。结果转染VEGFsiRNA-脂质体复合物后24h、48h、72h，hRMECsVEGFmRNA表达水平较对照组分别下降21．05％、79．67％和90．48％，hRMECsVEGF蛋白的表达水平较对照组分别下降14．58％、66．97％和81．61％。转染后12h、24h、48h及72hhRMECs的增殖分别被抑制达15．0％、42．9％、78．3％和65．9％。结论VEGFsiRNA能下调未足月胎儿缺氧视网膜微血管内皮细胞VEGF的表达，抑制视网膜微血管内皮细胞增殖，是基因治疗早产儿视网膜病变的一个研究方向。

摘要：目的:综述有关血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfac-tor,VEGF)的实验结果及其对成骨的影响,明确VEGF是否能促进骨的形成。资料来源:资料来源于http://***/pubmed和http://***数据库等相关网站,采取电子数据检索方式获得。资料选择:选择有关VEGF的文章以及VEGF影响成骨的文章近30篇。不考虑文章中是否应用随机设计、盲法。数据提炼:这些研究证实了VEGF和VEGF受体的结构、生物学特性、表达。提示VEGF通过促进新生血管的形成、加快骨转换和阻止软骨细胞凋亡在软骨内成骨中扮演重要角色。膜内成骨中,在无软骨出现的情况下,成骨细胞产生、应答VEGF。VEGF激活、趋化破骨细胞,同时趋化、分化成骨细胞和促进基质的矿化。目前关于局部单纯应用外源性VEGF能否促进成骨仍有争论。但在某些情况如局部缺血环境下,增加局部VEGF可促进成骨。资料综合:与对照组相比,VEGF能通过对软骨内成骨、膜内成骨的影响促进骨的发生、形成和改建。结论:局部VEGF治疗的优势在于其既可刺激血管形成又可促进骨的形成和改建。如果最终能应用VEGF的这些特性治疗缺血性骨坏死、骨缺损、骨不连等疾病,将发现一条新的治疗途径。

摘要：背景:人工骨材料在大块骨缺损中常常无法发挥成骨作用,研究表明如果存在血供不足,骨缺损难以愈合。目的:了解血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)质粒转染细胞对珊瑚人工骨材料成骨作用的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-08/2007-06在德国海德堡大学附属骨科医院实验室完成。材料:应用6～9月龄雌性新西兰白兔24只制备桡骨骨缺损模型,并随机分为4组;自兔的骨髓分离培养骨髓基质干细胞,传代培养扩增;通过EndoFree Plasmid Giga试剂盒扩增pVEGF165和pCR3.1的质粒。方法:将pVEGF165或pCR3.1质粒转染骨髓基质干细胞,将含有VEGF基因的质粒和VEGF基因重组的骨髓基质干细胞分别载入珊瑚人工骨材料,然后植入2组模型兔桡骨干中段15mm的骨缺损内,另外2组植入载空白质粒或空白质粒转染的骨髓基质干细胞的珊瑚人工骨材料。主要观察指标:实验动物桡骨骨缺损内人工骨材料吸收速度,血管数目以及新形成的骨量。结果:VEGF重组的骨髓基质干细胞分泌足量VEGF超过1周;血管计数发现VEGF质粒和骨髓基质干细胞能促进血管生成,但体外转染VEGF的细胞疗效更显著;VEGF质粒或其转染的骨髓基质干细胞对珊瑚人工骨材料的吸收具有促进作用。结论:VEGF基因重组的细胞能够持续表达高于正常水平的VEGF,并且能够在一定程度上促进人工骨材料的吸收。

摘要：目的　探讨抗血管内皮生长因子1 65(VEGF1 65)核酶的设计合成及其生物学活性 .方法　利用计算机辅助设计针对 VEGF1 65的锤头状核酶 ,构建核酶的自剪切转录载体p GEMRz2 12 ,体外转录合成核酶 Rz2 12及其相应的底物VEGF1 65m RNA,在无细胞体系中观察核酶对靶 RNA的切割作用 .结果　构建的自剪切转录载体在转录的过程中发生了自身剪切 ,并释放出目的核酶 Rz2 12 ,该核酶具有切割VEGF1 65m RNA的作用 .结论　计算机辅助设计的 VEGF1 65锤头状核酶体外可有效切割靶 RNA。

