摘要：目的:设计针对癌睾抗原PLAC1、PL2L60、MAGE-3的长肽,并检测其免疫活性。方法:利用在线数据库预测PLAC1、PL2L60、MAGE-3的CTL表位,在表位集中区域选取适当长度的长肽,化学合成并纯化后,通过体外和体内活性实验验证长肽是否具有免疫活性。结果:针对PLAC1、PL2L60、MAGE-3预测出HLA-A2限制性CTL表位并设计出7条长肽。体外自提呈、DC荷肽的ELISPOT结果和体外LDH结果显示,PLAC1 P42-64、PL2L60 P169-191、MAGE-3P101-122、MAGE-3 P152-175等4条长肽具有较好的免疫活性;体内ELISA结果显示MAGE-3 P152-175在HLA-A2.1/Kb转基因小鼠中诱导了较多的IFN-γ释放,体内LDH结果显示PLAC1 P42-64、PL2L60 P169-191、MAGE-3 P101-122、MAGE-3 P152-175等4条长肽所诱导的HLA-A2.1/Kb转基因小鼠脾淋巴细胞对靶细胞具有较高的杀伤率。结论:成功筛选鉴定出针对癌睾抗原PLAC1、PL2L60、MAGE-3的4条长肽,可用作免疫治疗疫苗。

摘要：表位疫苗是依据抗原表位来设计的一种新型疫苗。由于具有安全性好、诱导产生特异性免疫反应强,在抗感染免疫、免疫逃避、抗肿瘤免疫中具有良好应用前景。本文就表位疫苗的设计、构建、优化及其在动物疫苗中的应用研究作一综述。

摘要：目的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）在国际上已成为临床诊断急性肾损伤（AKI）的主要生物标志物。该课题主要研制抗人NGAL单抗及探讨其国产化诊断试剂的初步应用。方法预测NGAL抗原表位并结合NGAL的晶体结构,设计合成抗原表位肽并与血蓝蛋白偶联,免疫小鼠制备抗NGAL单抗;人工合成NGAL基因构建原核表达载体p ET-Dsb A-NGAL,诱导表达后分离纯化重组NGAL蛋白,研制NGAL标准品;建立双单抗体夹心ELISA法,检测该方法的线性范围、检测限、灵敏度和精密度,同时检测20份健康对照组和20份AKI患者血清和尿液样品。结果针对NGAL两个表位（21-34aa;58-71aa）分别获得了4株和3株能够稳定分泌抗NGAL单抗的细胞株;ELISA法最低检出限为0.25 ng/ml,标准曲线在2.5-125.0 ng/ml范围内线性良好,批间变异CV值均小于10%;冻干NGAL标准品在4℃稳定达6个月;AKI组血清和尿液中NGAL含量分别为（589.5±75.5）和（89.4±12.4）ng/ml,而健康对照组血清和尿液中NGAL含量分别为（58.8±9.5）和（7.2±1.4）ng/ml;两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论该研究获得了抗人NGAL单抗及其基因工程NGAL标准品并建立了ELISA定量检测试剂,为实现NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化提供了良好的技术基础。

摘要：旨在构建牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)多表位基因与BVDV结构蛋白E0、E2基因的表达载体并检测其免疫效果。从NCBI上获得BVDV的4种具有免疫原性的结构蛋白C、E0、E2、NS3基因序列,利用生物学方法预测其B、T细胞表位;将获得的序列进行连接,重组获得新肽段(命名为AKK),通过生物学在线软件分析AKK序列的二级结构、亲水性、抗原性、三级结构;PCR分别扩增上述基因序列,构建重组表达载体GV658-AKK-E0-E2、GV658-AKK、GV658-E0、GV658-E2,并将上述构建成功的无内毒素重组质粒转染至MDBK细胞,通过蛋白免疫印迹。经PCR扩增获得2910、1170、951和729 bp大小的目的条带,与预计相符;经蛋白免疫印迹验证,在34和68 kDa处有AKK蛋白及E0-E2蛋白的融合表达;经流式细胞术验证显示,在CD3^(+)、CD4^(+)细胞占比上,共表达组极显著高于PBS组,显著高于E0组,与ELISA检测IgG抗体水平结果一致。研究表明,试验成功设计了BVDV多表位序列AKK,并成功构建真核表达载体,AKK、E0、E2蛋白高效表达,共表达组能更好地刺激机体的体液免疫和细胞免疫应答。

摘要：拟建立Th细胞表位预测的自动化、程序化方法。从多肽序列的一级结构出发,将各氨基酸侧链看成一个整体即拟原子,并基于多肽序列中氨基酸侧链间距离和氨基酸侧链的电性特征,构建了能描述多肽序列结构特征的序列特征矢量,简称ζ矢量。选取文献中MHC限制性为14个Ad限制性和14个非Ad限制性多肽序列,分别定义为活性和非活性肽,并以之作为训练集来建立Th细胞表位预测的定量模型。为检验该预报系统的精确性,进行了随机抽样检验和交互检验,结果表明,该预报系统具有稳定性好、预测能力强的特点,该方法还可推广用于人的MHCI、II类表位的预测研究,可望在蛋白质抗原免疫识别、亚单位疫苗分子设计及研制中发挥重要作用。

摘要：目的:研究人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体的增效作用。方法:将C-57BL/6小鼠随机分为对照组、MAP组、人参总皂苷组,MAP组在预测MAGE-12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82-93)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体。人参总皂苷组在MAP抗原肽免疫小鼠的同时,人参总皂苷灌胃给药,0.2mL/20g,每日1次。结果:免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且人参总皂苷组抗体效价高于MAP组,达1∶256。结论:人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体有增效作用。

摘要：免疫相关抗原T细胞表位的鉴定与筛选是疫苗开发的关键之一。目前 ,基于对天然MHC配体或合成肽与MHC分子结合特性的分析 ,若干计算机算法已被用于MHCⅠ /Ⅱ类分子限制性T细胞表位的预测。而且 ,基于对蛋白酶体裂解片段的分析 ,开发了预测蛋白酶体酶切位点的算法。为进一步证实预测的表位肽在体有效性及免疫原性 ,若干实验技术也被相继开发和应用。同时 ,若干方法也被用于检测活化T细胞针对表达特定抗原靶细胞的免疫识别和T细胞活化后所分泌的细胞因子的产生。该文综述了计算机辅助设计在表位筛选中的应用。