摘要：背景：如何解决尿道替代修复材料来源和改善新尿道的血液供应已成为尿道修复与重建研究的瓶颈问题。目的：观察血管内皮祖细胞对尿道缺损修复后改善新尿道组织血液循环的效果。设计、时间及地点：组织工程体内实验，于2006-01／2008-02在郑州大学第一附属医院外总实验室完成。材料：3～5月龄雄性日本大耳白兔13只，1只用于制备骨髓源单个核细胞，剩余12只随机分为细胞修复组8只，模型组4只。方法：无菌抽取兔两侧髂前上嵴骨髓，Percoll法贴壁分离培养单个核细胞，加入含VEGF、bFGF的培养基进行体外诱导分化，待细胞长满培养瓶底后胰蛋白酶消化传代。两组兔均建立尿道缺损模型，将脱细胞处理的无菌新鲜人羊膜修剪成1cm^2置于尿道缺损处，用0／6DG线将其两端分别与尿道残端连续缝合，形成尿道。细胞修复组将传至第3代的兔骨髓源单个核细胞浓度调整至10^10L^-1，注射于新尿道两端的吻合口处，每处0．1mL，0／6DG线间断缝合皮下组织覆盖成形后的尿道，并在近吻合口处和新修复尿道之中间处注射细胞悬液，每处0．5mL；模型组在同样位点注射等量的空白细胞培养液。移植后4，12周制作尿道组织石蜡切片。主要观察指标：细胞形态及鉴定结果，修复后尿道组织的血管再生情况。结果：兔骨髓源单个核细胞在体外呈贴壁生长，4d后生长加速，呈克隆样生长；第10天出现典型的铺路石样改变，并迅速表现出条索状、草束状生长形式；所培养的细胞表型由CD34^＋／CD133^＋／CD31^＋逐渐转变成CD34^＋／CD133^-／CD31^＋。与模型组比较，移植后第4，12周细胞修复组尿道组织内毛细血管再生数量均明显多于模型组（t=-9．034～5．985，P〈0．01）。结论：兔骨髓源单个核细胞可在体外诱导分化为血管内皮祖细胞，且血管内皮祖细胞对改善尿道缺损修复后局部血液循环的效果非常明显。

摘要：背景:人体内存在一种能以血管发生方式形成新生血管的内皮祖细胞,更新了传统意义上的出生后血管生成、血管损伤修复的理论。目的:观察犬脐血血管内皮祖细胞移植对梗死心肌血管形成的影响。设计、时间及地点:细胞学体内实验,于2006-05/2007-03在新华医院实验中心完成。材料:接近足月的妊娠杂种犬1只,用于制备脐血血管内皮祖细胞;成年犬36只,随机分为细胞移植组、模型对照组,18只/组。方法:2组犬均于冠状动脉前降支第1对角支分出后结扎建立急性心肌梗死模型。细胞移植组向冠状动脉内注射含5×106个血管内皮祖细胞(经BrdU标记)的生理盐水2mL,模型对照组同法注射单纯等量生理盐水。移植后1,4,8周处死取材。主要观察指标:心肌标本苏木精-伊红染色确认梗死模型,BrdU免疫组化染色观察心肌血管新生情况,vW因子染色观察梗死心肌血管数。结果:心肌梗死区可见大量的瘢痕组织、成纤维细胞以及小血管形成。细胞移植组梗死心肌区小血管上可见部分细胞核内有棕黄色颗粒,BrdU呈阳性表达;模型对照组无明显新生血管。细胞移植组在心肌缺血区和梗死区血管内皮细胞的胞浆内有棕黄色颗粒,vW因子呈阳性表达;模型对照组不表达vW因子。心肌梗死后第1,4,8周,细胞移植组和模型对照组的心肌缺血区、梗死区的血管数均无明显差异(P>0.05)。结论:犬脐血血管内皮祖细胞移植至梗死心肌后可参与血管形成,但尚不能够促进心肌的血管再生。

摘要：目的:通过观察人脐血内皮祖细胞(EPC)在裸鼠体内缺氧状态下分化成内皮细胞的现象,初步研究其促进血管重建的作用。方法:根据EPC表面标记CD133,采用免疫磁珠法分离培养EPC。设计EPC裸鼠成瘤实验,观察瘤体内血管增生情况;将荧光标记的EPC注射于裸鼠腹部皮瓣中,观察EPC参与皮瓣血管重建情况;将EPC接种于聚羟基乙酸(PGA)中,移植于裸鼠皮下,观察EPC参与血管重建。结果:原代EPC贴壁后呈梭形,从第7天开始数量明显增加,呈克隆状生长。透射电镜观察到成熟内皮细胞最具特征性的细胞器——Weibel-Palade小体。裸鼠成瘤实验:抗人vWF免疫荧光显示大量EPC参与肿瘤血管生成;裸鼠皮瓣实验:荧光标记EPC参与裸鼠皮瓣血管生成;PGA移植实验:抗人vWF免疫酶组织化学染色显示EPC参与血管生成。结论:EPC参与血管重建,具有促进血管新生,加速缺血组织血管化的作用。

