摘要：视网膜母细胞瘤 (Rb)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤 ,其发病率有逐渐升高的趋势。Rb的恶性程度高 ,发病早 ,可侵及单眼和双眼 ,对视功能的损害极大 ,甚至威胁生命。自杀基因疗法是目前肿瘤基因治疗中一种具有很大临床应用前景的治疗策略 ,但其用于视网膜母细胞瘤治疗的研究近年才刚刚起步 ,本综述从作用机制 ,旁观者效应 ,设计策略及基础实验的疗效评估等方面介绍近年来视网膜母细胞瘤自杀基因疗法的研究进展。

摘要：目的探讨microRNA-125b(miR-125b)在人视网膜母细胞瘤细胞中多药耐药的作用及其机制。设计实验研究。研究对象人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞。方法用RT-PCR方法检测miR-125b视网膜母细胞瘤细胞株SO-RB50和耐药细胞株SO-Rb50/VCR中的表达变化;化学合成的miR-125b过表达(miR-125mimic组)和抑制载体(miR-125inhibitor组)转染SO-Rb50细胞株,用MTT法和Annexin V-FITC法检测在药物长春新碱、依托泊苷和卡铂,依次作用上述转染细胞后,细胞增生力和细胞凋亡的变化;用蛋白印迹法检测miR-125b过表达和抑制表达后细胞株SO-RB50中MAGE-A/P53蛋白的表达变化。主要指标细胞存活率和细胞凋亡率。结果SO-Rb50/VCR组与SO-RB50组相比,miR-125b的表达显著增高(P=0.002);长春新碱、依托泊苷和卡铂依次作用于转染后的SO-RB50细胞株后,miR-125mimic组与miR-125inhibitor组相比,细胞存活率显著增高(P=0.000),细胞凋亡率显著下降(P=0.000),P53蛋白表达水平显著下降(P=0.001),MAGE-A蛋白表达水平显著增高(P=0.004)。结论在SO-RB50细胞中,下调miR-125b后提高肿瘤细胞对化疗药物敏感性,且miR-125b可能是通过MAGE-A/P53通路调控视网膜母细胞瘤多药耐药性。

摘要：目的分析和探讨儿童视网膜母细胞瘤(Rb)的临床特点。设计回顾性病例系列。研究对象北京同仁医院2009年1月至12月收治的244例(312眼)儿童视网膜母细胞瘤患者的病历资料。方法对上述患儿临床病历资料进行回顾,分析患儿的发病年龄、首诊症状、家族史,肿瘤的临床分期、治疗方法、随诊结果及疗效等。主要指标发病年龄、性别、临床分期、治疗方法及效果。结果 (1)Rb患儿初诊平均年龄(1.97±1.42)岁,中位数年龄1.75岁,3岁以下占83.19%(203/244)。(2)男性137例,女性107例,差异无统计学意义(χ2=0.05,P=0.240)。(3)患儿初诊症状常为白瞳或黄白色反光67.62%(165/244)。(4)244例患儿中8例(3.27%)有家族史,其中双眼发病患儿中7.94%(5/63)有家族史,单眼发病的患儿中仅1.73%(3/173)有家族史。(5)Rb分期:除10眼于入院前眼球已摘除外,余302眼分期:A-C期14.56%(44/302),D期41.39%(125/302),E期44.05%(125/302)。(6)单纯眼球摘除术50例,综合治疗加眼球摘除90例。放疗、化疗结合眼局部治疗、鞘内注射治疗104例。(7)随访12～24个月,244例患儿中,失访及放弃治疗16例(25眼),死亡6例(10眼),死亡率为2.63%(6/228),存活率97.37%(222/228)。结论本组Rb患者发病年龄小,无性别差异,白瞳为最常见首发症状,Rb晚期为多,有一半患者行眼球摘除治疗,2年存活率较高。

