摘要：目的探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人乳腺癌细胞系McF-7血管内皮生长因子-c(VEGF-c)表达的抑制作用。方法设计合成一对编码后可形成小发夹结构针对VEGF-c基因的siRNA的DNA序列,将其连入pRNAT-U6.1/Neo质粒中,构建VEGF-csiRNA表达载体。表达载体进行PcR及测序鉴定,并分别转染McF-7细胞,半定量RT-PcR和免疫组织化学技术检测转染前后McF-7细胞VEGF-c基因表达的变化。结果PcR和DNA测序证实,携带VEGF-csiRNA表达载体构建成功,VEGF-c基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降(P<0.05),在mRNA水平其表达抑制率为61.8;在蛋白表达水平其表达抑制率为78.3。结论本研究构建的VEGF-csiRNA表达载体可有效抑制McF-7细胞VEGF-c的mRNA和蛋白表达,为进一步以VEGF-c为靶点的乳腺癌治疗实验研究奠定了基础。

摘要：目的:利用质粒pSilencer3.1-H_1构建针对人血管内皮生长因子-c(VEGF-c)基因的表达载体,测序鉴定并观察在胃癌细胞中的表达.方法:根据质粒pSilencer3.1-H_1要求设计两对小干扰RNA靶序列,退火形成互补的双链,通过与线性化的pSilencer3.0-H_1相应位点连接、转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,酶切电泳及测序鉴定后转染胃癌细胞株SGc-7901,Western blot检测转染前后VEGF-c基因的蛋白表达.结果:经酶切和测序鉴定,针对VEGF-c基因的siRNA表达载体构建成功.转染胃癌细胞株SGc-7901后,Western blot检测显示VEGF-c基因蛋白表达明显降低,pSilencer3.1-VEGF-c1组抑制效果明显,其抑制率为81.2%,与阴性对照组相比差异具有显著性(P<0.05).结论:成功构建了针对人VEGF-c基因的siRNA表达载体和稳定转染的胃癌细胞株SGc-7901.

摘要：目的研究RNA干扰技术沉默血管内皮生长因子-c(vascular endothelial growth factor-c,VEGF-c)在人肺鳞癌SK-MES-1细胞中的表达情况,为肺癌的RNAi基因治疗提供实验依据。方法设计三组siRNAs(siRNA1、siRNA2、siRNA3),确认VEGF-c-siRNA,构建pGenesil.1-VEGF-c的干涉载体,稳定转染入肺鳞癌细胞株SK-MES-1,通过RT-PcR和Western-blot技术检测VEGF-c在细胞中的表达。结果 siR-NA1、siRNA2、siRNA3组均抑制SK-MES-1细胞增殖,其中siRNA1转染对SK-MES-1细胞VEGF-c增殖有明显抑制作用,其抑制率为72.45%,明显高于空白对照组、空脂质体组、阴性对照siRNA组(P<0.01);siR-NA-VEGF-c组细胞内VEGF-c蛋白表达明显低于空白对照组、空脂质体组,对VEGF-c蛋白表达下调率分别为54%、65%、6%,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰技术能够明显抑制SK-MES-1细胞中VEGF-c的表达,从而抑制肺癌发生淋巴转移。

摘要：目的应用组织芯片技术研究血管内皮生长因子-c(VEGF-c)在乳腺癌中的表达和在乳腺癌区域淋巴结转移中的意义。方法自行设计构建包含乳腺癌、乳腺良性病变和正常对照的组织芯片,结合免疫组化方法检测VEGF-c的表达,分析其与乳腺癌区域淋巴结转移的关系。结果VEGF-c在乳腺癌的肿瘤中心、肿瘤边缘和远处(距肿瘤边界>3cm)腺体的表达阳性率分别为69.4%(68/98)、69.1%(67/97)和52.9%(36/68);在乳腺良性病变和正常乳腺组织的腺上皮细胞则均为阴性表达。在有区域淋巴结转移组中肿瘤中心和肿瘤边缘癌细胞的VEGF-c表达阳性率75.0%(51/68),76.1%(51/67)均显著高于无转移组相应部位25.0%(17/68),23.9%(16/67),P0.05)。结论组织芯片用于多因素比较研究具有高效率、质控好的优点。VEGF-c在人乳腺癌中有高表达,并可能是乳腺癌易发生淋巴结转移的重要因素之一。

摘要：目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌细胞VEGF-c表达,探讨干扰后VEGF-c、NF-κB、bcl-2基因的表达。方法根据人VEGF-c mRNA编码序列,设计RNA干扰的靶点,并用脂质体转染人宫颈癌HeLa细胞,通过RT-PcR法观察转染后肿瘤细胞VEGF-c、NF-κB、bcl-2基因的变化。结果转染siRNA 24h、48h可以使HeLa细胞VEGF-c mRNA含量降低,在24h降低80.63%±0.24%(P<0.001);在48h降低38.9%±0.85%(P<0.01);NF-κB mRNA含量也分别降低,在24h降低37.55±2.76%(P<0.05);在48h降低30.5%±3.82%(P=0.056);bcl-2mRNA含量同时分别降低,在24h降低76.95%±1.91%,(P<0.01);在48h降低64.11%±2.96%,(P<0.05))。结论脂质体介导的VEGF-c siRNA转染HeLa细胞后,可以有效抑制VEGF-c的表达;可能通过下调转录因子NF-κB,抑制抗凋亡基因bcl-2的表达。