摘要：在裂殖酵母基本培养基的基础上,通过正交设计.优化了培养基6个组分;优化后的培养基,摇瓶发酵,目的蛋白产量在26-51 mg/L之间,发酵罐的批次发酵,产量在51-102 mg/L之间。

摘要：在大曲白酒的发酵过程中,大曲所提供的微生物群对白酒的风味具有决定性影响。乙酸乙酯作为衡水老白干酒的主体香,其最终发酵含量的多寡是直接衡量糖化发酵剂--大曲品质的关键。通过正交实验设计,模拟和优化该酵母的产乙酸乙酯条件,结果表明:当温度28℃、起始酸度0.2%、起始酒精度5%时,所得乙酸乙酯浓度最高,为38.5 mg/100 mL。实验结果为进一步探讨使用该菌种来强化大曲产乙酸乙酯提供了基础数据。

摘要：目的利用TOPO克隆法构建SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母重组表达载体,并验证重组载体在宿主细胞中的稳定性。方法运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从SARS-CoV RNA中扩增出M蛋白基因,AT克隆构建出序列正确的pMD18-T-M重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-M载体上亚克隆出M蛋白基因,与裂殖酵母表达载体pNMT1-TOPO进行TOPO克隆,构建出重组表达载体pNMT1-M,转化TOP10感受态细胞,菌落PCR鉴定阳性转化子后进行测序鉴定。将序列正确的pNMT1-M重组载体电转化入裂殖酵母TCP1菌株中,在EMM培养基中诱导表达,连续传代100代,在EMM+T培养基中验证其稳定性。结果RT-PCR获得666 bp的片段,pMD18-T-M重组载体经测序验证序列正确;重组表达载体pNMT1-M经菌落PCR和测序鉴定均正确;重组裂殖酵母菌经诱导后,SDS-PAGE检测出了表达条带;重组表达载体连续传代后,未发现丢失现象。结论成功地构建出了SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母表达载体,验证了其在裂殖酵母中能稳定地进行遗传,为下一步的表达优化、活性和功能研究垫定了基础。

摘要：根据裂殖酵母的β-葡萄糖苷酶的基因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体pYD1上的多克隆位点设计引物,从裂殖酵母中提取总RNA,然后反转录扩增得到β-葡萄糖苷酶基因(bglA),把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYD1-bglA,并转化用于表面展示的酵母EBY100菌株中,得到酵母转化子,提取酵母菌的DNA通过PCR扩增证实了β-葡萄糖苷酶基因已整合到酵母基因组中.以不含载体和含空载体的酵母菌为对照,加2%(w/v)的半乳糖诱导48 h后,利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了来源于裂殖酵母的β-葡萄糖苷酶展示在酵母菌细胞表面,并对其酶学性质进行分析研究.