摘要：背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)能与存在内皮细胞表面的特异性受体结合,刺激体内新生血管形成,但在体内半衰期极短,在移植局部难以维持足够的浓度,限制了其临床应用。目的:观察VEGF与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent,EGFP)共表达载体转染对大鼠血管内皮细胞形成新生血管的影响。设计、时间及地点:随机分组设计、对照动物实验,于2004-09/2005-01在中国医科大学附属第一医院器官移植实验室完成。材料:30只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只。质粒pIRES2-EGFP/VEGF165由第四军医大学提供。方法:采用层析法大量提取pIRES2-EGFP/VEGF165质粒,采用阳性脂质体法进行转染,计数1×106血管内皮细胞植入雄性Wistar大鼠肾被膜下。实验组:植入转染质粒pIRES2-EGFP/VEGF165的内皮细胞;空白转染组:植入转染质粒pIRES2-EGFP的内皮细胞;对照组:植入正常大鼠血管内皮细胞。主要观察指标:①转染72h后观察EGFP及VEGF表达情况。②流式细胞仪检测转染效率。③植入后14d苏木精-伊红染色观察植入血管内皮细胞处组织形态学变化。结果:30只大鼠均进入结果分析。①荧光显微镜下实验组内皮细胞有特异性的EGFP表达。②流式细胞仪分析转染效率为13.06%。③实验组血管内皮细胞胞核和胞浆中均有VEGF表达。反转录-聚合酶链反应显示实验组大鼠血管内皮细胞中有人源化VEGF165基因在mRNA水平表达。④移植后14d,实验组大鼠肾被膜下可见成团的新生毛细血管网形成,而对照组及空白转染组虽血管内皮细胞仍存活,但未形成明显血窦。结论:转染VEGF基因是促进内皮细胞早期(14d内)形成新生血管的有效途径。

摘要：背景:Notch信号通路是一条在进化过程中高度保守的的近距离细胞间转导机制系统,广泛地参与各种组织细胞的分化、增殖和凋亡过程,在血管新生过程中参与协调血管内皮细胞的多方面功能,对血管网的形成和重塑起着关键作用。目的:对Notch信号通路的组成以及对血管新生的影响作一综述。方法:电子检索CBM和PubM ed数据库,中英文检索词分别为"Notch信号通路;血管形成;调控机制"和"Notch signaling pathway;angiogenesis;regulation mechanism"。选择性地纳入有关Notch信号通路调控血管形成方面的高质量的文献,排除重复发表文献。结果与结论:共纳入31篇文献。血管形成是复杂的,多阶段性的生物学事件并有着精密复杂的调控方式。Notch信号通过与血管内皮生长因子,BMP-SMAD信号通路、细胞外基质分子等交互对话,直接或间接地参与调控血管新生的各个阶段,而且持续的Notch信号是维持成体血管系统结构与功能的稳定所必需。文章阐明Notch通路调控血管形成的最新进展,且为针对血管疾病设计调控血管新生的治疗方法提供理论基础和治疗靶点。

摘要：胎盘是哺乳动物妊娠期间形成的母胎之间用于物质交换的临时性器官。胎盘血液循环是物质交换的载体,影响着母体正常妊娠和宫内胎儿发育。胎盘血管形成对胎儿的正常生长发育十分重要,其调控机制非常复杂,且胎盘血管形成与动物繁殖性能的发挥有关联。本文综述了胎盘血管形成过程、调控机制及其对动物繁殖性能的影响,为进一步解析动物繁殖性能差异的遗传机制、胎盘血管形成的分子机制提供研究方向。