摘要：目的建立裸鼠玻璃体腔视网膜母细胞瘤移植瘤模型,观察移植瘤的生长特性,探索适用于视网膜母细胞瘤体内实验的建模方法。设计实验研究。研究对象六周龄雄性BALB/c裸鼠30只。方法30只BALB/c裸鼠随机分为三组,每组10只;体外培养Y79、WERI-RB1和SO-Rb50三株视网膜母细胞瘤细胞,调整细胞浓度为1.0×108个/ml;A组取Y79细胞悬液3μl注射于裸鼠右眼玻璃体腔,B组和C组分别注射WERI-RB1和SO-Rb50细胞,方法同A组。观察肿瘤生长侵袭情况。主要指标成瘤率、成瘤时间及肿瘤侵犯情况。结果三组BALB/c裸鼠右眼玻璃体腔注射肿瘤细胞后,A组成瘤率100%,成瘤时间3天~11周,平均成瘤时间(32.6±5.77)天;B组成瘤率88.9%,成瘤时间16天~14周,平均成瘤时间(57.4±8.42)天;C组成瘤率88.9%,成瘤时间19天~10周,平均成瘤时间(43.7±7.16)天;实验眼肿物经病理证实均为视网膜母细胞瘤。A组发生视神经侵犯7例,B组2例,C组6例;A组发生前房侵犯5例,B组无,C组4例;A组发生虹膜/睫状体侵犯5例,B组无,C组4例;三组均未见脉络膜侵犯;A组发生角膜新生血管3例,B组无,C组3例。结论通过BALB/c裸鼠玻璃体腔注射肿瘤细胞可建立视网膜母细胞瘤移植瘤模型,成瘤率高,Y79和SO-Rb50细胞株移植瘤的侵袭性高于WERI-RB1细胞株。

摘要：干细胞在胚胎发育和维护成年个体细胞的动态平衡中具有重要作用。深入研究胚胎和成体干细胞的调节机制，对于认识肿瘤、变性等多种疾病的发病机制、开发设计新的治疗方法都具有重要意义。视网膜母细胞瘤信号传导通路控制细胞的增生、分化和死亡，该信号传导通路对多种于细胞和祖细胞的生物学行为有重要的调节作用，是未来扩增特定干细胞群体的重要靶通路。

摘要：目的检测在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中,眼发育调控基因PAX6及其下游促分化基因MATH5和BRN3b在蛋白水平的表达情况,从而探讨PAX6基因在RB分化过程中的作用。设计病例对照研究。研究对象新鲜RB组织10例,正常视网膜组织10例。方法实验组:RB组织;对照组:正常视网膜组织。采用WesternBlot法检测新鲜视网膜母细胞瘤组织和正常视网膜组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白质水平的表达情况并作比较。主要指标Pax6、Math5、Brn3b蛋白质的表达水平。结果本研究中RB组织和正常视网膜组织中均可检测出Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达。与正常视网膜组织相比较,RB组织中Pax6、Math5、Brn3b蛋白的表达水平增高(P均<0.001);Math5与Pax6蛋白表达具有线性相关性(r=0.949,P<0.001),Brn3b与Math5蛋白表达具有线性相关性(r=0.927,P<0.001)。结论在RB组织中,PAX6基因上调下游促分化基因MATH5和BRN3b表达水平,促进RB组织的分化。

摘要：目的：评价视网膜母细胞瘤的患者经过6个周期的化疗缩减后出现新发肿瘤的几率。设计：前瞻性非随机的单中心病例系列。环境：费城的Thomas Jefferson大学Wills眼科医院眼肿瘤部，联合费城儿童医院的肿瘤科。参加者：在1995年1月1日到2002年3月31日期间，总共106位患视网膜母细胞瘤的患者共162只眼，接受了6个周期的化疗缩减。干预：所有的患者都接受静脉内给硫酸长春新碱，足叶乙甙和卡铂进行化疗缩减，对于每个肿瘤都联合使用局部治疗(冷冻治疗或热疗)。主要测量的结果：在进行化疗缩减的过程中或之后出现新的视网膜内的视网膜母细胞瘤。复发性视网膜下或玻璃体内肿瘤的种植播散被排除在本次研究之外，而只有原发性新的视网膜内的肿瘤才包括在内。结果：单侧发病的视网膜母细胞瘤患者共28例。在化疗缩减期间或之后，23位散发病例中有2例(9％)，5位有家族史的病例中有4例(80％)出现了新的视网膜内的肿瘤。新发肿瘤位于黄斑区的0例，在黄斑区和赤道区之间的有7例(54％)，赤道区和锯齿缘之间的有6例(46％)。双侧发病的视网膜母细胞瘤患者共78例，在化疗缩减期间或之后，57位散发病例中有11例(19％)。21位有家族史的病例中有8例(38％)出现了新的视网膜内的肿瘤。新发肿瘤位于黄斑区的2例(4％)，在黄斑区和赤道区之间的有30例(55％)，赤道区和锯齿缘之间的有23例(42％)。总体来说，根据Kaplan-Merier分析，在1年随诊期时有23％。5年随诊期时有24％的病例出现了新发肿瘤。通过多因素分析发现，发生新肿瘤的最重要的危险因素是发病年龄较小(中位年龄，2个月有新发肿瘤而9个月没有新发肿瘤)和视网膜母细胞瘤的家族史[12(48％)例患者有新发肿瘤而14(17％)例患者没有新发肿瘤]。结论：接受化疗缩减的视网膜母细胞瘤的儿童应该跟踪随访有无新的视网膜内肿瘤的发生，因随诊5年从化疗缩减开始到新发肿瘤出现的高峰时期之间平均有5个月的时间24％患者受累。新发肿瘤最发生于那些在小婴儿期发病以及有视网膜母细胞瘤家族史的患者中。