摘要：背景： 多种生长因子在肌腱愈合过程中参与调控细胞的增生和基质合成，血管内皮生长因子在组织愈合和再生中发挥重要作用。目前对于血管内皮生长因子在肌腱内源性愈合方面的研究尚不多。目的：观察兔跟腱局部硅胶管阻隔后，应用血管内皮生长因子对跟腱内源性愈合作用的量效关系。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-11/2008-04在中南大学湘雅二医院中心实验室完成。材料：健康家兔48只，体质量2.5~3.0 kg，随机均分成空白组、血管内皮生长因子100，50，10 ng组，每组12只，用于建立跟腱损伤模型。方法：切开家兔右侧跟腱表面皮肤、皮下组织，钝性分离跟腱的腓肠肌束支和比目鱼肌束支，于跟骨止点上方约2 cm处横行切断跟腱腓肠肌束支，将2 cm长硅胶管套入一侧断端，5-0缝合线改良Kessler法缝合跟腱，缝合后将硅胶管覆盖跟腱缝合处，空白组硅胶管内不加药，其他3组于手术当日及术后第7，14，21天往硅胶管内加入血管内皮生长因子100，50，10 ng。主要观察指标：术后2，4，6周，每组各取4只家兔行大体标本肉眼观察及组织学观测。结果：术后6周，各组硅胶管外与周围组织粘连较2，4周时减轻，需钝性或用手术刀分离一面，各组肌腱粘连程度分级差异均无显著性意义（P 〉 0.05），管内跟腱断端完全被牢固的新生跟腱纤维组织所连接，各组均愈合良好，血管内皮生长因子100，50，10 ng组较空白组愈合质量好（P 〈 0.05）。术后2，4，6周，血管内皮生长因子100，50 ng组成纤维细胞数较血管内皮生长因10 ng组多（P 〈 0.05），血管内皮生长因子100，50 ng组成纤维细胞计数差异无显著性意义（P 〉 0.05），3组胶原水平无差异，血管内皮生长因子100，50，10 ng组成纤维细胞计数及胶原水平均高于空白组（P 〈 0.05）。结论：不同剂量外源性血管内皮生长因子均能促进成纤维细胞的增殖和成熟，增加胶原的分泌，促进胶原纤维的成熟，从而促进跟腱的内源性愈合。100，50 ng血管内皮生长因子对促进跟腱愈合效果要优于应用10 ng，100 ng与50 ng之间无明显差异。

摘要：背景特异性地抑制视网膜中血管内皮生长因子（VEGF）的过度表达，有望成为有效抑制新生血管的方法。RNA干扰（RNAi）可高效、特异地抑制体内特定基因的表达，眼局部应用小干扰RNA（siRNA）对身体其他组织基因的干扰小。目的探讨在小鼠氧诱导视网膜病变（OIR）模型中VEGF的siRNA对视网膜中VEGF和新生血管的抑制作用。方法设计并体外合成表达VEGFsiRNA的质粒[psi—HITM／增强型绿色荧光蛋白（EGFP）／VEGFsiRNA]。小鼠血管瘤内皮（EOMA）细胞在不含抗生素的DMEM培养液中进行培养，细胞融合达70％时分为5个组：空白对照组培养孔培养基中无任何添加物，阴性对照组培养孔板内加入1μlLipofectamine TM2000和空质粒psi—HITM／EGFP，3个siRNA组中分别在培养孔板内加入1μl Lipofeetamine TM 2000＋40、50、60nmol／L质粒psi—HJTM／EGFP／VEGFsiRNA。分别利用实时定量PCR（real—timePCR）和Westernblot法检测EOMA细胞中VEGFmRNA和蛋白的表达，以筛选最佳干扰效率的VEGFsiRNA浓度。64只出生7d的C57BL／6J小鼠采用随机数字表法随机分为正常对照组（在正常氧环境中喂养）、模型对照组（不进行玻璃体腔内注射）、空质粒组和siRNA组，其中后3个组小鼠在氧体积分数（75±2）％的氧箱内饲养5d，然后置于正常氧环境中制备OIR动物模型。空质粒组和siRNA组于出生后12d（P12）小鼠玻璃体腔内分别注射psi—HI。”／EGFP和Lipofectamine…2000各0．5斗l混合物及psi—HITM／EGFP／VEGFsiRNA（60nmol／L）和LipofectamineTM2000各0．5μl混合物，各组P17小鼠经高相对分子质量荧光素（FITC—dextran）灌注后制备视网膜铺片、视网膜切片和视网膜标本，分别观察视网膜新生血管的变化及突破内界膜新生血管内皮细胞数，应用real—timePCR和Westernblot法检测视网膜中VEGFmRNA及其蛋白的表达。结果体外细胞转染实验表明，空白对照组、阴性对照组及40、50、60nmol／LsiRNA转染组EOMA细胞中VEGFmRNA和蛋白表达的总体比较差异均有统计学意义（F=148．890，P〈0．001；F=306．960，P〈0．001），各浓度siRNA组细胞中VEGFmRNA表达均明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（t=73．950、119．890、156．480，均P〈0．001）。各浓度siRNA组细胞中VEGF蛋白的表达明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（t=15．452、23．344、42．119，均P〈O．001），以60nmol／LsiRNA组作用最强。动物实验结果表明，与模型对照组和空质粒组比较，siRNA组小鼠视网膜无灌注区和新生血管丛明显减少，突破内界膜血管内皮细胞的细胞核数减少。正常对照组、模型对照组、空质粒组和siRNA组小鼠视网膜中VEGFmRNA的相对表达量分别为1．23-＋0．18、4．02±0．16、3．98±O．19、1．98±0．12，总体差异有统计学意义（F=369．780，P〈0．001），其中模型对照组和空质粒组VEGFmRNA表达明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（t=37．880、37．336，P〈0．001），而siRNA组小鼠视网膜VEGFmRNA的表达较正常对照组下降50．8％，差异有统计学意义（t=10．183，P〈0．001），siRNA组小鼠视网膜VEGF蛋白的表达量较模型对照组下调68．0％，差异有统计学意义（t=11．473，P〈0．001），但仍高于正常对照组，差异有统计学意义（t=2．422，P〈0．001）。结论VEGFsiRNA可在体外和体内有效下调视网膜中VEGF的表达，抑制视网膜新生血管的形成。

