摘要：分析了将裹着DNA疫苗的微弹射入表皮细胞技术的现状 ,提出了基于两阶段引射器加速微弹的方法 ,进行了数值模拟 ,得到了不同工况下第二级喷嘴的马赫数等值线、出口截面上的静压、轴线上的速度以及在负压孔产生的负压等分布。在此基础上 ,进行了实验研究 ,测得了外流场的压力、微弹速度和负压孔的负压值。同时 ,还观察了钨微弹的实际分布 ,并以钨粉为微弹射击鸡皮。结果表明 ,模拟数据与测量结果一致性好 ,数值模拟可以指导仪器设计和实际操作 ;微弹分布均匀 ,能射入表皮细胞 ,还可穿透表皮 。

摘要：目的通过体外研究探索人脂肪干细胞(hADSC)促进海水浸泡创面愈合的可能机制。方法利用人表皮细胞系HaCaT细胞和人工模拟海水建立海水浸泡创面导致细胞损伤的体外模型。从人脂肪组织分离、培养hADSC并进行鉴定,建立HaCaT细胞与hADSC共培养体系。利用活细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒与细胞划痕实验等评估HaCaT细胞增殖、迁移能力,并通过蛋白质印迹与实时定量PCR技术检测表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路活化情况。结果在添加了10%海水的培养液中,HaCaT细胞的增殖活力已受到明显抑制,与不添加海水培养的细胞相比差异有统计学意义(P0.05)。添加10%海水培养的HaCaT细胞EGFR/ERK信号通路表达受到抑制,与不添加海水培养的HaCaT细胞及与hADSC共培养且添加10%海水培养的HaCaT细胞相比差异有统计学意义(P0.05)。结论海水可阻碍EGFR/ERK信号通路的激活、抑制HaCaT细胞的增殖与迁移;hADSC可促进EGFR/ERK信号通路的激活,减轻海水对HaCaT细胞增殖与迁移能力的抑制作用。

摘要：目的构建展示角质细胞生长因子（KGF）噬菌体活性肽，检测其促表皮细胞增殖的作用。方法选择4个KGF序列，设计引物；用反转录．PCR法获得3个KGF序列（Pl、P2和P4），直接合成1个KGF序列（P3）；将KGF序列亚克隆至噬菌粒pComb3中；用噬菌体展示技术，将KGF基因片段展示于噬菌体表面；用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测KGF噬菌体活性肽促表皮细胞增殖的作用，测定其在570nm的吸光度（A）值，用免疫荧光法检测其细胞亲和力。结果获得4种KGF基因，构建在噬菌粒pComb3中；通过噬菌体展示技术将其表达于噬菌体的表面。MTr检测的吸光度（A）值结果显示阴性对照组（0．293±0．017）与KGF对照组（0．520±0．043）及4种KGF噬菌体活性肽组（P1～4）（0．469±0．057、0．441±0．048、0．438±0．035、0．446±0．037）间差异均有统计学意义（均P〈0．01），免疫荧光检测结果显示KGF和4种KGF噬菌体活性肽与表皮细胞具有较好的亲和力。结论构建展示的KGF噬菌体活性肽能够显著促进表皮细胞增殖。

摘要：目的通过优化表皮细胞分离条件,最大程度的获得基底层内的表皮细胞。方法采用D ispaseⅡ酶与胰蛋白酶联合消化法分离培养表皮细胞。将D ispaseⅡ酶浓度、胰蛋白酶浓度及其作用时间作为实验因素,利用L 16(44)正交表设计实验,优化最佳分离条件。观察不同分离条件对表皮细胞生长情况、贴壁率、克隆形成率的影响。正交设计的计量资料数据用方差分析。结果D ispaseⅡ酶、胰蛋白酶的作用浓度、作用时间对原代分离的活细胞数无显著影响;胰蛋白酶的作用浓度、作用时间对24h贴壁率有显著影响;胰蛋白酶作用时间显著影响克隆形成率。0.125%D ispaseⅡ酶冷消化10h、0.1%胰蛋白酶37℃消化30 m in,分离的原代表皮细胞克隆形成率最高。结论通过优化表皮细胞分离条件,可最大程度的得到有克隆形成能力的细胞,从而为利用表皮细胞作为人工皮肤的种子细胞奠定基础。