摘要：背景：基质细胞衍生因子1α是有促进血管生成作用的CXC类趋化因子,研究发现其在调节一些重要组织/器官的损伤修复过程中有重要作用,但对其在皮肤创伤愈合过程中的作用还不很清楚。目的：观察基质细胞衍生因子1α在创面新生血管形成过程中的作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-06/08在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究六室完成。材料：SPF级昆明小鼠60只,雌雄不拘,体质量25-30g;基质细胞衍生因子1α抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品。方法：建立小鼠背部全层皮肤缺损伤模型,分为3组,即对照组,10mg/L基质细胞衍生因子1α抗体组和20mg/L基质细胞衍生因子1α抗体组,每组20只。各组分别在创面及创周连续6d注射不同质量浓度的基质细胞衍生因子1α抗体（0,10,20mg/L）。主要观察指标：创伤后3,4,5,6,7d,以半定量反转录-聚合酶链反应检测创面CD146表达情况,并观察创面微血管密度及创面收缩率。结果：伤后各天,10mg/L抗体组和20mg/L抗体组CD146mRNA表达和微血管密度均少于对照组（P〈0.05）,伤后5,6,7d,抗体组CD146mRNA表达和微血管密度多于3,4d（P〈0.05）;伤后6,7d,10mg/L抗体组创面收缩率低于对照组（P〈0.05）,伤后5,6,7d,20mg/L抗体组创面收缩率低于对照组（P〈0.05）,抗体组间仅在伤后7d差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：阻断创面基质细胞衍生因子1α作用,能够降低创面新血管化程度,从而可能影响创面愈合速度。

摘要：目的:探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在肿瘤发生和血管形成中的作用。方法:采用Clontech公司软件设计靶向人HMGA2基因的5条小干扰RNA(siRNA)序列,常规培养肿瘤细胞系和血管内皮细胞系,利用脂质体2000将HM-GA2 siRNA导入细胞,通过MTT方法和Tran-swell模型检测细胞的增殖和迁移能力,采用小管形成实验检测血管内皮细胞的小管形成能力,荧光定量PCR方法检测细胞内的HMGA2 mRNA的变化。结果:5条siRNA中,HMGA2 siR-NA1、3、5不但能抑制肿瘤细胞的增殖,还可抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和小管形成,尤其以HMGA2 siRNA5最为明显,处理组细胞的相对增长率分别为:Hela 63.2%±6.5%(P<0.01);人肺腺癌SPC-A1,86.8%±3.5%(P<0.01);人脐静脉内皮细胞(ECV-304),58.5%±6.3%(P<0.01);人膀胱上皮细胞株(HUVEC),60.3%±7.3%(P<0.01)。HMGA2 siRNA5抑制两种血管内皮细胞的迁移(P<0.01),并降低HM-GA2基因的表达(P<0.01)。结论:HMGA2除了在肿瘤发生过程中起作用之外,在血管形成中同样具有重要作用。

摘要：目的 探讨驱动蛋白Kif5b对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成的作用。方法 以人Kif5b基因序列为模板设计小发夹RNA(sh RNA)序列,同时设阴性对照sh RNA,均以p LL3.7慢病毒包装系统包装sh RNA,随后感染HUVECs敲减Kif5b蛋白,最后将Kif5b敲减的HUVECs作为Kif5b实验组,阴性对照组作为Kif5b对照组;采用Western blot实验检测2组HUVECs中Kif5b的表达,采用细胞成管实验和细胞划痕实验分别检测2组HUVECs的细胞成管率和细胞迁移速度。结果 Kif5b实验组HUVECs的Kif5b表达较Kif5b对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05);Kif5b实验组HUVECs细胞成管率明显低于Kif5b对照组,差异有高度统计学意义(P<0.000 1);Kif5b实验组HUVECs细胞迁移速度明显低于Kif5b对照组,差异有高度统计学意义(P<0.000 1)。结论 在体外实验中,驱动蛋白Kif5b能够正向调控HUVECs血管形成。

摘要：目的探讨成纤维细胞生长因子结合蛋白(FGF-BP)mRNA在烧伤后肉芽组织和增生性瘢痕组织中的表达及其与微血管形成之间的关系。方法设计地高辛标记的FGF-BP寡核苷酸探针,对10例烧伤后肉芽组织,33例增生性瘢痕和9例正常皮肤进行原位杂交实验,检测各组织中FGF-BP mRNA的表达差异;采用免疫组织化学方法检测各组织中微血管数目差异。结果烧伤后肉芽组织组和增生性瘢痕(<6个月)FGF-BP mRNA表达明显升高,FGF-BP mRNA在增生性瘢痕6个月后逐渐下降至正常水平。肉芽组织组和增生性瘢痕(<6个月)微血管数目明显高于其他各组。FGF-BP mRNA表达与微血管数目成正相关(Spearman R=0.463,P<0.01)。结论FGF-BP可能是影响烧伤后创面愈合和早期瘢痕增生过程中微血管形成的重要因子。