摘要：背景:研究证实,体外培养中他汀类药物可显著增加血管内皮祖细胞的数量,同时可以使血管内皮生长因子的含量明显增多。目的:验证阿托伐他汀对家兔股骨头缺血性坏死骨组织中血管内皮生长因子表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008-11在武汉大学人民医院骨关节外科完成。材料:健康成年新西兰大耳白兔45只,体质量2.5～3.5kg,雌雄不限。随机分成空白对照组、模型组和阿托伐他汀组,每组15只。方法:模型组和阿托伐他汀组应用液氮冷冻法建立家兔股骨头缺血性坏死模型,阿托伐他汀组于造模成功后2周开始用阿托伐他汀灌胃,空白对照组和模型组灌服等量的生理盐水。主要观察指标:于第4,8,12周每组随机各取5只动物处死,进行大体、X射线及组织学观察;以免疫组织化学法检测股骨头血管内皮生长因子蛋白表达和反转录-聚合酶链反应法检测血管内皮生长因子mRNA水平。结果:模型组和阿托伐他汀组血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达明显低于空白对照组,但阿托伐他汀组喂药后的第8,12周血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达水平明显高于模型组(P<0.05)。结论:阿托伐他汀能够提高家兔股骨头缺血性坏死骨组织中血管内皮生长因子蛋白和mRNA的表达。

摘要：背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)具有很强的促进血管生成作用,但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。目的:构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。设计、时间及地点:观察性试验,于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。材料:质粒PDC315-VEGF165自备,质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。方法:运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF,应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。主要观察指标:采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达,反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平,ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。结果:成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达,VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加。结论:VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达,能够获得较高水平的VEGF蛋白。

摘要：背景:目前已经证实成熟脑中存在神经干细胞,如何定向诱导其分化为某种特异性神经元从而替代损伤神经元有效治疗神经系统疾病非常关键。目的:探讨血管内皮生长因子对体内神经干细胞增殖和分化的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在中南大学湘雅医学院人体解剖学及神经生物学系完成。材料:健康雄性SD大鼠24只,随机分为模型对照组、抗体处理组、假手术组,8只/组。方法:模型对照组、抗体处理组大鼠建立海马伞-穹窿横断模型,假手术组大鼠仅做开颅手术。造模后即刻,抗体处理组吸取抗血管内皮生长因子抗体4μL,于损伤侧前囟+0.6mm,外侧+0.6mm,腹侧-5.5mm插入进针;模型对照组、假手术组注射等量生理盐水。主要观察指标:免疫组织化学法观察隔区血管内皮生长因子、巢蛋白、增殖细胞核抗原的表达,计算增殖细胞核抗原增殖指数。结果:与假手术组比较,模型对照组海马伞-穹窿横断后隔区血管内皮生长因子及巢蛋白的表达强度均明显增高(P<0.01);与模型对照组比较,抗体处理组巢蛋白表达强度明显降低(P<0.01)。假手术组增殖细胞核抗原在神经元胞浆内呈弥漫表达,表现为非特异性染色,增殖指数几乎为0;模型对照组出现少量增殖细胞核抗原阳性的神经元,增殖指数为1%;经抗体处理后增殖指数又降为0。结论:隔区损伤后血管内皮生长因子表达增加的同时确实有神经干细胞的出现。血管内皮生长因子的高表达可能是神经干细胞生成与分化的促进因素,是脑损伤后自我修复的基础。