摘要：目的基于选择性细胞滞留(selective cell retention,SCR)技术中的细胞与细胞外基质黏附理论,拟设计一种简化多肽表面修饰脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),以期能同时促进骨再生与血管生成。方法选择层粘连蛋白(laminin,LN)α4链核心区域功能肽(LNα4)、环状RGD(cyclic RGDfK,cRGD)和带胶原结构域肽(collagen-binding domain,CBD),固相合成CBD-LNα4-cRGD多肽,表面修饰于DBM,构建DBM/CBD-LNα4-cRGD(以下简称DBM/LN)支架材料。观测DBM/LN形态特征、CBD-LNα4-cRGD表面修饰DBM的稳定性以及CBD-LNα4-cRGD表面修饰对小鼠血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)黏附、增殖以及管腔形成的影响,Western blot验证其影响EPCs血管生成的分子机制。然后,取24只10周龄雄性C57小鼠制备2 mm长股骨缺损模型,分别采用经SCR技术处理的DBM/LN(DBM/LN组,n=12)和DBM(DBM组,n=12)修复骨缺损。术后8周,行影像学检查、血管造影、组织学及免疫荧光染色[CD31、内皮黏蛋白(endomucin,Emcn)、Ki67]观察,评估DBM/LN促进血管生成和骨再生能力。结果材料相关检测显示,与DBM相比,DBM/LN表面更粗糙,但孔径差异无统计学意义(t=0.218,P=0.835);经SCR技术处理后,荧光强度提示DBM/LN支架稳定有效;与DBM相比,CBD-LNα4-cRGD表面修饰后,DBM/LN能黏附更多的EPCs(P<0.05),且增殖速度增加、管腔形成能力增强。Western blot检测示DBM/LN中EPCs表达VEGF、p-FAK和pERK1/2水平显著高于DBM(P<0.05)。动物实验观测显示,与DBM组相比,DBM/LN组骨缺损处血管生成和骨再生能力更强,血管体积和血管表面积差异均有统计学意义(P<0.05),CD31hi Emcnhi细胞数量显著增加(P<0.05)。结论DBM/LN支架材料能促进EPCs黏附、H型血管生成,实现小鼠骨缺损修复中血管生成和骨再生的有效耦联。

摘要：背景血液循环中内皮祖细胞（EPCs）可参与出生后血管再生和内皮损伤后的内皮修复。既往研究证实，青光眼患者血管内皮功能紊乱导致的血管功能失调和眼内血流减少，在青光眼发病过程中有一定作用。而血液循环中EPCs与全身血管内皮功能的调节密切相关。目的观察原发性急性闭角型青光眼（PACG）患者外周血中EPCs数量的变化规律，探讨EPCs在青光眼发病机制中的作用。方法采用队列研究设计，试验为前瞻性研究。选取天津医科大学总医院眼科确诊的PACG患者30例为PACG组，健康体检者20例为正常对照组。所有入选者取外周静脉血2ml，经反复离心过滤后，通过流式细胞仪鉴定EPCs，观察PACG患者周围血中EPCs数量的变化，并对其相关影响因素进行分析。结果人口基线特征比较表明两组间患者年龄、性别、血管危险因素、血液生化指标的差异均无统计学意义（P〉0．05），PACG组患者眼压明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P=0．00）。外周血EPCs为CD34、CD133双阳性反应，PACG组及正常对照组外周血EPCs数量分别为（48±22）个／ml和（65±20）个／ml，两组间差异有统计学意义（P=0．004）。1期与3期视神经损害者外周血EPCs数量分别为（60±19）个／ml和（34±7）个／ml，差异有统计学意义（Z=3．015，P=0．002）。PACG组患者外周血EPCs数量与药物治疗后的平均眼压在一定范围内呈负相关（r=-0．835，P〈0．05），与空腹血糖水平、血脂水平、青光眼病程间均无明显相关性（r=0．343，P=0．227；r=-0．203，P=0．419；r=0．198，P=0．610）。PACG组有心血管疾病与无心血管疾病患者间外周血EPCs计数分别为（56±22）个／ml和（35±15）个／ml，差异有统计学意义（P=0．005）。结论PACG患者外周血EPCs数量较正常人明显减少。研究结果提示EPCs在PACG眼的视神经损伤修复中可能起着一定的作用。