摘要：目的探讨mi R-130b在人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的作用,并阐明其分子机制。设计实验研究。研究对象人RB癌组织及细胞系。方法采用荧光定量PCR检测40例RB患者癌组织及相应癌旁组织中mi R-130b的表达情况。采用噻唑蓝比色法(MTT)和蛋白印迹法检测mi R-130b对RB细胞增殖及凋亡能力的影响。通过生物信息学分析预测mi R-130b的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验和蛋白印迹验证。主要指标细胞生存率、细胞凋亡率及荧光素酶活性。结果mi R-130b在人RB癌组织的表达量明显高于配对的癌旁组织(P=0.023);mi R-130b在HXO-Rb44(P=0.008)和Y79(P=0.012)细胞系中的表达量亦高于正常视网膜血管内皮细胞(ACBRI-181)。体外功能实验发现,转染mi R-130b抑制物可显著抑制HXO-Rb44(P=0.004)和Y79(P=0.001)细胞的增殖,并增加HXO-Rb44(P=0.011)和Y79(P=0.027)细胞凋亡。生物信息学分析发现"与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶"(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)是mi R-130b的靶基因。双荧光素酶报告基因试验和蛋白印迹结果显示,mi R-130b可直接与PTEN m NRA 3’-非编码区结合,并抑制其翻译,并最终降低HXO-Rb44(P=0.038)和Y79(P=0.025)细胞中PTEN蛋白表达水平。结论 mi R-130b在RB组织表达上调,mi R-130b通过下调PTEN的表达可促进RB细胞的增殖并减少其凋亡,提示mi R-130b可作为RB基因治疗的一个新的分子靶点。

摘要：目的探讨桑色素对人视网膜母细胞瘤细胞增生抑制及诱导凋亡的作用。设计实验研究。研究对象人视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞。方法不同浓度(0、50、100、150、250μM)桑色素对人视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞作用24、48、72小时后,CCK8法检测肿瘤细胞生存率的变化;细胞周期检查法检测肿瘤细胞周期的变化;用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的变化。主要指标细胞生存率、细胞周期分布、细胞凋亡率。结果桑色素浓度为150、250μM,与桑色素浓度为0、50、100μM作用于Y79细胞相比,检测时间分别在48、72小时时的细胞生存率显著下降(P<0.05),细胞周期G0-G1期显著增多(P<0.05),S期显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05)。较高浓度的桑色素,随着作用时间的延长,引起Y79细胞生存率逐渐下降,细胞凋亡率逐渐增多,具有时间依赖性和剂量依赖性。结论桑色素能够抑制视网膜母细胞瘤增生并促进其凋亡,提示桑色素有望成为治疗视网膜母细胞瘤的有效药物。

摘要：目的探讨视网膜母细胞瘤（RB）中乙酰肝素酶（HPSE）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）、微血管密度（MVD）的关系。方法应用免疫组织化学法检测34例RB石蜡标本及10例正常视网膜组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达，用CD34抗体进行肿瘤血管内皮染色，计数肿瘤微血管密度（MVD）；应用RT—PCR检测18例RB组织中HPSEmRNA、HIF-1α mRNA、VEGFmRNA的表达，分析RB组织中HPSE、HIF-1α、VEGF表达情况及其与肿瘤微血管形成、临床及病理特征的关系。计量资料采用成组设计定量资料t检验、方差分析和q检验；计数资料采用X^2检验、Fisher检验及秩和检验；相关性采用Spearman等级相关分析及kappa检验。结果34例RB石蜡标本中HIF—1α、VEGF阳性表达率为58．8％、64．7％，明显高于正常对照组（X^2=10．784，P〈0．05；X^2=9．269，P〈0．05）。18例RB中HPSE、HIF-1α、VEGFmRNA阳性率为55．6％、44．4％、72．2％，与正常组比较有统计学意义（X^2=8．642，P〈0．05；X^2=6．222，P〈0．05；X^2=9．956，P〈0．05）。HIF-1α、VEGF与MVD的表达呈正相关（r=0．664，P〈0．05；r=0．590，P〈0．05）；RB中HIF-1α mRNA、HPSEmRNA表达与VEGFmRNA表达呈相关性（Z=2．350，P=0．009；Z=2．940，P=0．002）。结论HIF-1α、HPSE可共同作用于VEGF这种促血管生成重要因子，在肿瘤血管形成中起一定作用。

