摘要：目的本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架(MEC),其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点。该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题,为miRNA的合成提供一种简便的方法。方法采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA表达框架。采用TRAP银染色和TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。实时荧光定量PCR法测定端粒长度,MTT法测定细胞活力。annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功构建了靶向hTERT/hTR特异性miRNA表达框架。不同MEC对端粒酶活性的抑制程度不同。端粒酶的沉默可引起视网膜母细胞瘤(RB)细胞G0/G1期生长阻滞,导致细胞凋亡。结论miRNA介导的端粒酶沉默是一种有效抑制RB细胞生长的策略,开发一个强大的系统来充分探索miRNA的作用是必要的。本文构建的MEC显示了强大的RNAi效应,可成为筛选用于RB基因治疗的RNAi靶向序列的有效工具。

摘要：目的·建立1株新的中国汉族人视网膜母细胞瘤细胞系,并研究其基本特征。方法·在无菌环境中,从1例视网膜母细胞瘤患者瘤体标本中分离原代肿瘤细胞,进行培养、纯化与传代。通过细胞免疫荧光、免疫组织化学染色、DNA短片段重复序列(short tandemrepeat,STR)检测、核型分析和全外显子测序等方法,观察并鉴定该细胞系和肿瘤组织形态学特征、遗传学特征及表面标志物。结果·将该细胞系命名为SNPH-Rb-C24,其主要特征为神经起源的肿瘤细胞,表达神经细胞黏附分子1和突触素;STR分型与原肿瘤组织个体来源一致;染色体核型发生复杂改变,但未发现13号染色体长臂改变;与原肿瘤组织皆表现为RB1^(+/+)特征,且基因突变谱相似;具有体内成瘤能力。结论·成功建立1株起源于RB1^(+/+)中国汉族人视网膜母细胞瘤细胞系SNPH-Rb-C24,该细胞系保留了原肿瘤组织的生物学和遗传学特征。

摘要：虽然头颈部结构微细复杂,但高分辨率MRI显著提高了头颈部结构和病变的显示能力。本文论述了定量MRI在视神经炎、甲状腺相关性眼病、视网膜母细胞瘤侵犯筛板后视神经、鼻咽癌、口咽癌、喉癌、甲状腺癌、鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤、涎腺多形性腺瘤、淋巴瘤和炎性假瘤等头颈部疾病的显示与评估、鉴别诊断、分期与分级、疗效评估与预测、预后预测以及发生机制研究方面的作用,并阐明了存在的问题与未来解决思路。未来建议严格做好临床研究设计,确定纳入和排除标准,按照统一的诊断、评估和预测标准,以患者为中心、以临床问题为导向,开展全国多中心大样本量前瞻性研究,进一步提升定量MRI在头颈部疾病诊疗中的价值,并在临床推广应用,提高诊疗水平,保障人民健康。

摘要：目的探讨中药成分苦参碱(Ma)对视网膜母细胞瘤细胞株(HXO-Rb44细胞株)增殖的抑制作用及相关作用机制,为中药综合治疗视网膜母细胞瘤提供实验依据。设计实验性研究。研究对象体外培养的HXO-Rb44细胞。方法0.4mmol/L的Ma分别作用HXO-Rb44细胞12、24、48小时,流式细胞仪检测S期细胞百分比的变化;通过细胞免疫组织化学染色结合计算机自动图像分析技术,测量阳性细胞积分光密度(IOD)值,观察分析Ma对HXO-Rb44细胞内增生靶基因PCNA的调控。主要指标S期细胞百分比(SPF)、积分光密度值(IOD)。结果0.4mmol/L浓度Ma作用HXO-Rb44细胞后,S期细胞百分比下降(P均<0.01),细胞内PCNA蛋白表达水平下降(P均<0.01),并均呈时间依赖性。结论Ma能够抑制HXO-Rb44细胞增殖,提示Ma有望成为治疗视网膜母细胞瘤的有效药物。

摘要：目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因沉默对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞迁移和侵袭的影响。方法设计并合成针对MMP-2和MMP-9的特异性小干扰RNA(siRNA)序列,利用转染试剂转入体外培养人RB细胞株,48 h后收集细胞,RT-PCR和Western blot验证siRNA的沉默效应,Transwell法检测细胞迁移侵袭能力。结果 RT-PCR及Western检测结果显示,MMP-2 siRNA和MMP-9 siRNA转染后,与空白组、阴性对照组相比,干扰组MMP-2及MMP-9mRNA水平明显下降,其蛋白表达也明显下调(P<0.05)。与空白组和阴性对照相比,干扰组迁移、侵袭能力显著降低(P<O.05)。结论 MMP-2和MMP-9表达下调后可抑制RB细胞的迁移和侵袭,为RB的临床治疗提出新的思路,可以作为RB治疗的一个新靶点。

