摘要：目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

摘要：目的 研究抑制MDC1基因的蛋白表达对裸鼠移植瘤的影响,观察裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化。方法 根据MDC1 mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列和阴性对照序列,并与载体pSIH1-H1-copGFP形成重组质粒,RT-PCR和蛋白印迹法测定MDC1 mRNA和蛋白表达水平,筛选出阴性转染组（ECA109-N）、MDC1转染组（ECA109-M）细胞,将其接种裸鼠分为ECA109-M、ECA109-N、ECA109组,上述各组又分为^60Coγ射线照射组和未照射组。观察各组裸鼠移植瘤照射后体积变化,蛋白印迹法检测移植瘤组织中CHK1、CHK2、CHK2T68表达水平,流式细胞仪分析裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和细胞凋亡情况。多组样本均数间的比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果 成功构建pMDC1-shRNA质粒并转染ECA109细胞,获得稳定转染细胞ECA109-M。所有接种裸鼠均成活并在接种后1周左右可见裸鼠爪下形成移植瘤,各组之间肿瘤大小相近（P〉0.05）。15 Gy照射后单纯照射组和空载照射组裸鼠的肿瘤生长速度慢于未照射组（P〈0.05）,其中MDC1转染联合照射组较阴性对照组和空白组肿瘤相对生长速率降低（P〈0.05）,生长抑制率升高（P〈0.05）。MDC1转染联合照射组q值为1.36。MDC1转染联合照射组裸鼠体内CHK1和CHK2的蛋白表达水平相近（P〉0.05）,但CHK2T68磷酸化水平明显降低（P〈0.05）,各组裸鼠肿瘤组织中细胞周期分布和凋亡细胞比例也相近（P〉0.05）。结论 RNA干扰降低MDC1蛋白表达后可有效增强细胞的放射敏感性,表现为抑制了^60Coγ射线照射后裸鼠移植瘤的生长速度。

摘要：目的探讨E6相关蛋白（E6-AP）调节膜联蛋白A2的表达,对三阴性乳腺癌（TNBC）裸鼠移植瘤的影响。方法于2014年4~10月,选择40只雌性BALB/C-nu裸鼠为研究对象。按照随机数字表法,将其分为实验组（n=20）与对照组（n=20）。两组TNBC裸鼠移植瘤模型构建：设计针对E6-AP-RNA干扰靶点序列,将小干扰RNA（siRNA）片段转染至TNBC细胞株MDA-MB-231,再将此细胞株皮下注射于实验组裸鼠;而对照组裸鼠则皮下注射等量未转染E6-AP siRNA的TNBC细胞株MDA-MB-231。观察两组裸鼠移植瘤成瘤情况。采用Western blotting法检测两组TNBC裸鼠移植瘤E6-AP及膜联蛋白A2的相对表达量,采用免疫组化法检测两组TNBC裸鼠移植瘤膜联蛋白A2阳性表达率,并对这些指标进行统计学分析。本研究实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。两组裸鼠的周龄及体重等资料比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结果 1成功构建两组TNBC裸鼠移植瘤模型,成瘤率均为100%。与对照组相比,实验组裸鼠移植瘤生长较慢,成瘤体积较小。实验组裸鼠移植瘤重量为（0.562±0.032）g,显著低于对照组的（1.202±0.012）g,二者比较,差异有统计学意义（t=96.792,P〈0.001）。2Western blotting检测结果显示,实验组E6-AP相对表达量为11 168±441,显著低于对照组的24 284±636,二者比较,差异有统计学意义（t=75.737,P〈0.001）。实验组膜联蛋白A2相对表达量为8 631±651,亦显著低于对照组的17 976±510,二者比较,差异有统计学意义（t=50.515,P〈0.001）。3免疫组化检测结果显示,实验组膜联蛋白A2阳性表达率为33%,明显低于对照组的58%,二者比较,差异有统计学意义（χ2=5.796,P=0.016）。实验组TNBC裸鼠移植瘤膜联蛋白A2的积分光密度（IOD）值为17 976±239,显著低于对照组的26 565±329,二者比较,差异亦有统计学意义（t=94.439,P〈0.001）。结论在人体内,膜联蛋白A2可能通过E6-AP介导发挥生物学作用。膜联蛋白A2表达降低,可抑制TNBC细胞增殖生长,可能成为TNBC诊断和治疗的新靶标。

摘要：目的:研究siRNA沉默糖体蛋白L31(ribosomal protein L31,RPL31)对人胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,探讨RPL31基因在胰腺癌中可能的作用机制.方法:设计合成靶向人RPL31基因的siRNA及阴性对照siRNA;建立人胰腺癌BxPC-3细胞的Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型,按照移植瘤体积随机化分为3组:溶剂对照组、阴性对照组及RPL31-siRNA干预组;使用RNAi-Mate转染试剂将RPL31-siRNA进行移植瘤瘤内注射,观察各组裸鼠体内瘤体生长速度,绘制肿瘤生长曲线;采用实时定量PCR及Western blot的方法检测移植瘤组织RPL31基因的表达;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测裸鼠皮下移植瘤Ki-67及CD31的表达;原位末端标记技术(TUNEL)检测移植瘤组织的细胞凋亡.结果:与溶剂对照组和阴性对照组相比,RPL31-siRNA注射组裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,移植瘤体积明显缩小,差异具有统计学意义(P<0.05);移植瘤组织中RPL31基因的mRNA水平和蛋白水平表达下调;另外,RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤中Ki-67表达下调(55.78%±4.63%、51.37%±5.05%vs11.08%±1.31%),CD31的表达下调(56.53%±6.03%、44.84%±5.24%vs9.67%±1.39%);RPL31-siRNA注射组裸鼠移植瘤细胞凋亡增加(2.92%±0.54%、3.85%±0.87%vs39.58%±4.02%).结论:RPL31-siRNA可以下调胰腺癌BxPC-3细胞裸鼠皮下移植瘤中RPL31基因的表达,抑制移植瘤的生长,并且还可以抑制移植瘤中Ki-67及CD31的表达,诱导移植瘤细胞的凋亡.以RPL31为靶点的基因治疗有潜在临床应用前景.

摘要：针对端粒酶RNA组分模板区设计合成锤头状端粒酶核酶（teloRZ）,构建了teloRZ基因体外转录质粒PSPT19-teloRZ和真核表达质粒PXJ-neo-teloRZ.用T7/SP6体外转录系统检测了teloRZ对端粒酶RNA组分的体外切割效率,达60％左右.用脂质体介导法,将PXJ-neo-teloRZ导入HeLa细胞和裸鼠移植瘤,结果使HeLa细胞端粒酶活性降至对照细胞的11％～12.5％,细胞生长速度明显变慢,传至19～20代时出现95％凋亡.裸鼠移植瘤注射PXJ-neo-teloRZ　14d后,端粒酶活性下降69％,抑瘤率达62％.实验表明,该核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂,在肿瘤治疗中发挥作用.