摘要：目的探讨抑制Akt信号通路活性能否提高视网膜母细胞瘤(RB)SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性。设计实验研究。研究对象SO-Rb50细胞株。方法 CCK-8法检测卡铂作用于细胞的IC50值;蛋白印迹法检测Akt、p-Akt、caspase 3、bax、p21蛋白在药物作用前后表达量的改变;流式细胞仪法检测药物作用前后细胞周期的改变。主要指标IC50值,蛋白表达量,细胞周期中各期细胞百分比。结果卡铂作用于SO-Rb50细胞48小时的IC50值为(30.1±5.9)mg/L;分别用5μM和10μM的LY294002抑制细胞Akt信号通路的活性后,卡铂作用于SO-Rb50细胞的IC50值分别为(16.3±0.83)mg/L和(8.64±0.11)mg/L。用卡铂(30mg/L)、LY294002(5μM和10μM)单独或联合作用于SO-Rb50细胞48 h后,细胞Akt活性随LY294002浓度的增加而降低,caspase-3蛋白生成增加,bax蛋白生成增加,p21蛋白在卡铂作用下生成显著增加;LY294002对细胞周期的进程无明显影响,卡铂使G0/G1期细胞百分比从(57.89±2.16)%下降至(12.11±2.87)%,G2/M期细胞从(0.34±0.34)%增加至(43.62±11.01)%,S期细胞无明显变化;两种药物联合作用并未改变卡铂对细胞周期的影响。结论抑制Akt信号通路可提高SO-Rb50细胞对卡铂的敏感性,抑制Akt信号通路可能是提高RB化疗疗效的一个靶点。

摘要：目的探讨基因捕获技术在视网膜母细胞瘤（RB）患者RB1基因突变筛选中的应用。方法实验研究。2010年6月至2014年6月采集北京大学人民医院经病理学检查确诊的17例RB患者的外周血。通过设计RB1基因外显子及侧翼序列的靶向捕获探针，对患者外周血DNA进行测序分析，并采用Sanger法对候选变异进行验证。同时收集患者父母血样进行比较。结果在17例RB患者中，男性12例，女性5例；年龄0．5～23．0岁，平均（3．2±5．2）岁；双眼患者6例，单眼患者11例。4例患者存在RB1基因突变，其中双眼受累2例，单眼受累2例。2例新发现基因突变，包括RB1基因第15外显子c．1408A〉T错义突变，造成异亮氨酸突变为苯丙氨酸和RB1第19外显子0．1960G〉C错义突变，造成缬氨酸突变为亮氨酸。该2例患儿父母均未检测到基因突变。另外2例存在已报道的基因突变位点。其中1例患者的家族史阳性，其父亲为单眼RB患者，患者及其父亲均在第10外显子发生c．1030C〉T无义突变。1例患者发生了第3外显子c．371．372delTA的缺失突变，该父母未检测到基因突变。结论应用基因捕获技术联合Sanger测序可有效筛选RB患者RBI基因突变，发现了2例RB患者新的RB1生殖细胞突变，补充了RB1基因突变谱。

摘要：背景:近年来研究表明视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)的发生和病变的进展除了与已知的Rb1基因有相关性外,可能还有其他抑癌基因的参与。目的:探讨其他可能参与RB发生发展的基因存在的位点,并试图寻找和确定具有监测及预后价值的杂合性缺失(LOH)检测指标。设计:以RB患者为研究对象的病例分析。单位:一所军医大学医院的基因诊断治疗中心。对象:本研究在第三军医大学西南医院基因诊断治疗中心完成,研究对象为1998-05/2001-10在本校三所附属医院门诊就诊的RB患者16例。纳入标准:符合RB诊断标准的年龄小于3岁的患儿;排除标准:有家族遗传史者。其中男10例,女6例;累及双眼者12例,累及单眼者4例。方法:在患者的RB肿瘤及外周血标本中运用荧光聚合酶链反应(PCR)分别扩增13号染色体上14个微卫星DNA标记,分析测定各位点LOH发生率;同时通过家系分析确定位点缺失的遗传学来源。主要观察指标:患者13号染色体上LOH发生频率。结果:16例RB患者中,12例在13号染色体上1个或1个以上位点发生LOH。其中3个位点D13S265、D13S263和D13S153(位于Rb1基因内)LOH发生机率最高。12个LOH阳性标本中有10个位点的缺失被确定发生在父系来源的染色体中。LOH阳性及阴性组RB的确诊时间分别为504和1086d,两组相比差异具有显著性意义(t=2.

摘要：目的观察卡铂在化疗过程中对视网膜母细胞瘤患儿的听力损伤及其严重程度。设计回顾性病例系列。研究对象选择自2009年11月至2011年2月在我院进行卡铂（carboplatin）、依托泊苷（etoposide）、长春新碱（vincristine）方案化疗的视网膜母细胞瘤患者111例,排除相关因素后95例患者（135眼）入选。方法分别在第1、3、6次化疗前进行与年龄相匹配的听力学检查,包括纯音测听（pure-tone audiometry）检查、畸变产物耳声发射（distortion-product otoacoustic emission,DPOAE）检查、听力脑干诱发电位（auditory brainstem response,ABR）检查等。观察化疗过程中双耳听力阈值的变化情况,并判断是否有听力损害。主要指标听力阈值。结果进行化学治疗的平均疗程为5.4次（3~10次）。化疗过程中,95例患者中仅3例出现听力检查结果的异常,其中2例在随后的复查中双耳阈值恢复正常,1例在3次随访听力检查中均提示左耳阈值提高。结论卡铂对视网膜母细胞瘤化疗患者的听力损伤并不常见,程度较轻,但对患儿进行听力监测十分必要。