摘要：目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因沉默对人视网膜母细胞瘤(RB)增殖和凋亡的影响。方法设计并合成针对MMP-2和MMP-9的特异性小干扰RNA(siRNA)序列,按照实验要求进行分组:空白对照组(未转染的细胞);阴性对照组(转染空载体+阴性siRNA);干扰组(转染空载体+特异siRNA)。利用转染试剂转入体外培养人RB细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR和Western blot验证siRNA的干扰效应,MTT法检测细胞增殖活性、Annexin V/PI检测细胞凋亡。结果 RT-PCR及Western检测结果显示,MMP-2 siRNA和MMP-9 siRNA转染后,与空白组、阴性对照组相比,干扰组MMP-2及MMP-9mRNA水平明显下降,其蛋白表达也明显下调(P<0.05)。MTT结果显示,干扰组细胞OD值及增殖抑制率明显低于空白组及阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡实验同样证实干扰组的细胞凋亡率明显高于空白组及阴性对照组(P<0.05)。结论 siRNA沉默MMP-2和MMP-9的表达可诱导RB细胞凋亡,抑制细胞的增殖,为RB的临床治疗提出新的思路,可以作为RB治疗的一个新靶点。

摘要：目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术逆转视网膜母细胞瘤多药耐药的可行性。方法:将设计合成的针对多药耐药基因MDR1的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体转染具有MDR1基因高表达的视网膜母细胞瘤耐药细胞株SO-Rb50/VCR。用实时定量RT-PCR技术和Westernblot分别测定转染前后细胞MDR1mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达的变化;用CCK-8法和TUNEL法检测转染前细胞株(VCR组),转染后细胞(VCR+siRNA组)对不同浓度长春新碱、依托泊苷和卡铂药物敏感性。结果:VCR+siRNA组较VCR组比较,MDR1基因在mRNA水平和蛋白水平表达显著下降,差异具有统计学意义。随着长春新碱、依托泊苷浓度的升高VCR+siRNA组较VCR组比较,细胞存活率显著降低,差异具有统计学意义。不同浓度的卡铂作用于VCR组、CT组和VCR+siRNA组细胞存活率、细胞凋亡率各组见未见显著性差异。随着长春新碱、依托泊苷浓度的升高,VCR+siRNA组较VCR组比较,细胞凋亡率显著性升高,差异具有统计学意义。结论:在SO-Rb50/VCR细胞中,针对MDR1合成的siRNA能够有效地抑制MDR1mRNA和P-gp的表达,并能恢复肿瘤细胞对长春新碱和依托泊苷的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转Pgp引起的视网膜母细胞瘤多药耐药性。

摘要：目的：评价化疗减瘤后长期的视力结果。设计：评价40个儿童中54例成功进行化疗减瘤的视网膜母细胞瘤的患眼。治疗包括静脉使用卡铂，磷酸鬼臼毒苷，硫酸长春新碱及局部治疗，不包括放疗或手术治疗。所有患者随访5年以上，使用单变量或多变量回归模型对患者及肿瘤数据进行分析，分析其对结果（最终视力达到或好于20／40及达到或好于20／200）的作用。