摘要：目的探讨牵张力对三维打印组织血管管腔形成的影响。方法采用实验研究方法。取2020年9月—2021年5月于苏州瑞华骨科医院妇产科生产的3名健康产妇(年龄22~35岁)弃用的脐带组织,提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC);取2020年9月—2022年9月于苏州瑞华骨科医院手外科行创面修复术的10例男性患者(年龄20~45岁)的废弃正常皮肤组织,提取人皮肤成纤维细胞(HSF)。鉴定2种细胞后取第4~6代细胞进行后续实验。以HUVEC、HSF为种子细胞,以聚己内酯、明胶、透明质酸、纤维蛋白原为支架材料,借助三维生物打印技术,构建三维打印血管化组织。将间距6、10 mm的聚己内酯支架及无聚己内酯支架的打印组织分别设为6 mm间距聚己内酯组、10 mm间距聚己内酯组和无聚己内酯组。培养4 d,取10 mm间距聚己内酯组打印组织,采用细胞活力检测试剂盒检测细胞存活情况并计算细胞存活率。培养14 d,取3组打印组织,肉眼观察组织形变情况;行免疫荧光染色,观察组织中纤丝状肌动蛋白排列,观测组织血管管腔直径、总长度与分支数。设计并打印另带有微弹簧结构的上述3组组织,培养9 d,根据力-位移曲线测量打印组织所受牵张力。以上实验样本数均为3。对数据行单因素方差分析、Tukey检验。结果培养4 d,10 mm间距聚己内酯组打印组织细胞存活率为(91.3±2.2)%。培养14 d,无聚己内酯组打印组织形变不明显,6 mm间距聚己内酯组和10 mm间距聚己内酯组打印组织发生明显形变。培养14 d,无聚己内酯组打印组织纤丝状肌动蛋白的排列无特定方向,而6 mm间距聚己内酯组和10 mm间距聚己内酯组打印组织中纤丝状肌动蛋白的排列具有方向性。培养14 d,6 mm间距聚己内酯组和10 mm间距聚己内酯组打印组织血管管腔直径分别为(6.0±1.3)、(10.8±1.3)μm,均明显大于无聚己内酯组的0μm(P<0.05),10 mm间距聚己内酯组打印组织血管管腔直径明显大于6 mm间距聚己内酯组(P<0.05);6 mm间距聚己内酯组和10 mm间距聚己内酯组打印组织血管总长度、分支数均明显短/少于无聚己内酯组(P<0.05),10 mm间距聚己内酯组打印组织血管总长度、分支数均明显短/少于6 mm间距聚己内酯组(P<0.05)。培养9 d,6 mm间距聚己内酯组和10 mm间距聚己内酯组打印组织受到的牵张力分别为(2340±59)、(4284±538)μN,均明显大于无聚己内酯组的0μN(P<0.05);10 mm间距聚己内酯组打印组织受到的牵张力明显大于6 mm间距聚己内酯组(P<0.05)。结论三维打印支架结构能对打印组织施加不同大小的牵张力,可通过调控牵张力大小调控打印组织的血管管腔直径。

摘要：运用RNA干扰技术,针对斑马鱼血管内皮生长因子(VEGF)基因设计并合成了特异性小分子干扰RNA(siRNA),并从血管形成水平研究了siRNA对VEGF基因表达的影响。为了得到能在体内稳定表达的siRNA,进一步以pSilencer4.1-CMVVector为载体,合成了短发夹RNA(shRNA)表达模板并定向克隆到CMV启动子下游,构建了shRNA表达载体。定量碱性磷酸酶染色显示注射合成的siRNA后胚胎新血管生成(angiogenesis)为71.8%,NBT/BCIP血管染色显示表达载体可以引起斑马鱼胚胎肠下静脉、节间血管发育缺陷,原位杂交结果显示胚胎头部及前原肾管部位VEGF表达异常。

摘要：血供对于皮肤的维持和移植至关重要,尽管组织工程皮肤已经商业化并应用于临床,但仍未能很好地实现其血管化。目前,促进组织工程皮肤血管化主要是依靠促血管形成的种子细胞,以及多种生长因子的作用。随着诱导多功能干细胞、静电纺丝,以及生物打印技术的发展,也可以通过设计新型支架,并结合相应的种子细胞和细胞因子,精确地模拟体内生长环境,以促进组织工程皮肤的血管化。本文主要对近年来组织工程皮肤血管化的研究进展进行综述。