摘要：目的探讨硫氢化钠对经烧伤大鼠血清(下称烧伤血清)干预的大鼠表皮细胞的影响及其机制。方法采用实验研究方法。取10只8个月龄雄性SD大鼠制备正常大鼠血清(下称正常血清),取30只8个月龄雄性SD大鼠制成Ⅲ度烧伤后制备烧伤血清,取分离自10只1 d龄SD大鼠的表皮细胞(第3代)进行实验。将细胞分为用正常血清处理的正常血清组和烧伤血清处理的烧伤血清组,分别于培养1、2、4、6、8 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率,筛选后续烧伤血清干预时间。将细胞分为仅用烧伤血清处理的烧伤血清对照组和用烧伤血清+相应终物质的量浓度硫氢化钠处理的50、100、150、200、250μmol/L硫氢化钠组,烧伤血清干预后培养30 min,同前检测细胞存活率筛选后续硫氢化钠干预浓度。将细胞分为仅用烧伤血清处理的烧伤血清对照组和用烧伤血清+相应试剂处理的单纯硫氢化钠组、单纯格列本脲组、硫氢化钠+格列本脲组,烧伤血清干预后培养5、10、15 min,同前检测细胞存活率筛选后续格列本脲干预时间。将细胞分为烧伤血清处理的烧伤血清对照组和用烧伤血清+相应试剂处理的单纯硫氢化钠组、单纯格列本脲组、硫氢化钠+格列本脲组,按相应试剂处理时间培养结束,提取线粒体采用分光光度计检测细胞色素c氧化酶(CCO)活性,采用蛋白质印迹法检测ATP敏感性钾离子通道蛋白表达水平。除ATP敏感性钾离子通道蛋白检测样本数为3外,其余指标样本数均为10。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验、LSD检验、Bonferroni校正。结果与正常血清组比较,烧伤血清组仅培养4、6 h细胞存活率明显降低(t=4.02、6.42,P<0.05);正常血清组、烧伤血清组组内细胞存活率各时间点总体比较,差异有统计学意义(F=19.74、4.48,P<0.05或P<0.01)。选取培养4 h作为后续烧伤血清干预时间。烧伤血清干预后培养30 min,与烧伤血清对照组比较,仅150、200、250μmol/L硫氢化钠组细胞存活率明显升高(P<0.01)。选取150μmol/L作为后续硫氢化钠干预浓度。与烧伤血清对照组比较,单纯格列本脲组烧伤血清干预后培养5、15 min细胞存活率明显降低(P<0.05),单纯格列本脲组烧伤血清干预后培养10 min及单纯硫氢化钠组各时间点细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01);硫氢化钠+格列本脲组各时间点细胞存活率均明显低于单纯硫氢化钠组(P<0.05)。仅单纯格列本脲组组内细胞存活率各时间点总体比较,差异有统计学意义(F=11.81,P<0.01)。选取培养5 min作为后续格列本脲干预时间。烧伤血清干预后培养35 min,与烧伤血清对照组的(1.62±0.08)nmol·min^(-1)·mg^(-1)、0.682±0.063比较,单纯硫氢化钠组细胞CCO活性[(1.99±0.09)nmol·min^(-1)·mg^(-1)]和ATP敏感性钾离子通道蛋白表达水平(0.932±0.014)明显升高(P<0.01),单纯格列本脲组细胞CCO活性[(1.44±0.09)nmol·min^(-1)·mg^(-1)]和ATP敏感性钾离子通道蛋白表达水平(0.600±0.012)明显降低(P<0.01);硫氢化钠+格列本脲组细胞CCO活性[(1.79±0.06)nmol·min^(-1)·mg^(-1)]和ATP敏感性钾离子通道蛋白表达水平(0.744±0.071)明显低于单纯硫氢化钠组(P<0.05或P<0.01)。结论硫氢化钠能够提高经烧伤血清干预的大鼠表皮细胞的存活率,与减轻表皮细胞线粒体损伤有关,并且由ATP敏感性钾离子通道介导。

摘要：我们设计了一种新的传代方法,在传代之前,先用 DispaseⅡ酶,将培养的表皮细胞片整个消化下来,再用0.25—0.3%胰酶冷消化将表皮细胞驱散,进行1:2传代获得成功,传代59次成功率为71.2%。若在培养后7—16天传代,成功率可达80%。本文讨论了此种传代方法比单纯用胰蛋白酶或用胰蛋白酶和EDTA 混合传代方法优越。

摘要：苏教版九年义务教育三年制初中第一册,"观察洋葱鳞片叶表皮细胞"的实验,是初中生物中的重要实验.实验要求学生首先制作洋葱鳞片叶的临时装片,再用显微镜观察.在实验中发现,按教材中所述的制作步骤,学生制作装片的成功率不高.主要原因是制作的装片有气泡,以致影响实验的观察效果.经过多次的试验和摸索,笔者发现了产生气泡的主要原因,并找到了改进的途径.如果从以下几点改进,就可以制成无气泡的临时装片.现将改进方法总结如下,供同行参考.

摘要：为建立特异性检测线虫表皮细胞自噬流的工具,以利研究自噬在发育、免疫和结构损伤等方面的作用,利用表皮特异性启动子DPY-7P构建表皮特异性表达串联荧光标记的LGG-1/LC3的转基因虫株(DPY-7P::GFP::mCherry::LGG-1);然后根据GFP和mCherry PH稳定性的差异设计通过测量红绿信号比值判断自噬小体和自噬溶酶体的方法;并通过RNAi敲降自噬调节因子LET-363/mTOR和RAB-7/RAB7A,验证了该报告系统的定量方法可有效反映自噬流的激活和阻断。进一步利用该报告系统证实表皮机械损伤可在远离伤口的区域诱发自噬,并发现机械损伤可能激活伤口附近的溶酶体。综上,该报告系统可为深入探究表皮自噬的机制与生理意义提供有效的研究工具。

摘要：组织工程皮肤是修复皮肤急、慢性缺损的重要生物活性材料,种子细胞对其修复效果起着至关重要的作用。本文对近年来组织工程皮肤种子细胞的研究进展作一综述。1表皮细胞与成纤维细胞（fibroblast,Fb）角质形成细胞（keratinocytes）是表皮的主要组成部分,

摘要：几个生物实验的改进与设计郧西一中彭晓映（４４２６００）一、“根的向水性和向肥性”实验我们在做“根系向水生长”的实验时，用锥有小孔的废弃饮料瓶代替原实验中带孔的花盆，效果较好。其做法是：取一小木箱（较硬的纸箱亦可），拆去一边用一块玻璃代替。将较细的沙装...