摘要：目的:为在眼球摘除术中剪取最大长度的视神经,确定视神经剪刀的最佳设计及手术进路。方法:用儿童头颅模型及硅球模拟人眼,模拟进行200例眼球摘除术。用直剪刀、轻度弯曲的剪刀和重度弯曲的剪也从颞侧和鼻侧入路进行实验。结果:用轻度弯曲的剪刀,从颞侧和鼻侧入路进行眼球摘除术均可以剪下较长的视神经,而用重度弯曲的剪刀只能剪下较短的视神经。结论:在眼球摘除术中,当期望剪取较长的视神经时,应选用轻度弯曲的剪刀,而避免用重度弯曲的剪刀。

摘要：目的了解全麻查眼底患儿家属的焦虑状况及对护理工作的需求，分析与焦虑有关的因素。方法采用状态一特质焦虑量表和自行设计的调查问卷，对82例已诊或拟诊视网膜母细胞瘤的患儿家属在术前1d进行调查。结果患儿家属状态焦虑、特质焦虑得分均高于常模（男性：t=7．826，P〈0．01；女性：t=15．278，P〈0．01），其状态焦虑主要与患儿家属的性别、手术时与患儿的暂时性分离、担心此次入院疗效不佳等因素有关（P〈0．05）；特质焦虑主要与患儿的化疗史、全麻查眼底手术史以及手术时与患儿的暂时性分离有关（P〈0．05）。家长对护理工作的需求中减轻患儿恐惧占72．0％、护理技术过硬占70．7％、态度和蔼占64．6％、普及疾病知识占48．8％等。结论患者家属的焦虑情况与多种因素有关，应该针对患儿及其家属的特点进行护理，根据其对护理工作的需求为其及患儿提供相应的护理措施，降低患儿家属的焦虑程度，确保患儿在最佳状态下进行手术。

摘要：目的探索聚簇规则间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统对于食蟹猴细胞及胚胎基因组视网膜母细胞瘤抑癌基因(Rb1)的编辑效率,旨在进一步建立视网膜母细胞瘤模型。方法查阅RB1突变数据库(http://***),确定视母细胞瘤发生发展相关Rb1基因外显子区主要有8号外显子;利用DNAman检测人类与食蟹猴基因组中Rb1基因中与是否存在单核苷酸多态性(SNP);通过http://***/***设计并合成sgRNA;采用CRISPR/Cas9基因编辑系统转染食蟹猴成纤维细胞,并提取转染后细胞基因组以检测合成的sgRNA敲除效率;酶切实验检测转染的细胞是否发生突变,并利用单克隆分析测定具体敲除效率。进一步利用显微操作技术注射sgRNA和Cas9 nuclease混合物(RNP)入单细胞胚胎,检测胚胎水平Rb1基因编辑效率。结果 RNP转染后的食蟹猴成纤维细胞提取基因组检测,发现其中有75%的细胞发生基因突变,且基因编辑类型多样,以碱基缺失突变为主;在胚胎水平上获取4-细胞期胚胎,检测单个卵裂球基因组序列发现,存在突变的胚胎占所有胚胎的36.4%,其中纯合突变比例为18.2%,嵌合突变比例同为18.2%。利用软件预测脱靶位点12个,进行序列测定,结果未发现脱靶。结论在非人灵长类细胞及胚胎水平上,CRISPR/Cas9基因编辑系统对于食蟹猴Rb1基因编辑有效,并且敲除效率较高,进一步利用基因编辑方法建立视网膜母细胞瘤模型研究中,可以作为有效的基因编辑手段。本研究得到的食蟹猴胚胎Rb1基因的编辑效率及胚胎囊胚率为建立视网膜母细胞瘤模型提供了参考。

摘要：设计婴儿：据报道，由于英国政府放宽了对人体胚胎（包括胚胎干细胞）研究的限制，世界上第1例“设计婴儿”将于明年3月前后诞生。这名“设计婴儿”是为了避免患先天性视网膜母细胞瘤婴儿的降生而经心营造的，部分视网膜母细胞瘤的发生是在合子（即受精卵）时期便决定了的，原因是精子或卵细胞带有一种有缺陷（或突变）的Rb基因，该基因的缺陷或突变使得成视网膜细胞无限增生，于是婴儿出生后必定罹患该疾患。

摘要：不少肿瘤具有遗传倾向,这种遗传倾向与某些基因相关。因此科学家们设想,如果不让与肿瘤发生有关的基因(即癌基因)伴随细胞的发生与胚胎发育,那么将来出生的个体便可免除癌基因的困扰,也就可能不得癌症了。这种设想即将成为现实,最近《泰晤士报》网站公布:不久之后(估计是明年早春时节),英国将为世人奉献一位无视网膜母细胞瘤的"设计婴儿"。视网膜母细胞瘤又称成网膜细胞瘤,好发于儿童,并且90%发生于三岁之前,也就是说大多数患儿在三岁之前死去。在正常情况下,视网膜细胞含有活性的RB基因,它控制着成视网膜细胞的生长和发育以及视觉细胞的分化。然而RB基因一旦失去功能或先天性缺失,视网膜细胞便会异常增殖,形成视网膜细胞瘤。此外,RB基因对化学致癌物十分敏感,即很易受化学致癌物的作用而失活,这样又使得癌基因趋势活跃起来,促进肿瘤形成,例如有证据表明,小细胞肺癌所以与吸烟有关,是因为烟中的致癌物可以导致RB基因的突变。