摘要：目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( ***) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 *** JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。

摘要：根据环形泰勒虫TaA12 72 1株裂殖体表面抗原 (TaSP)基因的序列设计了 1对引物 ,用PCR扩增出该基因长为 393bp的高免疫原性区片段 (SBxp)。将扩增产物连接到 pGEM TEasy载体上 ,转化入大肠埃希氏菌JM 10 9中进行克隆。随后将重组质粒 pGEM SBxp和表达载体 pGEX 4T 1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后 ,将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体 pGEX 4T 1 SBxp ,并将其转化到BL2 1宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后 ,阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS PAGE电泳和Westernblotting检测。结果 ,SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 4 3ku的融合蛋白 ,该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。

摘要：背景:变异链球菌是龋病的主要致龋菌,针对介导变异链球菌非蔗糖依赖性黏附的重要毒力因子SpaP的基因疫苗在理论上能对抗变异链球菌黏附于牙面和进一步破坏牙体硬组织。目的:构建变异链球菌表面蛋白P区(SpaP/P)真核表达质粒pVAX1-spap/P,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:通过基因重组技术,构建真核表达质粒pVAX1-spap/P,并经酶切分析、测序分析鉴定正确后,采用脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,然后经免疫组织化学SABC法检测其在细胞中的表达。结果与结论:真核表达质粒pVAX1-spap/P经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切分析,证实携带1.2kb的目的基因spap/P片段,经测序分析,目的基因正向插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-spap/P转染的细胞胞质呈褐色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。证实实验成功构建真核表达质粒pVAX1-spap/P,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。

摘要：目的:通过检测菌斑内变异链球菌及表面蛋白和葡糖基转移酶含量,分析变异链球菌及其毒力因子与龋病发生的关系。方法:①通过genbank数据库检索变异链球菌标准菌株UA159及spap和gtf基因序列。利用DNAstar软件对所设计探针进行分析,之后进行探针的特异性检测;②选择50例成人牙菌斑常规厌氧培养加凝胶成像系统菌落自动计数;③利用设计的荧光探针结合流式细胞仪,对22例牙菌斑进行分选检测。利用统计学软件SPSS10.0,对结果进行统计学分析,在α=0.05水平有统计学意义。结果:①毒力因子(表面蛋白spap和葡糖基转移酶gtf)探针和变异链球菌特异性探针与变异链球菌标准株UA159和OMZ175特异性结合,与其他细菌则无结合;②常规培养方法检测发现菌斑内变异链球菌在总菌中的比例范围为20%～94%,有龋和无龋者菌斑中变异链球菌比例分别为59%,51%,差异无统计学意义(P>0.05);③FISH技术检测变异链球菌的比例范围为27%～67%,有龋和无龋者菌斑中变异链球菌比例分别为49%,32%,差异有统计学意义(P<0.05)。毒力因子spap在有龋和无龋菌斑中平均秩次为15.14和5.13,差异有统计学意义(P<0.05);gtf在有龋和无龋菌斑中平均秩次为14.93和5.50,差异有统计学意义(P<0.005)。结论:①本研究所设计的spap、gtf探针具有较理想的特异性与敏感性,能进一步应用于口腔变异链球菌FISH检测;②有龋者菌斑内含毒力因子变异链球菌在全菌中比例明显高于无龋者,为判断龋病发生的风险性提供实验依据。

摘要：根据金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD基因序列设计特异性引物,以金黄色葡萄球菌标准菌株基因组为模板进行PCR扩增,获得了大小为2 043bp的基因片段。将基因片段连接至表达载体pET26b,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果表明,SdrD基因获得了较好的表达,重组蛋白的分子质量约为99ku。利用免疫亲和层析对目标蛋白进行纯化,获得了纯度较高的目标蛋白。用该蛋白免疫新西兰白兔制备了多克隆抗体,抗体效价达到1∶23 000,为金黄色葡萄球菌基因工程疫苗的开发与性能评价,以及该致病菌免疫检测技术的开发奠定了基础。

摘要：为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白（pgk）免疫原性，并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价，本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列，设计一对引物，以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列。

摘要：龋病是一种以变形链球菌为主的致龋菌引起的感染性疾病,起始于变形链球菌在牙面的黏附和聚集。使用疫苗诱导机体产生抗体,阻止细菌与宿主细胞受体的黏附和细菌在口腔内定植,可能是防止致龋菌感染的最有效手段。变链菌的黏附相关因子主要有葡萄糖基转移酶(GTFs),葡聚糖结合蛋白(Gbps)和变形链球菌表面蛋白(PAc)等,针对这些黏附因子设计的防龋疫苗具有广阔的前景。本文就变形链球菌黏附相关分子的特点及其针对性防龋疫苗的研究进展做一综述。

摘要：10月26日美国科研团队发现一种能“嵌入”流感病毒表面蛋白的抗体,通过分析这种抗体的结构,发现这种抗体将一个环状结构嵌入神经氨酸酶的活性部位,阻止了神经氨酸酶从细胞表面释放新的病毒颗粒。其只阻断神经氨酸酶的活性部位,而不同流感毒株间的活性部位几乎不发生变异,因此它对多种流感病毒均有效。目前研究人员正在以抗体1G01为基础设计新的流感药物和疫苗。