摘要：目的：分析对治疗后的视网膜母细胞瘤进行眼内手术的结果，并且对眼部及全身结果进行评估。设计：回顾性非比较性病例研究。患者：在视网膜母细胞瘤治疗后进行眼内手术的连续45例患者。主要结果测评：（1）视网膜母细胞瘤的复发，（2）需行眼球摘除术，（3）全身转移。当不存在上述评测结果，总结果判定为满意，而当存在1项或更多结果，则判定为不满意。结果：34例患者（76％）仅接受了白内障手术，单纯巩膜扣带术，或经睫状体平坦部玻璃体切割术1种手术，而11例（24％）患者接受了2种或更多的联合手术。总计16例患者（36％）获得的最终视力好于20／200。不满意的结果包括有14例（31％）视网膜母细胞瘤复发，16例（36％）眼球摘除术，3例（7％）全身转移。5例（20％）接受白内障手术，5例（63％）接受巩膜扣带术和9例（75％）接受经睫状体平坦部玻璃体切割术。在视网膜母细胞瘤的治疗结束与眼内手术的时间间隔在结果满意的患者中为26个月，而在结果不满意的患者中为6个月。结论：在某些特定的临床情况下，对治疗后的视网膜母细胞瘤患者进行眼内手术有充分理由。在大多数病例中，白内障手术是安全和有效的。然而，巩膜扣带术和经睫状体平坦部玻璃体切割术可能伴有视网膜母细胞瘤复发、眼球摘除术和全身转移的高风险性，因此有理由采用谨慎的方法。

摘要：目的探讨眼发育调控基因Pax6在人视网膜母细胞瘤中的表达情况。设计实验性研究。研究对象新鲜视网膜母细胞瘤肿瘤组织6例,正常视网膜组织6例,视网膜母细胞瘤细胞株2例。方法采用逆转录酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹方法检测视网膜母细胞瘤肿瘤组织中Pax6 mRNA和Pax6蛋白的表达,以正常视网膜组织作为对照。同时检测SO-Rb50、Y79视网膜母细胞瘤细胞株中Pax6 mRNA和Pax6蛋白的表达情况。主要指标视网膜母细胞瘤新鲜肿瘤组织及细胞株中Pax6基因的表达。结果RT-PCR和Western蛋白印迹检测显示,在6例视网膜母细胞瘤肿瘤组织及两种视网膜母细胞瘤细胞株中均可见Pax6 mRNA及Pax6蛋白表达。与正常视网膜组织相比较,视网膜母细胞瘤肿瘤组织中Pax6 mRNA及Pax6蛋白表达水平增高(P均<0.01)。结论Pax6基因的异常表达可能参与并导致人眼视网膜母细胞瘤的发生和发展。

摘要：背景视网膜母细胞瘤(Rb)是儿童期最常见的恶性肿瘤,在90%Rb患儿所在的发展中国家,减少死亡仍是一个挑战,且患儿的生存质量较少受到关注。目的总结单眼眼内期Rb患儿疗效、安全性及生存质量,为优化治疗方案和提高治疗安全性及有效性提供证据。设计回顾性非随机对照研究。方法回顾性分析2009年11月6日至2019年9月5日首都医科大学附属北京儿童医院收治的单眼眼内期Rb患儿的临床资料,末次随访日期为2020年4月20日。化疗方案为根据加拿大多中心RB 2003方案改良的北京儿童医院RB-2009方案,并应用810 nm及532 nm激光、冷凝器等技术进行局部治疗。分析保眼率、生存率、死亡原因、不良反应等,并对随访时≥5岁儿童采用儿童生存质量普适性核心量表和儿童生存质量癌症模块量表进行生存质量调查。主要结局指标5年总生存率(OS)和生存质量。结果符合纳入标准的6262例Rb,完成随访168例,中位随访时间51(8~125)月,平均化疗疗程4.19±2.16(1~12)疗程。B期1例,C期3例,D期95例,E期69例。共眼球摘除89只(53.0%),其中D期42例,E期47例;直接眼球摘除30例(33.7%),化疗后眼球摘除59例(66.3%)。成功保眼79例(47.0%),其中D期53例(55.79%),E期22例(31.9%)。预计全部患儿5年总生存率(OS)为95.2%。眼球摘除和保眼治疗患儿5年OS分别为95.5%和94.9%,差异无统计学意义(P=0.78)。5例(3.0%)发生可逆性Ⅰ级听力损害,无Ⅱ~Ⅳ级听力损害发生;所有患儿均发生骨髓抑制,6例次(3.6%)输注PLT,无感染相关死亡发生。106例≥5岁患儿完成生存质量调查,眼球摘除患儿对外貌的自我感觉维度、社会维度和角色维度平均得分均低于保眼患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡8例,D期5例,E期3例,2例因经济原因放弃治疗后死亡,6例复发后颅内转移死亡。结论VEC(长春新碱、依托泊苷和卡铂)方案全身化疗结合局部治疗对单眼眼内期Rb患儿是安全、有效的。颅内转移仍然是Rb相关死亡最常见的原因。≥5岁眼球摘除患儿在外貌自我感觉、社会、角色维度生存质量下降。